miR-155/SOCS1/NF-κB通路在快速眼動睡眠剝奪大鼠免疫失衡中的作用機制①

秦 冰 常淑瑩 劉芳翡 李 莉 胡亞瓊

(河南醫學高等專科學校，鄭州 451191)

睡眠被認為是維持和修復免疫功能必不可少的生理過程，睡眠干擾可影響機體健康從而造成各項生理功能紊亂[1]。影響睡眠的信號通路對于睡眠剝奪的機制尚未明確。miRNA在轉錄后水平上調控靶基因的表達，miR-155在免疫反應中是巨噬細胞、樹突狀細胞甚至上皮細胞中先天免疫應答的關鍵調節劑，在結腸炎T淋巴細胞和B淋巴細胞中發揮作用[2]。下游通路細胞因子信號傳送阻抑物(suppressor of cytokine signaling，SOCS1)/核因子κB(nuclear factor kappa beta，NF-κB)在免疫過程中可調節結腸炎的T細胞極化和擴增來調節黏膜免疫系統影響免疫功能，推測，miR-155/SOCS1/NF-κB通路可能影響睡眠[3]。基于此，本研究建立快速眼動(rapid eye movement，REM)睡眠剝奪大鼠模型，檢測miR-155/SOCS1/NF-κB對REM睡眠剝奪免疫方面的影響。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 清潔級健康SD大鼠由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，動物生產許可證號： SCXK(京)2018-0013，動物使用許可證號：SYXK(京)2018-0037，動物質量合格證號：20190301507，體質量(200±20)g，所有大鼠均在溫度(25±0.5)℃、濕度(55±5)%、12 h光照/12 h黑暗實驗動物中心常規飼養。本動物實驗經河南醫學高等專科學校動物倫理委員會批準，倫理審批號：IACUC-20190108007。

1.1.2主要試劑 改良平臺(直徑6 cm，高8 cm)；日光燈(40 W，深圳市長憶光電科技有限公司)；HE染色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司，貨號：G1120)；大鼠ELISA腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)、IL-1、IL-6試劑盒、一抗SOCS1(抗兔)、NF-κB(抗兔)、內參甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)(抗兔)、二抗羊抗兔(美國abcam公司，貨號分別為：ab208348、ab79277、ab100712、ab3691、ab220803、ab181602、ab6721)；BCA試劑盒、PVDF膜(碧云天生物科技有限公司，貨號分別為：P0012S、FFP32)；miRVana miRNA提取試劑盒(美國Ambion公司，貨號：AM1552)；2×Hi SYBR Green QPCR Mix(日本TaKaRa公司，貨號：ARR041A)；……