乙型肝炎肝硬化患者自身抗體檢測及與生化指標(biāo)和肝纖維化指數(shù)的關(guān)系

冼觀秀 張家明 陳 聰 黃樹通 黎 陽

廣東省湛江中心人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東湛江 324000

自身抗體是多種針對蛋白、核酸、功能細(xì)胞組件或受體等自身組織細(xì)胞成分的抗體，是自身免疫性疾病的重要標(biāo)志[1-2]。隨著臨床研究的不斷深入，藥物性肝炎、乙型病毒性肝炎（簡稱乙肝）、脂肪肝等疾病患者也會檢測出自身抗體[3-4]。有研究顯示，自身抗體陽性并非一定是自身免疫性肝病，與肝慢性纖維化、損傷等也可能存在密切關(guān)系[5]。為此，本研究選擇2017年2月～2019年8月就診于我院的乙肝肝硬化患者84例，旨在分析乙肝肝硬化患者自身抗體檢測及與生化指標(biāo)和肝纖維化指數(shù)的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院于2017年2月～2019年8月接診的乙肝肝硬化患者84例，其中男50例，女34例；年齡24～78歲，平均（55.3±7.7）歲；病程50～85個(gè)月，平均（68.49±3.65）個(gè)月。按自身抗體陽性情況將入組患者分為兩組，陰性組64例，陽性組20例。兩組病程、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《慢性乙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)（2015年版）》[6]關(guān)于乙肝肝硬化相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；認(rèn)知功能正常者；簽署知情同意書；凝血功能正常者。排除標(biāo)準(zhǔn)：酒精性肝損傷者；藥物性肝損傷者；血液系統(tǒng)疾病者；遺傳代謝性肝病者；自身免疫性疾病者；甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染者；伴精神疾患者；心、腎等重要臟器功能不全者。

表1 兩組患者一般資料比較

1.2 方法

（1）自身抗體檢測。自身抗體使用免疫印跡法測定，包括抗sp100抗體、抗肝腎微粒體抗體、、抗線粒體抗體M2、抗著絲點(diǎn)蛋白B抗體、抗核抗體抗gp210抗體、抗Ro52抗體。將抗原膜條放入孵育槽中，滴加1.5mL樣品緩沖液，室溫下?lián)u床輕晃5min，將緩沖液棄去。將1.5mL稀釋血清樣品加入孵育槽中，室溫下?lián)u床輕晃30min，將緩沖液棄去。將已稀釋的清洗緩沖液1.5mL加入孵育槽中，清洗抗原膜條，室溫下?lián)u床輕晃5min，將液體棄去，重復(fù)3次。加入稀釋酶結(jié)合物1.5mL，搖床輕晃30min，用已稀釋的清洗緩沖液洗滌。加入底物1.5mL，搖床輕晃 10min，棄去底物液，純凈水洗滌，重復(fù) 3次。膜條干燥后，檢測結(jié)果按抗原膜條抗原帶著色程度進(jìn)行判斷：陽性，著色深；陰性，著色淺或無著色；臨界陽性，著色強(qiáng)度與臨界線相當(dāng)。（2）生化指標(biāo)。分別采集受檢者5mL空腹靜脈血，離心取上清液。用全自動生化分析儀測定肝功能、免疫球蛋白指標(biāo)，前者包括球蛋白（GLB）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總膽紅素（TBil）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、堿性磷酸酶（AKP）、清蛋白（ALB）；后者包括免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）。（3）肝纖維化指數(shù)。肝纖維化指數(shù)以肝臟瞬時(shí)彈性硬度表示，用法國Aixplorer超聲圖像診斷儀測定，連續(xù)測量10次，結(jié)果取平均值。

1.3 觀察指標(biāo)

記錄入組患者自身抗體檢測結(jié)果，并比較兩組一般資料、生化指標(biāo)和肝臟瞬時(shí)彈性硬度差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較

陽性組平均年齡為（58.4±6.9） 歲，較陰性組的（52.8±8.6）歲大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 自身抗體陽性情況

84例患者中有20例（23.81%）自身抗體至少一項(xiàng)呈陽性，其中抗Ro52抗體8例。抗肝腎微粒體抗體3例，抗著絲點(diǎn)蛋白B抗體5例，抗核抗體13例。

2.3 兩組患者肝功能比較

陰性組ALB水平高于陽性組，陰性組TBil、ALT、AKP、GLB、AST、GGT水平較陽性組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.4 兩組患者免疫球蛋白、肝臟瞬時(shí)彈性硬度比較

陰性組IgM、IgG、肝臟瞬時(shí)彈性硬度較陽性組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；陰性組IgA水平與陽性組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表2 兩組患者肝功能比較（±s）

表2 兩組患者肝功能比較（±s）

組別 n ALT（U/L） AST（U/L） GGT（U/L） AKP（U/L） ALB（g/L） GLB（g/L） TBil（μmol/L）陰性組 64 60.12±18.68 57.10±15.32 54.52±10.65 105.70±29.65 39.80±3.89 28.02±4.09 23.48±7.95陽性組 20 285.59±43.45 277.59±59.98 131.30±26.75 140.89±45.78 34.48±2.72 32.34±5.24 85.40±15.12 t 33.136 27.031 18.845 4.032 5.686 3.847 23.988 P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表3 兩組患者肝臟瞬時(shí)彈性硬度、免疫球蛋白比較（±s）

表3 兩組患者肝臟瞬時(shí)彈性硬度、免疫球蛋白比較（±s）

組別 n 肝臟瞬時(shí)彈性硬度（kPa） IgM（g/L） IgG（g/L） IgA（g/L）陰性組 64 16.82±4.32 1.26±0.35 11.88±2.19 2.90±0.83陽性組 20 26.70±7.65 2.24±0.68 16.29±3.59 2.84±0.75 t 7.302 8.527 6.665 0.288 P 0.000 0.000 0.000 0.774

3 討論

自身免疫作為人體正常的生理現(xiàn)象，當(dāng)其過度反應(yīng)則會誘發(fā)自身免疫性疾病[7]。近年來，自身免疫疾病與乙肝病毒感染之間關(guān)系受到臨床各界重視。研究顯示，乙肝病毒感染肝臟細(xì)胞是經(jīng)一系列免疫應(yīng)答損傷免疫引起肝組織炎癥壞死，即當(dāng)肝細(xì)胞功能受損，乙肝病毒感染會刺激而產(chǎn)生大量自身抗體，相應(yīng)的免疫應(yīng)答和免疫病理反應(yīng)會進(jìn)一步加重肝細(xì)胞損傷[8-11]。故肝細(xì)胞損傷與乙肝病毒感染所致的自身免疫反應(yīng)關(guān)系密切，肝損傷程度與自身抗體陽性率有關(guān)，且陽性率隨著疾病進(jìn)展和疾病嚴(yán)重程度增加而上升。自身免疫產(chǎn)生的機(jī)制可能與以下幾點(diǎn)因素有關(guān)：（1）乙肝病毒感染引起自身抗原修飾，促進(jìn)自身免疫活化；（2）機(jī)體自身抗原與乙肝病毒抗原時(shí)間分子模擬；（3）自身免疫機(jī)制會因乙肝病毒抗原影響而發(fā)生紊亂[12-14]。可見，丙型、乙型病毒性肝炎機(jī)體內(nèi)也存在自身免疫性反應(yīng)，可檢出自身抗體。

有研究發(fā)現(xiàn)，乙肝病毒感染時(shí)間越長則可能出現(xiàn)自身抗體陽性風(fēng)險(xiǎn)越大[15]。本研究中，兩組性別、病程相比無明顯差異，陰性組年齡低于陽性組，提示乙肝肝硬化發(fā)生自身抗體陽性與年齡有關(guān)，與病程無關(guān)，這可能是部分患者癥狀輕微，發(fā)現(xiàn)較晚有關(guān)。肝臟是機(jī)體內(nèi)對蛋白質(zhì)合成、分解的關(guān)鍵臟器，肝細(xì)胞和免疫球蛋白會受肝炎病毒影響而發(fā)生變化[16]。GLB、TBil、ALT、AST、GGT 等指標(biāo)被常應(yīng)用于肝損傷程度判斷，肝損傷嚴(yán)重程度會因其水平升高幅度增大而加重[17]。肝臟瞬時(shí)彈性成像技術(shù)是依賴FibroScan檢測儀測定肝硬化硬度，超聲產(chǎn)生低頻小振幅振動通過肝臟組織時(shí)會有剪切波產(chǎn)生，而波速越快則彈性數(shù)值越大，肝硬化硬度和肝纖維化程度隨之增高[18]。肝臟瞬時(shí)彈性硬度是與病理金標(biāo)準(zhǔn)相媲美的無創(chuàng)診斷方式，操作簡單，當(dāng)肝組織發(fā)生纖維化病理改變時(shí)，能夠評估、定量分級肝硬化程度，以其表示肝纖維化指數(shù)，準(zhǔn)確性較高[19-20]。本研究中，陰性組 ALT、AST、GGT、AKP、GLB、TBil低于陽性組，ALB高于陽性組；陰性組肝臟瞬時(shí)彈性硬度、IgM、IgG水平低于陽性組，提示乙肝肝硬化自身抗體發(fā)生與肝纖維化程度、乙肝病毒復(fù)制活躍度、肝儲備功能密切相關(guān)。由此可見，乙肝肝硬化對肝細(xì)胞膜誘發(fā)免疫反應(yīng)可起到促進(jìn)作用，進(jìn)一步加重肝臟損傷，同時(shí)促進(jìn)肝纖維化進(jìn)展，影響患者預(yù)后。

綜上所述，乙肝肝硬化患者存在自身免疫反應(yīng)，主要表現(xiàn)為自身抗體陽性，其發(fā)生與肝損傷程度、年齡有關(guān)，參與肝纖維化進(jìn)展，檢測自身抗體對病情、預(yù)后評估有重要意義，可指導(dǎo)治療，改善預(yù)后。