三七總皂苷和多烯磷脂酰膽堿調控大鼠非酒精性脂肪肝的藥效學比較

姜清芳 黃敏怡 游春香 容燮峰 江 濤

廣州醫科大學附屬第二醫院，廣東廣州 510260

非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一種代謝應激性肝臟損傷，隨著飲食結構日益西化，NAFLD的發病率呈上升趨勢[1]，并且低齡化日益嚴重，目前已是引起醫學界不可忽視的一種肝臟疾病[2]。三七總皂苷（Panax notognseng saponins，PNS）是三七的主要有效活性成分[3]。PNS的抗NAFLD機理目前尚不明確，有文獻報道三七具有抵抗肝臟損傷的作用，三七的護肝作用主要表現在減輕肝細胞變性壞死程度，減少肝細胞間膠原纖維，減輕肝臟脂肪變性和炎癥細胞浸潤，減少肝細胞變性壞死等[4-5]。由于這些屬性，使其對NAFLD的治療成為可能。本研究通過建立大鼠NAFLD模型，對比PNS和多烯磷脂酰膽堿（Polyene Phosphatidyl choline，PPC）對模型大鼠的脂肪代謝及肝功能的作用，進一步探討三七總皂苷治療NAFLD的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

三七總皂苷，注射用血栓通（凍干），廣西梧州制藥（集團）股份有限公司，批號：19041116，規格：250mg，Z20025652；多烯磷脂酰膽堿，多烯磷脂酰膽堿膠囊（易善復），賽諾菲（北京）制藥有限公司，批號：9BJD280，規格：228mg，H20059010。SD 大鼠，SPF級，雄性，體重（150±20）g，購自廣東省實驗動物中心，動物生產許可證號：SCXK（粵）2018-0002。高脂飼料和普通飼料均為SPF級。高脂飼料配方，基礎飼料52.2%，豬油15%，蛋黃粉15%，酪蛋白10%，蔗糖5%，膽固醇1.2%，膽酸鈉1.6%。飼養環境為SPF級，溫度（25±2）℃，濕度（60±15）%，給予標準食物，自由飲水，每12小時光照-黑暗循環飼養。實驗開始前適應性喂養7d。

1.2 實驗分組

將32只大鼠隨機分為兩組，空白對照組（Blank，n=8），以普通飼養飼養；高脂飲食組（HFD，n=24），以高脂飼料進行飼養。飼養4周后，將HFD組大鼠隨機分為三組，依次為三七總皂苷組（PNS，n=8），給藥劑量為 0.2g/（kg·d）；多烯磷脂酰膽堿組（PPC，n=8），根據多烯磷脂酰膽堿含量折算后給藥濃度為 0.1g/（kg·d）；模型組（Model，n=8），給予對應體積的生理鹽水。分別灌胃4周。

1.3 實驗指標測定

1.3.1 生化指標測定 給藥結束后，大鼠禁食12h，以0.3mL/100g的2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后統一處死。經腹主動脈取血，以12 000r/min分離血清，全自動生化分析儀檢測肝功能指標血清天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP），血脂指標總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）等。

1.3.2 肝重指數 各組大鼠在給藥結束和抽取血液標本后，找到門靜脈及上、下腔靜脈，用細繩將下腔靜脈扎緊，用手術剪刀于門靜脈入口稍下處剪開一小口，用細軟皮管插入門靜脈血管中，并用細線扎緊，用注射器沿皮管向門靜脈內緩慢打入生理鹽水灌洗，剪斷上腔靜脈，反復灌洗，待肝臟變白后，停止灌洗。向兩側牽拉腹腔皮膚，完整切取整個肝臟，稱重。肝臟重量與體重之比即為肝重指數。

1.4 統計學處理

所得數據采用SPSS17.0統計學軟件進行統計學分析，計量資料以（）表示，采用單因素方差分析（one-way ANOVA），P＜0.05為差異有統計學意義，P＜0.01為差異有顯著統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠體重及肝重指數比較

與Model組比較，PNS組的解剖前體重水平差異有統計學意義（P＜0.05），肝重和肝重指數水平差異有高度統計學意義（P＜0.01）；PPC組僅解剖前體重與Model組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），肝重水平與Model組比較，差異有顯著統計學意義（P＜0.01），肝重指數與Model組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。PNS組和PPC組體重增長較慢，與Model組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），提示兩種藥物對大鼠體重具有控制作用。肝重指數Blank組和PNS組較低，與Model組比較差異有顯著統計學意義（P＜0.01），PPC組的肝重指數與Model組比較差異無統計學意義（P＞0.05），提示PNS組對大鼠肝重指數改善優于PPC組。見表1。

2.2 各組大鼠的生化指標比較

與Model組比較，PNS組的ALP、ALT和AST值水平差異有統計學意義（P＜0.05），PPC組僅ALT值與Model組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），ALP和AST值與模型組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。提示PNS組對大鼠肝功能指標的改善優于PPC組。見表2。

與Model組比較，PNS組的LDL-C、TC和TG值水平差異有顯著統計學意義（P＜0.01）。PPC組僅TG值與Model組比較，差異有顯著統計學意義（P＜0.01），LDL-C和TC值與Model組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。提示PNS在改善NAFLD大鼠的血脂指標LDL-C、TC和TG值方面優勢顯著，PPC組在改善TG值上效果明顯，對LDL-C和TC值無明顯改善。見表3。

表1 各組大鼠體重及肝重指數比較（±s）

表1 各組大鼠體重及肝重指數比較（±s）

注：與Blank組比較，△△P＜0.01；與Model組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PPC組比較，▼P＜0.05，▼▼P＜0.01

組別 n 造模前體重（g） 解剖前體重（g） 肝重（g） 肝重指數（%）Blank 8 197.14±8.56 487.00±30.70 13.60±2.01**▼▼ 2.79±0.31**▼▼Model 8 198.42±9.56 516.28±58.34 24.18±1.98△△▼▼ 4.94±0.67△△PNS 8 198.74±2.51 461.51±33.34* 18.38±1.54△△**▼ 3.98±0.15△△**▼▼PPC 8 196.02±2.46 453.74±16.08* 20.25±1.45△△** 4.77±0.31△△F 1.186 3.113 41.122 47.922 P 0.339 0.034 0.000 0.000

表2 各組大鼠肝功能指標比較（±s，U/L）

表2 各組大鼠肝功能指標比較（±s，U/L）

注：與Blank組比較，△△P＜0.01；與Model組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與PPC組比較，▼P＜0.05，▼▼P＜0.01

組別 n ALP ALT AST Blank 8 117.3±21.93**▼▼ 42.60±14.39** 143.77±29.61**Model 8 184.64±61.45△△ 73.66±30.84△△▼ 247.13±77.12△△PNS 8 128.43±15.44*▼ 43.56±20.96* 146.46±28.42**PPC 8176.06±42.34△△ 49.50±8.99* 192.66±21.99 F 5.561 4.192 7.958 P 0.006 0.009 0.001

表3 各組大鼠血脂指標比較（±s，mmol/L）

表3 各組大鼠血脂指標比較（±s，mmol/L）

注：與Blank組比較，△△P＜0.01；與Model組比較，**P＜0.01；與PPC組比較，▼▼P＜0.01

組別 n LDL-C TC TG Blank 8 0.96±0.31**▼▼ 1.71±0.48**▼▼ 0.22±0.02**Model 8 4.08±0.46△△ 4.48±0.38△△ 0.67±0.33△△▼▼PNS 8 2.30±0.73△△**▼▼ 2.95±0.75△△**▼▼ 0.25±0.08**PPC 8 3.78±0.44△△ 4.10±0.39△△ 0.28±0.07**F 75.122 47.707 62.657 P 0.000 0.000 0.000

3 討論

NAFLD是由于食物和外周的脂肪組織增多，促使游離脂肪酸輸送入肝臟增多，游離脂肪酸在肝細胞線粒體內氧化磷酸化減少，而極低密度脂蛋白合成不足或減少，成肝臟脂質代謝的合成、降解和分泌失調，導致脂質在肝細胞內異常沉積[6-7]。NAFLD除可直接導致失代償期肝硬化、肝細胞癌和移植肝復發外，還可影響其他慢性肝病的進展，并參與2型糖尿病和動脈粥樣硬化的發病[8-9]。代謝綜合征相關惡性腫瘤、動脈硬化性心腦血管疾病以及肝硬化是影響NAFLD患者生活質量和預期壽命的重要因素[10-12]。為此，NAFLD是當代醫學領域的新挑戰，近期NAFLD肝病對人類健康的危害仍將不斷增加。

多烯磷脂酰膽堿是從大豆中提取的一種磷脂，主要活性成分為多聚磷脂酰膽堿二酰甘油和多聚乙酰卵磷脂，這些多烯磷脂酰膽堿在化學結構上與重要的內源性磷脂一致[13]。口服后在肝臟聚集并滲入肝細胞膜和亞細胞膜內與肝細胞相結合，并以完整的分子與肝細胞膜及細胞膜相結合，通過直接影響膜結構使受損的肝功能和酶活力恢復正常，從而調節肝臟的能量平衡，促進肝組織再生[14-15]。多烯磷脂酰膽堿是臨床廣泛用于護肝的藥物，本課題將多烯磷脂酰膽堿作為治療非酒精性脂肪肝的陽性對照藥物。

PNS是我國傳統名貴中藥材五加科人參屬多年生草本植物三七的主要有效活性成分。三七味微甘而苦，似人參之味，與人參同科同屬，但其藥用成分比人參繁多[16]。PNS含有多種單體皂苷，主要有：三七皂苷R1，人參皂苷Rbl和人參皂苷Rg1等[17]。近年來有關PNS在保肝作用和機制的研究進展迅速。PNS可通過抑制腫瘤壞死因子（TNF-α）的增高，抑制分泌型磷脂酶A2（SPLA2）水平[18]，減輕對肝細胞的炎癥刺激和Kupffer細胞的激活，抑制肝星狀細胞（HSC）增殖，促進其凋亡[19]，抑制Ⅰ、Ⅲ型膠原和層粘連蛋白合成等來達到抗纖維化的作用[20]；抗脂質過氧化可能也是PNS對化學性肝損傷的重要保護機制[21]。PNS具備很強的清除自由基能力，可防止氧自由基對肝細胞膜及亞細胞結構的脂質過氧化損傷，保護肝細胞膜完整性，減少肝糖原消耗，改善肝臟微循環[22]。筆者的前期研究也發現，三七總皂苷不僅能夠降低動脈粥樣硬化合并肝損傷大鼠的血脂水平，穩定斑塊，同時還具有護肝作用，能降低肝損傷大鼠的ALT和AST水平[23]。

綜上所述，三七總皂苷組在NAFLD大鼠模型中具有降低體重、降低血脂、改善肝功能指標等作用，與目前臨床廣泛用于護肝的藥物多烯磷脂酰膽堿相比，三七總皂苷均具有綜合優勢優勢。需進一步研究其治療NAFLD的作用機制，并探索其成為NAFLD目標治療藥物的可能性。