流感嗜血桿菌單克隆抗體免疫層析試紙的研制

郝惠文， 陶 冶， 宋慧茹， 楊 波,2， 王 毅,2， 胡 征,2

(1. 湖北工業大學 生物工程與食品學院， 武漢 430068； 2. 湖北工業大學 發酵工程教育部重點實驗室， 武漢 430068)

流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae，Hi)革蘭氏陰性菌[1]是兒童和成人侵襲性肺部感染的主要病因之一[2]。已知的流感嗜血桿菌定植部位是人類上呼吸道和下呼吸道[3]，莢膜菌株中b型流感嗜血桿菌[4](Haemophilusinfluenzaetype b， Hib)和無莢膜型流感嗜血桿菌(Non-typeableHaemophilusinfluenzae，NTHi)[4]能引起腦膜炎、膿毒癥、急性中耳炎、肺炎和結膜炎等疾病[5]。這顯示了Hib和NTHi菌株在臨床診斷的緊迫性與重要性[6]。 目前臨床診斷流感嗜血桿菌感染的方法主要有“金標準”培養法[7]、血清學檢測[8]和核酸檢測[9]。這些方法存在檢測時間過長、操作步驟復雜、成本較高等局限性。膠體金免疫層析法具有簡便、快速、準確度高等優點，更適用于床旁檢測。單克隆抗體的均一、穩定、高特異性等優點使免疫層析技術在病原診斷領域得到廣泛應用。

流感嗜血桿菌的外膜蛋白P6是一種肽聚糖相關的脂蛋白，在不同莢膜血清型以及無莢膜菌株間表現出高度保守性和抗原性，被認為是檢測流感嗜血桿菌的理想目標[10]。因此，本研究擬用單克隆抗體建立基于雙抗體夾心免疫層析技術的流感嗜血桿菌快速檢測方法。

1 材料與方法

1.1 供試材料與菌株

重組蛋白P6-His，由本實驗室構建并表達純化[11]。8周齡的BALB/c雌性小鼠購自湖北省疾病預防控制中心。菌種：流感嗜血桿菌(H.influenzae，ATCC 49247)、肺炎鏈球菌(S.pneumoniae，ATCC 25238)、卡他莫拉菌(M.catarrhalis，ATCC 49619)、肺炎支原體(M.pneumonia，ATCC 15531)和嗜肺軍團菌(L.pneumophila，ATCC 33152)均購自ATCC；金黃色葡萄球菌(S.aureus)、肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)、產酸克雷伯菌(K.oxytoca)、鮑曼不動桿菌(A.baumannii)和銅綠假單胞菌(P.aeruginosa)均由湖北省武警總醫院分離鑒定。……