昭通異地黃花酢漿草總黃酮含量的測(cè)定*

楊加瓊，葛青藍(lán)，宗大慶，趙靜峰，成 嬌，彭 野

(1 昭通衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，云南 昭通 657000；2 教育部自然資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 云南省天然產(chǎn)物轉(zhuǎn)化與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南大學(xué)化工學(xué)院，云南 昆明 650091)

酢漿草有紫葉酢漿草(OxalisviolaceaL)[1]、蔓生酢漿草(OxaliscorniculataL)、黃花酢漿草(Oxalispes-capraeL)、紅花酢漿草(OxaliscorymbosaDC)[2]等多個(gè)變種。酢漿草在我國(guó)云南、貴州、四川、華南等很多地方均能夠生長(zhǎng)，分布較為普遍。酢漿草科植物大多能作為藥物使用，在民間，酢漿草還可用于治療跌打損傷、咽喉腫痛、月經(jīng)不調(diào)、痢疾等癥。其中黃花酢漿草全草均具有很好的藥用價(jià)值，能清熱解毒、消炎止痛等[3]，在臨床上治療炎癥也有很好的療效[4]。現(xiàn)代研究表明，酢漿草主要含黃酮類(lèi)物質(zhì)、有機(jī)酸及酯類(lèi)物質(zhì)等[5]，黃酮類(lèi)化合物具有超強(qiáng)的抗氧化、抗癌、抗自由基、抑菌等作用[6]。且陳世銀等發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍內(nèi)，酢漿草總黃酮提取液對(duì)DPPH·自由基的清除效果隨著總黃酮濃度的升高，抗氧化性能隨之升高[7]。因此，本文以總黃酮和蘆丁、異葒草素含量為指標(biāo)，采用紫外分光光度法，測(cè)定6個(gè)不同產(chǎn)地野生黃花酢漿草總黃酮的含量，為優(yōu)選野生黃花酢漿草提供了相應(yīng)依據(jù)，也為黃花酢漿草的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用拓展了思路。

1 儀器與試藥

UV-1900紫外可見(jiàn)分光光度儀，成都安恒達(dá)科技有限公司；T-214電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；Hei-VAP型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，鄭州予華；JHBE-50S型閃式提取器，鄭州賽克斯玻璃儀器有限公司；DVF-250中藥粉碎機(jī)，上海淀久中藥機(jī)械公司。

試驗(yàn)用野生黃花酢漿草分別采自昭通的昭陽(yáng)區(qū)、彝良縣、大關(guān)縣、鎮(zhèn)雄縣、永善縣、巧家縣，經(jīng)昆明植物所老師鑒定為酢漿草科酢漿草屬植物酢漿草(Oxalis pes-caprae L)的干燥全草。蘆丁、異葒草素標(biāo)準(zhǔn)品、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無(wú)水乙醇等試劑均為分析純。

2 實(shí) 驗(yàn)

2.1 供試品的制備

分別取昭陽(yáng)區(qū)、彝良縣、大關(guān)縣、鎮(zhèn)雄縣、永善縣、巧家縣干燥黃花酢漿草全草粉末，精密稱定3.0 g，采用閃式提取法，提取溶劑為70%乙醇，料液比1:70，提取時(shí)間3 min。離心過(guò)濾得澄清濾液，濾液蒸干，殘?jiān)?0%乙醇溶液適量使溶解，轉(zhuǎn)移至 50 mL容量瓶中并定容至刻度，搖勻，作為供試樣品溶液。

2.2 蘆丁對(duì)照黃花酢漿草總黃酮含量的測(cè)定

2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

根據(jù)文獻(xiàn)[7]方法，精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.00 mg于潔凈小燒杯，加少量70%乙醇使之溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中并定容至刻度，搖勻，得100 μg/mL的蘆丁對(duì)照品貯備液。分別精密吸取對(duì)照品溶液用70%的乙醇配制成 0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 μg/mL，各取0.50 mL到試管中，準(zhǔn)確加入70%乙醇0.50 mL，準(zhǔn)確加入150 μL 5%亞硝酸鈉，搖勻，靜置6 min，準(zhǔn)確加入150 μL 10%硝酸鋁，搖勻，靜置 6 min，準(zhǔn)確加入1 mL 4% NaOH，放置10 min后，以相應(yīng)的試劑為空白，進(jìn)行紫外200～800 nm全波長(zhǎng)掃描，測(cè)得最大吸收為505 nm。在該波長(zhǎng)下測(cè)定各溶液吸光度，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為Y=0.0029X-0.0065，R2=0.995，線性范圍是10～100 μg/mL。

2.2.2 樣品中總黃酮含量的測(cè)定

將2.1項(xiàng)下方法得到每個(gè)產(chǎn)地供試樣品溶液稀釋10倍，各取0.5 mL，按2.2.1中相同的方法和步驟測(cè)定吸光度A值，得到的吸光度代入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算得到稀釋提取液的總黃酮含量C(μg/mL)，再根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算每克干黃花酢漿草總黃酮含量(μg/g)。

2.3 異葒草素對(duì)照黃花酢漿草總黃酮含量的測(cè)定

2.3.1 異葒草素標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

根據(jù)文獻(xiàn)方法[8-9]，精密稱取異葒草素標(biāo)準(zhǔn)品12.62 mg于潔凈小燒杯，加少量70%乙醇使之溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，繼續(xù)加70%乙醇溶液至刻度，搖勻，即得異葒草素對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品溶液 0.5、1、2、3、4 mL分別置于25 mL量瓶中，各加水至 6 mL，準(zhǔn)確加入加1 mL 5%亞硝酸鈉，搖勻，靜置6 min，準(zhǔn)確加入1 mL 10%硝酸鋁，搖勻，靜置6 min，準(zhǔn)確加入10 mL 4% NaOH，再加70%乙醇溶液至刻度，搖勻，靜置15 min。以相應(yīng)的試劑為空白，進(jìn)行紫外200～800 nm全波長(zhǎng)掃描，測(cè)得最大吸收為510 nm，在該波長(zhǎng)下測(cè)定各溶液吸光度，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，溶液濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為Y=0.0123X-0.0072，R2=0.999，線性范圍為10.096～80.768 μg/mL。

2.3.2 樣品中總黃酮含量的測(cè)定

將2.1項(xiàng)下方法得到每個(gè)產(chǎn)地供試樣品溶液，各取2 mL，按2.3.1中相同的方法和步驟測(cè)定吸光度A值，得到的吸光度代入異葒草素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算得到稀釋提取液的總黃酮含量 C(μg/mL)，再根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算每克干黃花酢漿草總黃酮含量(μg/g)。

3 黃花酢漿草總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

黃花酢漿草總黃酮含量的計(jì)算公式：樣品總黃酮含量(μg/g)=(V×C)×稀釋倍數(shù)/3。式中：V為3.0 g黃花酢漿草濃縮提取液的體積，mL； C為稀釋提取液總黃酮含量，μg/mL。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表 1。

表1 6個(gè)不同產(chǎn)地黃花酢漿草總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

4 討論與結(jié)論

4.1 討 論

本實(shí)驗(yàn)首次采用閃式提取技術(shù)提取酢漿草總黃酮含量，該法相比于浸泡、回流等提取具有快速、高效、無(wú)需加熱、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，將該技術(shù)運(yùn)用于酢漿草黃酮的高效提取是可行的，其料液比曾比較過(guò)用50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇3種溶劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明70%乙醇為溶劑提取總黃酮含量較高。用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、異葒草素標(biāo)準(zhǔn)品做對(duì)照測(cè)定黃花酢漿草總黃酮含量其實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的差異，二者測(cè)定結(jié)果存在差異的原因可能是，兩種對(duì)照品最大吸收波長(zhǎng)稍有差別導(dǎo)致測(cè)得的總黃酮含量不一致，但兩種對(duì)照品所測(cè)結(jié)果差異不大，因此兩種方法測(cè)定酢漿草藥材中總黃酮含量均可行 。

4.2 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定昭通6個(gè)地區(qū)野生黃花酢漿草總黃酮含量，結(jié)果表明不同地區(qū)樣品因產(chǎn)地不同導(dǎo)致總黃酮含量有差異，含量范圍在0.8%～2.1%之間，其中以鎮(zhèn)雄縣樣品總黃酮含量最高，達(dá)到21402 μg/g，而大關(guān)縣樣品總黃酮含量最低為8068 μg/g。因此該研究可以為優(yōu)選昭通野生黃花酢漿草提供相應(yīng)參考。