MTHFR基因多態性與血清葉酸、同型半胱氨酸代謝的關系分析

陳愛保,向 歡,趙紅萍

深圳恒生醫院檢驗科，廣東深圳 518102

人類亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因位于染色體的1p36.3，全長1 980 bp,其第4外顯子上的第677個核苷酸堿基可發生胞嘧啶(C)向胸腺嘧啶(T)的突變，可由677CC(正常野生型)突變為677CT(雜合突變型)或677TT(純合突變型)。突變后的MTHFR活性下降，可致葉酸代謝障礙引起低葉酸，繼發同型半胱氨酸代謝障礙引起高同型半胱氨酸血癥，高同型半胱氨酸是引發高血壓等心腦血管疾病、新生兒出生缺陷的高風險因素[1]。只有早發現基因是否有突變，及時補充葉酸，防止高同型半胱氨酸血癥的產生，才是控制相關疾病發生的良策。鑒于此，本研究通過收集相關資料進一步分析認證MTHFR基因多態性與葉酸、同型半胱氨酸的代謝關系。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年1-12月在本院同時做外周血細胞MTHFR 基因檢測、血清葉酸、血清同型半胱氨酸檢測的500例受試者臨床資料，其中男性270例、女性230例，年齡19～70歲，平均(35.5±5.0)歲。

1.2方法

1.2.1標本準備 空腹采紫頭管抗凝血2 mL及橙管非抗凝血4 mL，采血前1周未服用葉酸。

1.2.2血細胞MTHFR基因檢測及判斷標準 采用西安金磁納米生物技術有限公司生產的PCR-金磁微粒層析法試劑盒，雅培LA480核酸擴增儀。對標本進行DNA提取、擴增、產物分析。其原理是通過對等位基因MTHFR C677T基因突變位點的引物設計及標記，利用等位基因特異性PCR方法擴增獲得特定的擴增片段，標記有地高辛分子的PCR產物在與所構筑的基因分型檢測體系中納米金磁微粒表面抗地高辛單抗相互作用，通過側向流層析技術實現其基因多態性檢測。判斷標準：(1)反應板中M試劑T線處條帶顯示陰性而WT試劑T線處條帶顯示陽性則其基因型為正常CC型；(2)反應板中M試劑T線處條帶顯示陽性，WT試劑T線處條帶陽性則其基因型為雜合突變CT型；(3)反應板中M試劑T線處條帶顯示陽性而WT試劑顯示陰性則其基因型為TT純合突變型，詳細操作方法及結果判斷按試劑盒說明書進行。

1.2.3血清葉酸檢測 采用i200SR雅培化學發光儀檢測葉酸水平，正常參考范圍為7.0～45.4 nmol/L。

1.2.4血清同型半胱氨酸檢測 采用LST008AS日立全自動生化儀檢測同型半胱氨酸水平，正常參考范圍為0～15 μmol/L。

2 結 果

2.1500例受試者中不同性別、年齡段各基因型構成比比較 不同性別、年齡段受試者各基因型構成比比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同性別、年齡段受試者各基因型構成比比較[n(%)]

2.2各基因型受試者血清葉酸和同型半胱氨酸檢測結果比較 220例CC型受試者血清葉酸水平為(27.5±5.0)nmol/L，有2例受試者低于正常參考范圍。145例CT型受試者血清葉酸水平為(9.5±1.4)nmol/L，有7例受試者低于正常參考范圍。135例TT型受試者血清葉酸水平為(6.5±0.5)nmol/L，有35例受試者低于正常參考范圍。220例CC型受試者血清同型半胱氨酸水平為(6.0±0.8)μmol/L，均在正常參考范圍。145例CT型受試者血清同型半胱氨酸水平為(11.5±1.0)μmol/L，有2例受試者高于正常參考范圍；135例TT型檢測者血清同型半胱氨酸水平為(13.5±1.5)μmol/L，有9例受試者高于正常參考范圍。TT型和CT型受試者血清葉酸水平低于正常參考范圍的人數及血清同型半胱氨酸水平高于正常參考范圍的人數明顯多于CC型受試者，差異均有統計學意義(P<0.05)。

3 討 論

MTHFR是葉酸代謝的關鍵酶，其功能是將5,10-亞甲基四氫葉酸轉化為5-甲基四氫葉酸，5-甲基四氫葉酸是同型半胱氨酸再次甲基化為蛋氨酸的甲基供體[3]。MTHFR對熱不耐受，易突變為CT型和TT型[3]，突變后的CT型和TT型酶活力分別只有CC型的65%和30%[4]，特別是TT型人群，因葉酸代謝障礙致葉酸缺乏，可引起同型半胱氨酸再次甲基化受阻，體內同型半胱氨酸不同程度堆積，可導致血管內皮損傷、刺激血管平滑肌增生、破壞機體凝血和纖溶系統，使機體處于血栓狀態，是H型高血壓、冠心病的高風險因素，也可導致腦卒中發生風險升高11～28倍[5]；葉酸代謝障礙是孕婦出現早產、出生低體質量兒、神經管畸形、唇腭裂的高風險因素[6]；也是突發性耳聾發生的高危險因素[8]。葉酸是水溶性B族維生素，是合成核酸所需的輔酶，葉酸缺乏可導致細胞DNA合成減少，細胞成熟障礙，可致貧血[7]；有報道稱TT型男性精子的前運動率要明顯低于CC型[8]。

同型半胱氨酸是人體必需氨基酸——蛋氨酸代謝的中間產物，其升高可能因不良的飲食結構和習慣引起，也可因基因MTHFR活性下降引起，減少富含蛋氨酸食物的攝入，多食新鮮的蔬菜水果能有效降低同型半胱氨酸水平。人體自身不能合成葉酸，需從食物補充，天然的葉酸又極不穩定，易受陽光、加熱的影響而發生氧化，遺傳基因正常人群可從日常飲食中得到葉酸的滿足。而MTHFR基因突變后的CT型和TT人群不要等到已經發生了H型高血壓或遺傳性耳聾等因葉酸、同型半胱氨酸代謝障礙引發的疾病，再來進行基因、葉酸、同型半胱氨酸檢測，則為時已晚[10]。早檢測、早干預是預防相關疾病發生的良策[11]。