羅氏Cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀檢測系統(tǒng)性能驗(yàn)證*

趙巧燕，顏 巍

南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)藥研究院檢驗(yàn)科,江蘇南京 210028

羅氏Cobas 8000系統(tǒng)是德國羅氏診斷公司推出的全新概念的模塊化組合生化分析系統(tǒng)，本科室新投入使用的模塊包括1個(gè)ISE模塊和3個(gè)c702共4個(gè)模塊(ISE、AU1、AU2、AU3)，其中ISE模塊每小時(shí)900個(gè)測試，每個(gè)c702模塊每小時(shí)2 000個(gè)測試。高效率的檢測速度為日常工作提供了很大的幫助，而對(duì)其檢測系統(tǒng)的性能進(jìn)行驗(yàn)證則為提高檢驗(yàn)科生化室的工作質(zhì)量，確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確與可靠奠定了基礎(chǔ)。同時(shí)，檢測系統(tǒng)的分析性能驗(yàn)證也是臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理的重要內(nèi)容[1-3]。因此，本科室根據(jù)《醫(yī)院檢驗(yàn)科建設(shè)管理規(guī)范》和《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的規(guī)定[4-5]，對(duì)新投入使用的全自動(dòng)生化儀進(jìn)行檢測系統(tǒng)的性能驗(yàn)證，檢測項(xiàng)目包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總蛋白(TP)、堿性磷酸酶(ALP)、谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGT)、膽固醇(TCH)、三酰甘油(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、葡萄糖(GLU)、鈣(Ca)、鎂(Mg)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、鉀(K)、鈉(Na)，驗(yàn)證內(nèi)容有準(zhǔn)確度、精密度、線性、最大稀釋度及臨床可報(bào)告范圍。現(xiàn)將檢測方法和結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料 本次實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本均取自2019年1-2月本院門診和住院患者及體檢健康者空腹新鮮血液標(biāo)本，標(biāo)本性狀均符合相應(yīng)實(shí)驗(yàn)的要求。

1.2儀器與試劑 羅氏Cobas 8000全自動(dòng)生化分析儀(ISE、c702、c702、c702)，儀器注冊(cè)證號(hào)：CFDA(I)20172405252，制造商編號(hào)：18U4-10、18Y2-01、18W5-08、18W5-09、18W6-05，各項(xiàng)目試劑均為羅氏原裝配套試劑。校準(zhǔn)品采用羅氏配套校準(zhǔn)品，質(zhì)控品采用BIO-RAD公司生產(chǎn)的生化多項(xiàng)質(zhì)控品，批號(hào)為26441、26442,注冊(cè)證號(hào)：CFDA(I)20172401756。

1.3方法

1.3.1準(zhǔn)確度驗(yàn)證 以參加2019年國家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心組織的準(zhǔn)確度驗(yàn)證室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果為最終結(jié)果，以1/2允許總誤差(TEa)作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，偏倚小于1/2TEa，認(rèn)為該檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平，準(zhǔn)確度符合要求。

1.3.2精密度驗(yàn)證 基于美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)EP15-A2文件《用戶對(duì)精密度和準(zhǔn)確度性能的核實(shí)試驗(yàn)——批準(zhǔn)指南》(第2版)的評(píng)價(jià)方案：采用BIO-RAD公司提供2個(gè)水平的質(zhì)控品，每天分析1個(gè)批次，各檢測3次，重復(fù)測定5 d，將得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算，得到精密度的批內(nèi)變異系數(shù)(CV)和總CV，與實(shí)驗(yàn)室制定的質(zhì)量目標(biāo)即臨床化學(xué)常用檢驗(yàn)項(xiàng)目分析質(zhì)量指標(biāo)進(jìn)行比較，精密度批內(nèi)CV小于1/4TEa，總CV小于1/3TEa則認(rèn)為精密度符合要求[4,6-7]。

1.3.3線性驗(yàn)證 根據(jù)文獻(xiàn)[4,8]的要求，盡可能收集濃度接近廠家聲明的線性范圍上、下限的標(biāo)本，將收集到的新鮮高值血清(H)和低值血清(L)按照5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H關(guān)系配制混合，形成系列評(píng)價(jià)樣品。每個(gè)樣本按照從低濃度至高濃度順序測定1次，再按高濃度至低濃度順序測定1 次，將2次測定結(jié)果計(jì)算均值，采用直線回歸，得出回歸方程Y=bX+a，X表示預(yù)期值，Y表示實(shí)測值，計(jì)算相關(guān)系數(shù)，一般要求b值在1.00±0.03范圍內(nèi)，且r2≥0.95，則認(rèn)為線性范圍驗(yàn)證符合要求[4,8]。

1.3.4最大稀釋度及臨床可報(bào)告范圍 選擇接近于線性范圍上限的高濃度樣本，測定3次，取均值作為理論值，各項(xiàng)目根據(jù)實(shí)際工作需要選擇最佳稀釋倍數(shù)，用生理鹽水進(jìn)行稀釋，將稀釋好的各標(biāo)本在儀器上測定3次，計(jì)算均值作為實(shí)測值。將實(shí)測值與理論值比較計(jì)算偏差，以<1/2TEa為判斷標(biāo)準(zhǔn)，未超過標(biāo)準(zhǔn)的最大稀釋倍數(shù)作為該項(xiàng)目的最大稀釋度。該項(xiàng)目的臨床可報(bào)告范圍即為線性范圍上限乘以最大稀釋倍數(shù)[4,7]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用方差分析和直線回歸分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果 每個(gè)項(xiàng)目的相對(duì)偏倚均小于1/2TEa，提示該檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平，準(zhǔn)確度符合要求。見表1。

表1 羅氏Cobas 8000 準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果(n=15)

2.2精密度驗(yàn)證結(jié)果 15個(gè)檢測項(xiàng)目的批內(nèi)CV均小于1/4TEa，總CV均小于1/3TEa。具體結(jié)果見表2。

表2 羅氏Cobas 8000 精密度驗(yàn)證結(jié)果(n=15)

2.3線性范圍驗(yàn)證結(jié)果 15個(gè)檢測項(xiàng)目的b值均在1.00±0.03范圍內(nèi)，且r2≥0.95，線性均良好。具體結(jié)果見表3。

表3 羅氏Cobas 8000 線性驗(yàn)證結(jié)果

2.4最大稀釋度及臨床可報(bào)告范圍驗(yàn)證結(jié)果 根據(jù)臨床實(shí)際工作需要對(duì)各項(xiàng)目選擇最佳稀釋倍數(shù)并驗(yàn)證，確定其最大稀釋度，個(gè)別項(xiàng)目(TP、TCH、CREA、Ca、K、Na)實(shí)際工組中不需要做稀釋，故未作稀釋度驗(yàn)證。可報(bào)告范圍即為其線性范圍上限乘以最大稀釋度。結(jié)果見表4。

表4 羅氏Cobas 8000 最大稀釋度及可報(bào)告范圍

3 討 論

生化檢測系統(tǒng)是由生化分析儀、檢測試劑和校準(zhǔn)品組成，該體系的分析性能一定程度上受儀器和(或)試劑的影響，所以在日常操作時(shí)應(yīng)定期對(duì)檢測系統(tǒng)進(jìn)行性能驗(yàn)證并評(píng)價(jià)，以證實(shí)其能滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求[9-10]。在日常工作中，臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性直接關(guān)系到患者的診斷、治療和預(yù)后，因此，獲得準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果一直是檢驗(yàn)人員不斷追求的目標(biāo)，而對(duì)檢測系統(tǒng)進(jìn)行相關(guān)性能驗(yàn)證及評(píng)價(jià)是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠的前提[10-11]。文獻(xiàn)[4]中也明確規(guī)定了醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對(duì)其檢測項(xiàng)目的方法學(xué)進(jìn)行性能驗(yàn)證，至少應(yīng)包括準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍等。IS015189的相關(guān)文件也要求認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)儀器設(shè)備、檢測系統(tǒng)或檢測方法的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，以證實(shí)其能夠符合臨床檢測所要求的標(biāo)準(zhǔn)[3,7]。因此，本研究針對(duì)ALT、TP、ALP、GGT、TCH、TG、BUN、CREA、GLU、Ca、Mg、CK、LDH、K、Na這15個(gè)檢測項(xiàng)目進(jìn)行準(zhǔn)確度、精密度、線性、最大稀釋度及臨床可報(bào)告范圍的性能驗(yàn)證及評(píng)價(jià)，以確保本科室新投入使用的全自動(dòng)生化分析儀滿足臨床檢測的要求。

準(zhǔn)確度指的是實(shí)測均值與真值之間的接近程度，反映儀器系統(tǒng)誤差的大小[12-13]。定量項(xiàng)目準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)，一般要求是對(duì)定值參考物質(zhì)進(jìn)行檢測，參考物質(zhì)有多個(gè)來源：(1)已經(jīng)用參考方法或決定性方法定值的新鮮冰凍人類血清，這類已定值的血清可從美國國家標(biāo)準(zhǔn)局和美國病理學(xué)家學(xué)會(huì)獲得；(2)從能力比對(duì)試驗(yàn)中獲得的參考物；(3)廠家提供的準(zhǔn)確度確認(rèn)物質(zhì)或質(zhì)控物；(4)實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)物；(5)有第三方提供的經(jīng)不同方法定值的物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)是以參加2019年國家衛(wèi)生健康委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心組織的準(zhǔn)確度驗(yàn)證室間質(zhì)評(píng)結(jié)果為最終結(jié)果，計(jì)算相對(duì)偏倚，15個(gè)項(xiàng)目的相對(duì)偏倚在0.12%～5.71%，均小于1/2TEa，表明該檢測系統(tǒng)的偏倚屬臨床可接受水平，準(zhǔn)確度均符合要求。

精密度是指用同一種方法多次重復(fù)檢測同一項(xiàng)目結(jié)果的一致性，是反映檢測系統(tǒng)性能的首要指標(biāo)，主要用于評(píng)價(jià)檢測系統(tǒng)的隨機(jī)誤差[14-16]。做精密度實(shí)驗(yàn)用的樣品一定要穩(wěn)定：它的基體組成應(yīng)盡可能類似于實(shí)際檢測的患者標(biāo)本；樣品中的分析物含量應(yīng)在該項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平處，或者在有臨床意義的水平。有可能的話，做2個(gè)水平的精密度實(shí)驗(yàn)。可以使用的樣品包括控制品(必須和實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行每天質(zhì)量控制用控制品是2個(gè)不同的樣品)、校準(zhǔn)品、已經(jīng)檢測過的患者標(biāo)本或具有血清基質(zhì)的定值材料。本次試驗(yàn)檢測2個(gè)水平的樣本，通過一個(gè)批次每天測定3次，重復(fù)測定5 d，累計(jì)計(jì)算得到精密度的批內(nèi)CV和總CV，15個(gè)檢測項(xiàng)目的批內(nèi)CV均小于1/4TEa，總CV均小于1/3TEa，精密度符合要求，表明儀器檢測系統(tǒng)的重復(fù)性好，能夠滿足臨床檢測需要[17-18]。

線性范圍是評(píng)價(jià)試劑檢測性能的重要指標(biāo)之一，其性能直接關(guān)系到是否能為臨床提供可靠的檢驗(yàn)結(jié)果，一般線性范圍越大，試劑應(yīng)用于臨床的適用性越好[19-20]。進(jìn)行線性范圍實(shí)驗(yàn)的樣品必須與真實(shí)標(biāo)本盡可能相似，也要與真實(shí)標(biāo)本具有相同的基質(zhì)狀態(tài)。本研究使用的樣本均來自符合要求的患者標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)[3-5]要求測定結(jié)果，采用直線回歸方程Y=bX+a，15個(gè)檢測項(xiàng)目的b值在0.973～1.001，均在1.00±0.03 范圍內(nèi)，且r2為0.996 3～0.999 9≥0.95，說明驗(yàn)證的線性范圍符合要求，能夠滿足臨床需要。

在實(shí)際工作中經(jīng)常會(huì)遇到該項(xiàng)目檢測結(jié)果超過其線性范圍的情況,這時(shí)候就需要通過稀釋來獲得具體結(jié)果，因此最大稀釋度驗(yàn)證也是很有必要的。選擇檢測項(xiàng)目最合適的稀釋倍數(shù)進(jìn)行稀釋測定，將其結(jié)果與真實(shí)值比較計(jì)算偏倚，以<1/2TEa為判斷標(biāo)準(zhǔn)，未超過標(biāo)準(zhǔn)的最大稀釋倍數(shù)作為該項(xiàng)目的最大稀釋度，其可報(bào)告范圍即線性范圍上限乘以最大稀釋度。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室因根據(jù)實(shí)際工作需要選擇項(xiàng)目的最大稀釋倍數(shù)及臨床可報(bào)告范圍。通過驗(yàn)證，本實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)目最大稀釋度及臨床可報(bào)告范圍符合要求，且能滿足臨床檢驗(yàn)的需求。

綜上所述，本研究對(duì)ALT、TP、ALP、GGT、TCH、TG、BUN、CREA、GLU、Ca、Mg、CK、LDH、K、Na這15個(gè)檢測項(xiàng)目的性能驗(yàn)證均符合要求，表明羅氏Cobas 8000(ISE、c702、c702、c702)全自動(dòng)生化分析儀的檢測性能符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，可以保證本實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的準(zhǔn)確可靠，為臨床提供更好的服務(wù)。