肝癌組織LncRNATINCR表達水平對術后長期生存的影響

陸悅 唐成武

[摘要] 目的 探討肝癌組織中LncRNA TINCR表達水平對術后長期生存的影響。 方法 回顧性分析2013年4月～2016年2月間在本院接受手術治療的157例肝細胞肝癌患者的臨床資料。RT-PCR 法檢測肝癌標本內LncRNA TINCR表達水平，采用ROC曲線和Kaplan-Meier法分析LncRNA TINCR表達水平對肝癌術后長期生存的影響。結果 肝癌組織LncRNA TINCR表達水平對術后長期生存預測的曲線下面積（AUC）為 0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。根據ROC曲線分析結果，將肝癌組織LncRNA TINCR相對表達水平大于1.89的93例（59.24%）患者納入高表達組，而肝癌組織LncRNA TINCR相對表達水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者納入低表達組。Kaplan-Meier法生存分析發現高表達組術后3年內有76例患者死亡，3年總生存率為18.28%（17/93）;低表達組術后3年內有20例患者死亡，3年總生存率為68.75%（44/64），低表達組3年總生存率明顯優于高表達組（P<0.0001，兩組間死亡風險比為3.7534，95%可信區間為2.5158～5.6000）。 結論 肝癌組織LncRNA TINCR表達水平與肝癌術后長期生存顯著相關，LncRNA TINCR表達水平升高則預示著預后不佳。

[關鍵詞] 肝細胞癌;表達;肝切除;長期生存;LncRNA TINCR

[中圖分類號] R735.7? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2020）29-0024-04

[Abstract] Objective To explore the effect of the LncRNA TINCR expression level in hepatocellular carcinoma tissues on the long-term survival. Methods The clinical data of 157 patients with hepatocellular carcinoma who received surgical treatment in our hospital from April 2013 to February 2016 were retrospectively analyzed. The expression levels of LncRNA TINCR in HCC specimens were detected by RT-PCR， and the effect of the expression levels of LncRNA TINCR on the long-term survival after HCC surgery was analyzed by the ROC curve and Kaplan-Meier method. Results The AUC， specificity， sensitivity and the optimum interpretation value of the LncRNA TINCR expression levels in hepatocellular carcinoma tissues for prediction of the long-term survival after surgery were 0.812， 73.77%， 79.17% and 1.89（P<0.0001）. According to the ROC curve analysis results， 93 patients（59.24%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues greater than 1.89 were included in the high-expression group， while 64 patients（40.76%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues less than or equal to 1.89 were included in the low-expression group. A total of 76 patients in the high-expression group died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 18.28%（17/93）， which was found by the Kaplan-Meier survival analysis. In the low-expression group， 20 patients died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 68.75%（44/64）. The 3-year overall survival rate in the low-expression group was significantly better than that in the high-expression group（P<0.0001， mortality risk ratio between the two groups were 3.7534， 95% confidence interval was 2.5158-5.6000）. Conclusion The expression level of LncRNA TINCR in HCC tissues is significantly correlated with long-term survival after HCC surgery， and the increased expression level of LncRNA TINCR indicates poor prognosis.

[Key words] Hepatocellular carcinoma（HCC）; Expression; Hepatectomy; Long-term survival; LncRNA TINCR

肝癌（Hepatocellular cancer，HCC）目前仍是嚴重危害國民健康的重大公共衛生難題[1-3]，全世界超過一半的新發HCC病例和死亡病例發生在我國。雖然針對HCC的治療有了長足的發展，但是根治手術仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國大部分HCC發現時已是中晚期，甚至已經侵犯膽道及門脈系統，因此術后復發率高，總體預后很不理想[5-6]。目前亟需進一步探究引起HCC術后復發的易感因素和靶點，從根本上阻斷HCC術后復發的通路，達到改善預后的目的。終末分化誘導非編碼RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細胞中分離得到的一個長3.7 kb的LncRNA轉錄本[7]。研究發現LncRNA TINCR在肝細胞癌、結直腸癌、胃癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等惡性腫瘤中表達異常，并與多種分子相互作用而影響基因轉錄及轉錄后過程，可加速腫瘤的發展[8-11]。本研究旨在探討HCC組織中LncRNA TINCR表達水平對肝癌術后長期生存的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性研究2013年4月～2016年2月在本院行肝癌切除的157例HCC患者的臨床資料，納入標準[12]：未接受任何抗癌治療;非彌漫性HCC;術后隨訪6個月以上;無失訪情況;所有治療經患者本人知情同意。排除標準：術前已有肝外轉移;術后隨訪短于6個月。

1.2 肝癌組織LncRNA TINCR相對表達量檢測

采用Tissue RNA Kit提取肝癌組織RNA，經反轉錄后，用于RT-PCR檢測組織中TINCR相對表達量，試劑盒均購自南京東極醫藥科技有限公司，操作過程嚴格參照說明書進行。TINCR上游引物為5'-CCATC CCTCTGTAACCACCT-3'，下游引物為5'-GTTGGGT-CTAGATTCCAGCA-3'，以Actin為內參，Actin上游引物為5'-ATCATGTTTGCCTAGATCAACA-3'，下游引物為5'-CATCTCTTGCTAAGCGTCCA-3'，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。RT-PCR程序：95℃預變性10 min;95℃ 10 s，60℃ 35 s，72℃，30 s，40個循環;最后72℃延伸10 min。

1.3 隨訪及觀察指標

術后半年內每個月進行隨訪，之后每3個月1次。隨訪內容包括體格檢查、血常規、生化及腫瘤標記物監測，如有可疑復發，需行超聲、增強CT、MRI，必要時行腸鏡及穿刺活檢確認。一旦確認腫瘤復發，記錄復發的時間及部位。總生存時間定義為自手術開始直至死亡或最后一次隨訪（復發前）。比較兩組3年總生存情況。

1.4 統計學方法

計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗;計數資料采用χ2檢驗。LncRNA TINCR表達對術后生存的預測作用采用ROC曲線分析。Kaplan-Meier法繪制患者無瘤生存情況曲線，采用Log-rank法分析。所有統計均由MEDCALC 15.2軟件完成，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCC組織LncRNA TINCR表達水平對術后生存的預測價值

將HCC組織LncRNA TINCR表達水平與術后復發情況（無復發=0，復發=1）繪制ROC曲線（圖1），并計算得出曲線下面積（AUC）為0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。

2.2 HCC組織LncRNA TINCR表達對術后長期生存的影響

將HCC組織LncRNA TINCR相對表達水平大于1.89（ROC曲線所得的最佳判讀值）的93例（59.24%）患者納入高表達組，而將LncRNA TINCR相對表達水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者納入低表達組。兩組患者的一般資料比較，差異無統計學意義（P>0.05）（表1）。高表達組術后3年內有76例患者死亡，3年總生存率為18.28%（17/93）;低表達組術后3年內有20例患者死亡，3年總生存率為68.75%（44/64）。Log-rank法分析生存曲線發現低表達組3年總生存率明顯優于高表達組（P<0.0001，兩組間死亡風險比為3.7534，95%可信區間為2.5158～5.6000）。見封三圖1。

3 討論

HCC目前仍是嚴重危害國民健康的重大公共衛生難題，全世界超過一半的新發HCC病例和死亡病例發生在我國[1]。雖然針對HCC的治療有了長足的發展，但是根治手術仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國大部分HCC發現時已是中晚期，甚至已經侵犯膽道及門脈系統，因此術后復發率高，總體預后很不理想[5-6]。目前亟需進一步探究引起HCC術后復發易感因素和靶點，以改善HCC患者預后[12]。

新一代的基因測序技術已經發現超過90%的人類基因組轉錄產生一系列非蛋白編碼（非編碼）RNA（ncRNA）[13-14]。長鏈非編碼RNA（LncRNA）大于200核苷酸長度，雖然不具有蛋白質編碼功能，卻能顯著影響生物學過程[15]。與microRNA相比，LncRNA的功能及機制尚未完全被人類掌握。然而，近年來人們對LncRNA的研究越來越深入。目前已經證實LncRNA能調節多種細胞生理活動，包括染色質修飾、基因印記、選擇性剪接、基因組重排、細胞增殖、遷移、凋亡及核質轉運等[16]。研究表明，LncRNA參與了廣泛的生理及病理生理過程，通過正反饋/負反饋通路在癌癥發生發展中起到促癌或抑癌基因的作用[17]。也有證據顯示，LncRNA與腫瘤細胞增殖、凋亡、轉移和侵襲有關[18-19]。因此，LncRNA有望成為腫瘤診斷標志物及潛在的治療的靶點。

終末分化誘導非編碼RNA（Terminal differentiation -induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細胞中分離得到的一個長3.7 kb的LncRNA轉錄本[20]。研究發現TINCR在肝細胞癌、結直腸癌、胃癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等表達異常，TINCR與多種分子相互作用而影響基因轉錄及轉錄后過程，可加速腫瘤發展[8-11，21]。

近年來，關于LncRNA TINCR 在肝癌發生發展中的作用機制研究日漸受到重視。有學者利用蛋白組學對攜有丙肝病毒的肝癌患者的肝癌組織進行檢測，結果發現在此類肝癌組織中LncRNA TINCR的表達較正常肝組織增高[22]。有學者將HCC組織中的LncRNA TINCR的表達水平與腫瘤大小、TNM分期及血管浸潤進行相關性分析，結果提示兩者相關性緊密，而進一步的生存分析發現，高表達的患者術后無瘤生存率略低于表達患者，從而推測LncRNA TINCR表達升高能增加腫瘤侵襲性，并能促進HCC術后進展[10]。

本研究結果顯示，HCC組織LncRNA TINCR表達水平對術后生存預測的曲線下面積（AUC）為0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。通過此結果，將患者分為LncRNA TINCR高表達組和LncRNA TINCR低表達組，Log-rank法分析生存曲線發現低表達組3年總生存率明顯優于高表達組（P<0.0001）。

已有研究顯示，LncRNA TINCR能作為競爭性地結合microRNA（Competing endogenous RNA，ceRNA）調控基因表達，其不但可活化某些蛋白編碼基因的表達，亦可以抑制蛋白編碼基因的表達[23-25]。目前已經證實，LncRNA TINCR能通過競爭性結合miR-375，從而下調miR-375表達，起到促進腫瘤進展的作用，而大量研究表明miR-375在肝癌中發揮抑制腫瘤的功能[26-27]。因此，可以推測通過降低LncRNA TINCR水平能增加miR-375表達，從而抑制HCC進展，能顯著改善HCC預后。

綜上所述，肝癌組織LncRNA TINCR表達水平與肝癌預后顯著相關，LncRNA TINCR表達水平升高則預示著預后不佳，因此LncRNA TINCR可能是改善肝癌術后長期生存的有效治療靶點。

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（收稿日期：2019-09-17）