白假絲酵母環(huán)核苷酸磷酸二酯酶2的異源表達(dá)、純化與酶學(xué)特性分析

李赤霞，陳 瀅，張 萌，陳玉娟，田元元，王友升,3,

（1.北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類(lèi)健康高精尖創(chuàng)新中心，北京工商大學(xué)輕工科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 100048；

2.山東凱普菲特生物科技有限公司，山東 日照 276800；3.日照華偉大健康產(chǎn)業(yè)研究院，山東 日照 276800）

白假絲酵母（Candida albicans）屬于食源性致病酵母菌[1]，近年來(lái)在國(guó)內(nèi)外食品中常檢出C. albicans，其中乳制品是易被其污染的第一大類(lèi)產(chǎn)品[2]。C. albicans在正常情況下呈卵圓形，不引起疾病，而當(dāng)機(jī)體免疫力低下或菌群失調(diào)時(shí)，會(huì)改變生長(zhǎng)形式，出芽生成假菌絲并感染機(jī)體細(xì)胞，最終導(dǎo)致生理性疾病的發(fā)生[3]。C. albicans作為食品中的條件致病菌，其致死率可達(dá)40%[4]，所以對(duì)其毒性和菌絲生長(zhǎng)的研究極為重要。環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）作為生物體內(nèi)第二信使調(diào)控著重要的生理代謝反應(yīng)，而磷酸二酯酶（phosphodiesterase，PDE）是降解環(huán)核苷酸的一類(lèi)酶[5]。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在約30 種PDE，但是在真菌生物中，目前僅有兩類(lèi)PDE被發(fā)現(xiàn)，其中PDE1屬于II類(lèi)PDE超家族成員，而PDE2屬于I類(lèi)PDE超家族成員，其對(duì)cAMP具有較高的親和力[6-8]，且PDE2與人類(lèi)PDEs蛋白具有相似的折疊結(jié)構(gòu)[9]。研究表明，cAMP信號(hào)通路在酵母的細(xì)胞壁合成、細(xì)胞生長(zhǎng)等生長(zhǎng)代謝活動(dòng)以及致病毒性中起到重要作用[10-16]；同時(shí)，Wilson等[14]對(duì)C. albicansPDE的研究表明，pde2基因的缺失會(huì)導(dǎo)致菌絲發(fā)育不完全和細(xì)胞壁不完整，從而對(duì)其毒性產(chǎn)生影響；有學(xué)者證明部分抑菌劑對(duì)C. albicans抑菌作用的主要機(jī)制是抑制PDE2蛋白的表達(dá)[17-19]。所以目前對(duì)C. albicansPDE2蛋白的研究已成為其假菌絲生長(zhǎng)和毒性調(diào)控的重要研究方向。

本研究將大腸桿菌……