鵝骨膠原蛋白鈣螯合肽的分離純化及結構鑒定

周名洋，何雨欣，孫楊贏，潘道東，曹錦軒

（寧波大學食品與藥學學院，浙江省動物蛋白食品精深加工技術重點實驗室，浙江 寧波 315800）

金屬離子在許多代謝過程中起著重要作用，如穩定結構和控制氧化還原進程等。在所有的二價金屬離子中，鈣離子的作用尤為突出，如提供骨架和充當信使等。缺鈣會導致骨質疏松、高血壓和腸癌等疾病[1]，嚴重危害人們的身體健康。如今人口老齡化嚴重，缺鈣人群比例大，離子鈣是主要的補鈣劑，但它會在腸道形成磷酸鈣沉淀，生物利用度較低[2]。近年來有機鈣補劑如鈣螯合肽已經成為研究熱點[3]，這些小分子肽耗能少、轉運速度快，而且是不易飽和的載體[4]，應用前景廣泛。目前，國內外很多學者已從大豆、羅非魚、鱈魚、蝦、豬血漿等食源性原料中分離得到具有鈣螯合功能的生物活性肽[5-10]。

鵝骨是鵝肉加工過程中的副產物，營養豐富，其蛋白質含量豐富，約為17%[11]。研究表明90%以上的骨蛋白是膠原蛋白[12]，而幾乎所有骨膠原都是I型膠原蛋白[13]。蔣金利等[14]研究發現小分子鵝骨膠原多肽可以有效促進大鼠骨髓間充質干細胞增殖及向成骨細胞分化，從而起到抑制骨質疏松的作用。然而，從鵝骨膠原蛋白水解物中分離純化出特定的鈣螯合肽的研究卻鮮有報道。

本研究以鵝骨膠原蛋白為原料，采用堿性蛋白酶制備鈣螯合肽，通過現代色譜分離技術進行純化，利用液相色譜-串聯質譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）、紫外光譜（ultroviolet spectroscopy，UV）和傅里葉變換紅外光譜（Fourier transform infrared spectroscopy，FTIR）測定其氨基酸序列和結構，合成結構明確的鵝骨膠原蛋白活性肽，并對其活性進行驗證。……