肌肉組織中氯霉素、硝基咪唑等類殘留的同時檢測

徐娜 劉志敏 欒竹青

摘要：建立肌肉組織中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑藥物殘留的液相色譜質譜聯用的檢測方法。樣品經乙酸乙酯提取后，水和乙腈為流動相梯度洗脫，質譜正負源切換進行定性定量分析，氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素的定量限為0.1ug/kg，甲硝唑、地美硝唑和洛硝噠唑的定量限為1.0ug/kg。

關鍵詞：組織；氯霉素；甲硝唑；液相色譜質譜

1. 引言

隨著生活水平的提高，人們越來越重視食品安全，希望吃的食物能夠健康放心。人們開始關注藥物殘留的問題，特別是人畜共患藥的殘留對人體的傷害很大，GB31650-2019標準中規(guī)定氯霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑在動物性食品中不得檢出，氟苯尼考、甲砜霉素在動物性食品中規(guī)定了最大高殘留限量。這次我們主要研究了肌肉組織樣品通過乙酸乙酯提取，能夠同時檢測氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑藥物的殘留。

2. 實驗部分

2.1 試劑與儀器

乙酸乙酯；德國默克，色譜純；甲醇；德國默克，色譜純；標準品 DR公司，純度99%

液相色譜串聯質譜儀 AB5500，配有電噴霧離子源；分析天平；美國奧豪斯；冷凍離心機；美國貝克曼；

2.2 標準品溶液的配置

分別稱取1 0 m g（精確至0.001mg）的標準品于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配成100mg/l的標準溶液。

2.3樣品的處理

稱取均勻的樣品5.00g于50ml離心管中，加入50ul 40ug/l氯霉素D5內標溶液、50ul 100ug/l的替硝唑溶液、20ml乙酸乙酯渦旋混勻，5000r/min離心，取上清液于100ml雞心瓶瓶中，殘渣再加入20ml乙酸乙酯渦旋混勻，離心，合并上清液于40℃旋轉蒸發(fā)儀濃縮，最后用氮氣吹干，用1ml的1+9乙腈水溶液溶解，加1ml正己烷渦旋靜置，取1ml下層液于1.5mlEP管中，于10000r/min離心機離心5min，取下層液過0.22um濾膜上機檢測。

2.4 色譜質譜條件

液相條件：C18色譜柱，流速0.3ml/min，流動相水和乙腈梯度洗脫。

質譜條件：電噴霧離子源，正、負離子掃描，多反應監(jiān)測，噴霧電壓、氣簾氣、霧化氣、碰撞能量調節(jié)使質譜靈敏度達到最佳。

3. 結果

3.1 色譜質譜條件的優(yōu)化

流動相優(yōu)化如下：

色譜柱：C18，100mm*2.1mm*5um或相當，柱溫30℃。流動相：水，乙腈，流速0.3ml/min。

3.2 質譜條件

A. 離子源：電噴霧離子源ESI

B.掃描模式：正、負離子掃描

C.檢測方式：多反應檢測（MRM）

D.噴霧電壓：正5500V，負 4500V

C.氣簾氣35，霧化氣50

D.定量定性離子和碰撞能量條件如下表。

3.3 回收率實驗

取一陰性樣品中分別添加定量限的1倍、2倍、3倍，3個濃度6個平行樣品的混合標準溶液，其回收率結果均大于80%，平行樣品間的相對標準偏差均在10%以內，滿足檢測的要求。

4. 討論

4.1 樣品提取及凈化的選擇

樣品用乙腈、乙酸乙酯、甲醇溶劑提取，乙腈和甲醇的提取效果、回收率不如乙酸乙酯，但是乙酸乙酯提取的雜質較多，提取后用正己烷除脂，也可以考慮C18固相萃取小柱凈化，C18小柱的凈化效果較好，最后綜合考慮，選用乙酸乙酯提取，正己烷凈化，這樣既省事又省費用。

4.2 基質效應

由于基質效應，可以用陰性的基質配制基質標曲來消除基質效應；也可以用內標溶液，但是內標較貴，可以將性質相近的藥品選用一個內標，我們將氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素用氯霉素-D5做內標，甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑用替硝唑做內標，這樣可以消除部分誤差。

4.3 流動相的選擇

我們用甲醇-水、甲醇-0.1%的甲酸水、乙腈-水、乙腈-0.1%的甲酸水做流動相，做了實驗，綜合考慮峰形、靈敏度、基線噪音等因素，選擇乙腈-水作為流動相。

5. 總結

利用正負源切換的方式同時檢測氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素、甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑，其中氯霉素、氟苯尼考、甲砜霉素定量限為 0.1ug/kg，甲硝唑、地美硝唑、洛硝噠唑定量限為1.0ug/kg，對于檢測人員來說，既節(jié)省了時間又方便了操作，同時也節(jié)省了費用。

作者簡介：

通訊作者：徐娜（1980-），女，漢，山東省煙臺市人，本科，工程師；研究方向：食品檢測

劉志敏（1982-），男，漢族，山東省菏澤市人，研究生，副高級工程師；研究方向：食品檢測

欒竹青（1989-），女，漢族，山東省煙臺市人，研究生，工程師；研究方向：食品檢測