CG8005基因在果蠅睪丸生殖細胞中的功能分析

陳萬銀，顏一丹，欒曉瑾，王敏，方杰

研究報告

基因在果蠅睪丸生殖細胞中的功能分析

陳萬銀，顏一丹，欒曉瑾，王敏，方杰

江蘇大學附屬醫院婦科，鎮江 212001

生殖細胞的自我更新及分化過程對于男性不育及生殖細胞腫瘤的發生至關重要，基因作為果蠅()睪丸生殖干細胞的調控因子之一，其功能機制尚不清楚。為了探討基因在果蠅睪丸生殖細胞中的生物學功能，本研究首先通過UAS-gal4系統介導的RNAi途徑，驅動果蠅睪丸生殖細胞和包囊細胞中UAS-RNAi的表達，觀察后代雄性果蠅的生育能力；其次，通過免疫熒光染色方法檢測對照組和RNAi雄性果蠅睪丸中Vasa、IBI、鋅指結構域1蛋白(Zn finger homeodomain 1, Zfh1)、眼缺陷蛋白(eyes absent, Eya)、DE-cad、FasIII以及磷酸化組蛋白H3 (phospho-histone H3, PH3)、TUNEL等表達模式；最后，使用小干擾RNA (siRNA)在果蠅 S2 細胞中將基因表達沉默，用PH3檢測對照組和siRNA組中果蠅S2細胞增殖能力，TUNEL及流式凋亡檢測技術分析果蠅S2細胞凋亡情況；通過熒光定量PCR檢測剪接體亞基的mRNA水平，觀察剪接體的相對表達量。結果表明，與對照組果蠅比較，在生殖細胞和包囊細胞中缺失基因，雄性果蠅的生育能力降低甚至完全喪失；另外，nos-gal4驅動UAS-RNAi的雄性果蠅中生殖細胞及生殖融合體消失，并且生殖細胞增殖能力減弱，而tj-gal4驅動UAS-RNAi的果蠅睪丸中出現生殖細胞樣腫瘤；在果蠅S2細胞中敲減基因導致細胞凋亡增加，增殖受到抑制；基因在果蠅S2細胞中沉默引起剪接體亞基的信使RNA水平升高。可見，基因在果蠅睪丸生殖細胞的自我更新與分化過程中必不可少，其缺失可能導致生殖細胞存活受限甚至生殖細胞樣腫瘤的形成；……