MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1在胃癌中的表達及臨床意義

孔瓊瓊 錢立勇 (舟山醫院病理科，浙江 舟山 312000)

胃癌發病率和死亡率呈不斷上升趨勢〔1〕。目前，手術切除是治療胃癌主要手段，且取得很大進步。但由于大部分發病初期無明顯癥狀，就診時通常已進入中晚期，從而錯失了最佳手術治療時機，且很多患者在手術切除后出現復發或轉移，影響預后，嚴重威脅患者生命健康〔2～4〕。胃癌發生發展是多個基因調節的多因素和多步驟的復雜過程，近年研究發現錯配修復蛋白(MLH)1、程序性死亡受體配體(PD-L)1、熱休克因子(HSF)1、沉默信息調節因子(SIRT)1在癌組織中異常表達，但在胃癌中研究甚少，缺乏可靠的參考價值〔5,6〕。本研究探討MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1在胃癌中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇舟山醫院于2014年1月至2018年12月143例胃癌患者癌組織標本及癌旁正常組織作為研究對象。納入標準：①經臨床表現、影像學及組織病理學證實為胃癌；②病理分期Ⅰ～Ⅲ期；③行胃癌根治性手術切除腫瘤；④臨床資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②術前采用放療、化療者；③無完整規范的術后病理報告及隨訪資料。納入的143例患者中，男85例，女58例；年齡41～79〔平均(62.74±7.18)〕歲；TNM分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期67例，Ⅲ期41例；分化程度：高分化32例，中分化76例，低分化35例；腫瘤復發轉移34例。

1.2免疫組化法測定MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達 取胃癌組織和癌旁組織標本石蠟包埋切片，以免疫組織化學SP法檢測MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達。采用MLH1單克隆抗體、PD-L1單克隆抗體、HSF1單克隆抗體和SIRT1單克隆抗體工作濃度分別為1∶100、1∶100、1∶500和1∶500，由同一病理科人員嚴格依據北京中杉金橋生物公司免疫組織化學SP法試劑盒檢測，以已知抗體陽性標本作為陽性對照，并且以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判定 每張切片選取連續5個高倍視野，每個視野計數200個細胞，對其中所有陽性染色分別計數，計算陽性細胞率。①按照陽性細胞率進行評分，0%～5%計為0分，6%～25%計為1分，26%～50%計為2分，>50%計為3分；②按照細胞染色強度進行評分，細胞未著色計為0分，淡黃色計為1分，棕黃色計為2分，棕褐色計為3分。將上述2種評分相乘，判定陽性表達，其中0～1分為陰性，2～5分為弱陽性，6～8分為陽性，9分為強陽性。

1.4統計學方法 采用SPSS19.0軟件行χ2檢驗。

2 結 果

2.1MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達陽性率比較 癌組織MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達陽性率明顯高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

表1 兩組MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達陽性率比較〔n=143,n(%)〕

2.2不同病理特征MLH1蛋白表達陽性率比較 不同性別、年齡、TNM分期和分化程度MLH1蛋白表達陽性率比較無明顯差異(P>0.05)；腫瘤復發轉移者MLH1蛋白表達陽性率明顯高于無腫瘤復發轉移者(P<0.05)。見表2。

2.3不同病理特征PD-L1蛋白表達陽性率比較 不同性別、年齡和TNM分期PD-L1蛋白表達陽性率比較無明顯差異(P>0.05)；分化程度低和腫瘤復發轉移者PD-L1蛋白表達陽性率明顯高于分化程度較高無腫瘤復發轉移者(P<0.05)。見表2。

2.4不同病理特征HSF1蛋白表達陽性率比較 不同性別、年齡、TNM分期和分化程度HSF1蛋白表達陽性率比較無明顯差異(P>0.05)；腫瘤復發轉移者HSF1蛋白表達陽性率明顯高于無腫瘤復發轉移者(P<0.05)。見表2。

2.5不同病理特征SIRT1蛋白表達陽性率比較 不同性別、年齡、TNM分期和分化程度征SIRT1蛋白表達陽性率比較無明顯差異(P>0.05)；腫瘤復發轉移者SIRT1蛋白表達陽性率明顯高于無腫瘤復發轉移者(P<0.05)。見表2。

表2 不同病理特征MLH1、PD-L1、HSF1、SIRT1蛋白表達陽性率比較〔n(%),n=81〕

3 討 論

胃癌具體發病機制尚未完全闡明，認為可能是多因素、多基因參與共同發病〔7，8〕。MLH1是錯配修復酶，是遺傳易感基因，具有降低自發性突變、維持基因組穩定、增強DNA復制的忠實性及修復DNA堿基錯配的功能〔9〕。臨床研究顯示，惡性腫瘤組織中MLH1異常表達〔10，11〕。本研究結果表明胃癌組織中MLH1表達升高，且與腫瘤復發轉移相關，故認為MLH1可作為推測胃癌復發轉移潛能的敏感指標之一。PD-L1是B7家族成員，并且是程序性死亡分子1的配體，其在T細胞、B細胞、樹突細胞和巨噬細胞中廣泛表達，在上述細胞中表達受干擾素-γ刺激后；提呈抗原細胞表面的PD-L1分子及T細胞表面的成形死亡分子-1結合發揮作用，在免疫耐受的維持和誘導方面具有重要作用〔12，13〕。在多種惡性腫瘤細胞中PD-L1異常表達，并且和惡性腫瘤細胞的預后及惡性程度有關，和腫瘤浸潤淋巴細胞密切相關；PD-L1和腫瘤浸潤淋巴細胞表達的程序性死亡分子1結合，抑制腫瘤浸潤淋巴細胞的功能，導致腫瘤免疫逃逸〔14，15〕。此外研究發現，腫瘤微環境中調節性T細胞(Treg)存在PD-L1分子表達〔16〕。目前，臨床上關于PD-L1在胃癌中表達甚少，缺乏可靠的參考價值。本研究表明，胃癌組織中PD-L1表達升高，且與分化程度和腫瘤復發轉移相關，故而認為PD-L1可作為推測胃癌復發轉移和分化程度潛能的敏感指標之一。HSF1是真核細胞熱休克應激反應的一種主要轉錄因子，且可編程腫瘤間質細胞，促進惡性腫瘤形成。HSF1在應激條件下可改變蛋白質的穩定性，促使細胞轉化及惡性增殖，從而促使腫瘤細胞的生存和增殖；HSF1作為一種轉錄因子，可使腫瘤間質發生功能和結構上的重塑。研究報道顯示，在食管鱗癌、前列腺癌、乳腺癌和肝癌等多種癌組織中HSF1表達上調〔17〕。本研究表明，胃癌組織中HSF1表達升高，且與腫瘤復發轉移相關，故而認為HSF1可作為推測胃癌復發轉移潛能的敏感指標之一。最新研究發現，SIRT1可依賴尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸，使多種蛋白質的賴氨酸殘基發生去乙?；?8〕。SIRT1屬SIRTUIN家族，可調節基因表達，參與調節機體細胞內多種生物學事件，特別是細胞生存、凋亡及分化等代謝中具有重要作用。近期相關研究報道顯示，SIRT1在急性髓細胞性白血病、前列腺癌及肝癌中的表達顯著升高〔19，20〕。本研究表明，胃癌組織中SIRT1表達升高，且與腫瘤復發轉移相關，故而認為SIRT1可作為推測胃癌復發轉移潛能的敏感指標之一。