肺結(jié)核患者血清白細(xì)胞介素17、CD4+、CD3+細(xì)胞表達(dá)變化及其意義探討

陳 勇，凌 建，何 靜，譚春萍，余江萍，楊 琴

(1.四川省綿陽市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 綿陽 621000；2.四川綿陽四〇四醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 綿陽 621000；3.四川省攀枝花市第二人民醫(yī)院 a.檢驗(yàn)科，b耳鼻喉科，四川 攀枝花 617000)

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性傳染病，也是免疫紊亂性疾病，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫機(jī)制在肺結(jié)核發(fā)生發(fā)展中占據(jù)重要地位[1]。臨床研究[2]發(fā)現(xiàn)，結(jié)核分枝桿菌引起的免疫反應(yīng)是一把雙刃劍，調(diào)節(jié)適當(dāng)時(shí)能輔助機(jī)體消除結(jié)核分枝桿菌，調(diào)節(jié)不當(dāng)時(shí)則能導(dǎo)致組織病理損傷，故評(píng)估免疫功能對(duì)肺結(jié)核診療均有利。CD4+、CD3+為T淋巴細(xì)胞亞群之一，CD4+T細(xì)胞及CD3+T細(xì)胞均參與細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)過程，對(duì)結(jié)核病的發(fā)病、演變及轉(zhuǎn)歸均有重要影響[3]。白細(xì)胞介素17(IL-17)是由輔助性T細(xì)胞17(Th17)分泌的細(xì)胞因子，IL-17能招募中性粒細(xì)胞、促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子、生長因子及黏附分子，具有促炎、促細(xì)胞增殖作用[4]。IL-17也是一種具有雙重效應(yīng)的細(xì)胞因子，正常表達(dá)下可發(fā)揮保護(hù)性免疫反應(yīng)，高表達(dá)時(shí)則引起免疫損傷，對(duì)結(jié)核病發(fā)生發(fā)展可能發(fā)揮重要作用，但Th17亞群的形成及分泌易受其他細(xì)胞因子的抑制，使血清IL-17表達(dá)水平受到影響[5]。本研究分析我院104例肺結(jié)核患者臨床資料，評(píng)估血清IL-17及外周血CD4+、CD3+表達(dá)水平與肺結(jié)核診療的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年1月至2019年9月綿陽市人民醫(yī)院收治的104例肺結(jié)核患者(肺結(jié)核組)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華人民共和國衛(wèi)生部2012年頒布的肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②初治；③年齡≥18歲；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往放化療史；②合并乙肝病毒、丙肝病毒等感染性疾病；③伴類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病。納入同期92例非結(jié)核的呼吸系統(tǒng)疾病患者為對(duì)照組。肺結(jié)核組男55例，女49例；年齡18～64歲[(37.41±9.05)]歲。對(duì)照組男52例，女40例；年齡20～62歲[(36.59±8.27)歲]；支氣管肺炎25例，大葉性肺炎19例，慢性支氣管炎39例，支氣管擴(kuò)張9例。兩組基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法肺結(jié)核組根據(jù)《肺結(jié)核診斷和治療指南》[7]給予抗結(jié)核治療，在治療前及治療6個(gè)月后收集空腹外周靜脈血3 ml，對(duì)照組則收集體檢當(dāng)日空腹外周靜脈血3 ml，采用德普1000分析儀(試劑盒由西門子公司生產(chǎn))檢測血清IL-17水平，將10 μl待測血清經(jīng)孵育、洗滌后，加入1 μl辣根過氧化物酶標(biāo)記抗體，再經(jīng)洗滌、顯色，判讀結(jié)果；使用流式細(xì)胞儀(貝克曼FC500)檢測外周血CD4+、CD3+的陽性表達(dá)率，在100 μl待測樣本中加入20 μl淋巴細(xì)胞檢測熒光抗體試劑，在室溫下避光染色，經(jīng)溶血、洗滌、固定，獲得熒光抗體染色陽性細(xì)胞百分率。并在肺結(jié)核患者治療前利用影像學(xué)檢查評(píng)估肺部病灶受累情況，將肺部病灶累及>2個(gè)肺葉野者納入多葉受累組，≤2個(gè)肺葉野者納入病灶局限組；在治療6個(gè)月后，觀察病灶吸收情況，將病灶縮小≥50%者納入病灶吸收良好組，<50%或病灶擴(kuò)大者納入病灶吸收不良組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)；診斷價(jià)值分析采用受試者工作曲線(ROC)；相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺結(jié)核組治療前后及對(duì)照組血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平比較治療6個(gè)月后，肺結(jié)核組血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平均較治療前升高，且肺結(jié)核組治療前后血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平均低于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平比較

2.2 血清IL-17及外周血CD4+、CD3+對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值血清IL-17及外周血CD4+、CD3+對(duì)肺結(jié)核均有較高診斷價(jià)值(P<0.05)，其Cut-off值分別為65.20 pg/ml、41.50 %、65.50 %，見表2、圖1。

表2 血清IL-17及外周血CD4+、CD3+對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值

圖1 血清IL-17及外周血CD4+、CD3+診斷肺結(jié)核的ROC曲線

2.3 不同肺部病灶受累者治療前血清IL-17及外周血CD4+、CD3+比較104例肺結(jié)核患者中多葉受累組69例(66.35%)，病灶局限組35例(33.65%)；多葉受累組治療前血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平低于病灶局限組(P<0.05)，見表3。

表3 不同肺部病灶受累者治療前血清IL-17及外周血CD4+、CD3+比較

2.4 不同病灶吸收情況者治療后血清IL-17及外周血CD4+、CD3+比較104例肺結(jié)核患者中病灶吸收良好組41例(39.42%)，病灶吸收不良組63例(60.58%)；病灶吸收良好組治療后血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平高于病灶吸收不良組(P<0.05)，見表4。

表4 不同病灶吸收情況者治療后血清IL-17及外周血CD4+、CD3+比較

2.5 病灶受累及病灶吸收情況與治療前后血清IL-17及外周血CD4+、CD3+的關(guān)系肺結(jié)核患者病灶受累程度與治療前血清IL-17及外周血CD4+、CD3+呈負(fù)相關(guān)(r=-0.39，-0.41，-0.33，均P<0.05)，病灶吸收程度與治療后血清IL-17及外周血CD4+、CD3+呈正相關(guān)(r=0.31，0.34，0.30，均P<0.05)。

3 討論

目前，肺結(jié)核診斷及治療效果評(píng)估主要依據(jù)結(jié)核分枝桿菌的檢測，這也使菌陰肺結(jié)核診斷困難，且早期治療反應(yīng)指標(biāo)為治療2個(gè)月的痰涂片，評(píng)估周期過長，不利于臨床診療[8]。因此，尋找方便檢測且敏感性較高的觀察指標(biāo)，有其必要性。結(jié)核分枝桿菌為胞內(nèi)菌，可激發(fā)保護(hù)性免疫及免疫病理損傷T細(xì)胞反應(yīng)，故觀察T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫變化情況，也是近年肺結(jié)核診療的新方向[9]。CD3+分子存在于成熟T細(xì)胞表面，可轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞抗原受體(TCP)識(shí)別抗原活化信號(hào)，激活T細(xì)胞，增強(qiáng)機(jī)體細(xì)胞免疫[10]。CD4+分子主要分布于T細(xì)胞及胸腺細(xì)胞表面，CD4+T細(xì)胞在細(xì)胞免疫中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，幼稚CD4+T細(xì)胞可分化為輔助性T細(xì)胞1(Th1)、輔助性T細(xì)胞2(Th2)等功能成熟的亞群，分別執(zhí)行不同生物學(xué)功能，Th1/Th2細(xì)胞失衡是引起免疫功能下降的重要原因[11]。而研究[12]發(fā)現(xiàn)，在結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，CD4+T細(xì)胞能分泌干擾素-γ(IFN-γ)等細(xì)胞因子，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞活化，使胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌生長受到抑制，而在控制病情進(jìn)展中發(fā)揮一定作用。本研究也發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核組治療后外周血CD4+、CD3+水平均較治療前升高，肺結(jié)核組治療前后外周血CD4+、CD3+水平也均低于對(duì)照組，且治療前外周血CD4+、CD3+對(duì)肺結(jié)核均具有較高診斷價(jià)值。提示，CD4+、CD3+在肺結(jié)核診療中具有一定應(yīng)用價(jià)值。分析其原因可能與肺結(jié)核發(fā)生時(shí)，機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損，造成CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞減少，引起CD4+、CD3+陽性表達(dá)率顯著降低[13]；而經(jīng)抗結(jié)核治療后，細(xì)胞免疫改善，使CD4+、CD3+水平恢復(fù)有關(guān)。

多葉受累組治療前外周血CD4+、CD3+水平均低于病灶局限組，且病灶受累程度與治療前外周血CD4+、CD3+呈負(fù)相關(guān)。提示病灶局限者免疫功能受損程度較輕，CD4+、CD3+水平下降幅度較小[14]。且病灶吸收良好組治療后外周血CD4+、CD3+水平均高于病灶吸收不良組，病灶吸收程度與治療后外周血CD4+、CD3+呈正相關(guān)。說明抗結(jié)核治療效果較好者，免疫功能也能得到有效修復(fù)，而未得到較好療效的病灶吸收不良者，免疫功能仍然較低，感染控制較為困難。因此，檢測外周血CD4+、CD3+表達(dá)水平，不僅能輔助診斷肺結(jié)核，對(duì)治療效果的評(píng)估也有利。本文以CD4+、CD3+T淋巴細(xì)胞百分比作為評(píng)估CD4+、CD3+水平的指標(biāo)，T淋巴細(xì)胞百分比也可受其他細(xì)胞亞群的變化出現(xiàn)波動(dòng)，造成結(jié)果的偏差。本研究作為回顧性分析，收集數(shù)據(jù)有限，未能獲得T淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)變化情況，還需后續(xù)前瞻性研究的論證。

本研究中，肺結(jié)核組治療后血清IL-17水平較治療前升高，肺結(jié)核組治療前后血清IL-17水平均低于對(duì)照組，且治療前血清IL-17對(duì)肺結(jié)核具有較高診斷價(jià)值。提示IL-17可能參與肺結(jié)核的發(fā)生發(fā)展，對(duì)肺結(jié)核診療評(píng)估有積極意義。究其原因可能與肺結(jié)核使機(jī)體免疫功能受到抑制，細(xì)胞因子分泌失衡，造成TH17細(xì)胞形成受限，分泌IL-17減少；隨著治療對(duì)免疫功能的改善，上述病理變化又能得到修復(fù)，引起IL-17水平回升有關(guān)。不僅如此，多葉受累組治療前血清IL-17水平低于病灶局限組，病灶吸收良好組治療后血清IL-17水平高于病灶吸收不良組，且病灶受累程度與治療前血清IL-17呈顯著負(fù)相關(guān)，病灶吸收程度與治療后血清IL-17呈顯著正相關(guān)。提示，血清IL-17水平也能對(duì)肺結(jié)核病情嚴(yán)重程度及治療效果而改變。考慮該結(jié)果與IL-17的分泌受細(xì)胞因子影響較大，使其血清含量隨機(jī)體免疫功能的變化而改變有關(guān)。因此，入院期間監(jiān)測血清IL-17水平，也能輔助評(píng)估肺結(jié)核病情進(jìn)展情況，于臨床診療有利。

綜上所述，血清IL-17及外周血CD4+、CD3+水平對(duì)肺結(jié)核診斷及療效評(píng)估均有利，臨床應(yīng)在患者入院期間增強(qiáng)相關(guān)檢測，以全面評(píng)估病情進(jìn)展。