杜仲極細粉與傳統飲片有效成分溶出行為及大鼠藥動學比較研究

林上陽 周雅倩 謝輝 李偉東

摘要?目的：研究杜仲Eucommia ulmoides Oliv.極細粉與傳統飲片的體外溶出度及其在大鼠體內的生物利用度，揭示杜仲極細粉碎后主要活性成分的體內外溶出的變化，為杜仲極細粉的質量標準的制定提供科學依據。方法：激光粒度分析儀測定杜仲極細粉的粒徑;HPLC法測定杜仲極細粉與傳統飲片有效成分在不同溶出介質中溶出度。UPLC-MS/MS測定杜仲京尼平苷酸的血藥濃度變化。結果：杜仲極細粉有效成分溶出總量都顯著高于杜仲傳統飲片（P<0.05），杜仲傳統飲片有效成分的溶出度和溶出速率均低于極細粉（P<0.05）。京尼平苷酸在大鼠體內的血藥濃度-時間數據符合二室模型，權重為1，高劑量極細粉組和高劑量水煎液組的主要藥動學參數為MRT（0-t）=（241.498±20.678）min和（135.084±13.571）min;Tmax=（132±26.833）min和（65±12.247）min;Cmax=（231.8±80.111）μg/L和（435.167±208.696）μg/L;AUC（0-t）=（61 947.696±27 073.105）μg/（L·min）和（63 212.803±31 981.087）μg/（L·min）;AUC（0-∞）=（62 327.808±27 079.977）μg/（L·min）和（63 910.596±31 686.357）μg/（L·min）。結論：杜仲極細粉碎后能顯著增加有效成分的溶出度和顯著提高有效成分的溶出速率，且可以增加京尼平苷酸在大鼠體內的停留時間。杜仲傳統飲片制備成極細粉具備可行性。

關鍵詞?杜仲;極細粉;傳統飲片;溶出度;生物利用度;京尼平苷酸;高效液相色譜法;超高效色譜-串聯質譜

Abstract?Objective：To study the in vitro dissolution rate of Eucommia ulmoides Oliv.ultrafine powder and traditional decoction pieces and its bioavailability in rats，and to reveal the changes in the in vivo and in vitro dissolution of the main active ingredients of Eucommia ulmoides Oliv.The formulation of quality standards provides a scientific basis.Methods：Laser particle size analyzer was used to determine the particle size of Eucommia ulmoides ultrafine powder; HPLC method was used to determine the dissolution of the effective components of Eucommia ulmoides ultrafine powder and traditional decoction pieces in different dissolution media.UPLC-MS/MS was used to determine the blood concentration of Eucommia geniposide.Results：The total dissolution of active ingredients of Eucommia ulmoides extra-fine powder was significantly higher than that of traditional eucommia ulmoides（P<0.05）.The dissolution rate and dissolution rate of active ingredients of eucommia ulmoides traditional decoction pieces were lower than those of ultrafine powder（P<0.05）.The plasma concentration-time data of geniposide in rats conformed to the two-compartment model，with a weight of 1.The main pharmacokinetic parameters of the high-dose ultrafine powder group and the high-dose decoction group were MRT（0-t）=（241.498±20.678）and（135.084±13.571）min; Tmax=（132±26.833）and（65±12.247）min; Cmax=（231.8±80.111）and（435.167±208.696）μg/L; AUC（0-t）=（61 947.696±27 073.105）and（63 212.803±31 981.087）μg/（L·min）; AUC（0-∞）=（62 327.808±27 079.977）and（63 910.596±31 686.357）μg/（L·min）.Conclusion：Eucommia ulmoides can significantly increase the dissolution rate of the active ingredients and the dissolution rate of the active ingredients after extremely fine pulverization，and can increase the residence time of geniposide acid in rats.Traditional decoction pieces of Eucommia ulmoides can be prepared into very fine powder.

Keywords?Eucommia ulmoides; Ultra-fine powder; Traditional decoction pieces; Dissolution; Bioavailability; Geniposide acid; High performance liquid chromatography; Ultra performance chromatography-tandem mass spectrometry（Chinese keywords please use Chinese）

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.006

杜仲為杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv的干燥樹皮，是我國一種名貴珍稀的滋補類藥材，有補肝腎、安胎、強筋骨等功效[1-2]。杜仲作為一種皮類藥材，其皮中獨有的細密、富彈性的橡膠絲決定其有效成分比較難于溶出[3]，超微粉碎技術是一種利用機械或流體動力的方法，把原材料加工成微米級甚至納米級的超微粉的技術方法，使藥材比表面積增加，孔隙率增大，使有效成分的溶出速度和溶出率提高，從而加快起效速度并增強療效[4];利用超微粉碎技術，用小于原處方的藥量即可獲得原處方的療效[5]。本實驗運用HPLC法測定杜仲極細粉與傳統飲片中的有效成分京尼平苷酸（GPA）、京尼平（GP）和松脂醇二葡萄糖苷（PDG）在3種不同溶出介質中的溶出行為[6]，采用UPLC-MS/MS測定大鼠體內京尼平苷酸的血藥濃度，比較杜仲級細分和傳統飲片在大鼠體內的藥代動力學參數，以期揭示杜仲經極細粉碎后主要成分在體外和體內的變化規律及其生物利用度，為杜仲極細粉的臨床應用提供科學依據。

1?儀器與試藥

1.1?儀器?貝利微粉機（濟南倍力粉技術工程有限公司，型號：BFM-T6BI）;超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，型號：KQ-500E）;多功能粉碎機（永康市鉑歐五金制品有限公司，型號：2000Y）;萬分之一天平（日本島津公司，日本，型號：ATY 124）;激光粒度分析儀（貝克曼庫爾特有限公司，美國，型號：LS 13320）;高效液相色譜儀（配備PDA檢測器，Waters公司，美國，型號：Waters e2695）;智能溶出試驗儀（天津天大天發科技有限公司，型號：ZRS-8G）;旋轉蒸發儀（Buchi有限公司，瑞士，型號：R100）;離心機（美國Thermo公司，美國，型號：Mirocl 17）;電熱鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司，型號：DHG-9140A）;旋蒸儀（Buchi有限公司，瑞士，型號：R210）;試管振蕩器（Heidolph有限公司，德國，型號：Multi Reax）;真空離心濃縮儀（Labconco CentriVap，美國，型號：CentriVap Complete Vacuum Concentrators）;液相色譜輸液泵（日本島津公司，日本，型號：LC-10ATvp）;MS系統三重四級桿色譜儀（AB Sciex公司，美國，型號：AB5500）。

1.2?試劑?京尼平苷酸對照品（質量分數為98%，南京世洲生物科技有限公司，批號：27741-01-1）;京尼平對照品（質量分數為98%，南京世洲生物科技有限公司，批號：6902-77-8）;松脂醇二葡萄糖苷對照品（質量分數為98%，南京世洲生物科技有限公司，批號：63902-38-5）;葛根素（質量分數為98%，南京世洲生物科技有限公司，批號：20180203）;胃蛋白酶（酶活力1∶10 000，100 g，福建飛凈生物科技有限公司，批號：181015）;胰蛋白酶（酶活力1∶250，100 g，福建飛凈生物科技有限公司，批號：181015）;氫氧化鈉（分析純，500 g，南京化學試劑有限公司，批號：10091721035）;磷酸二氫鉀（分析純，500 g，廣東光華科技股份有限公司，批號：20140520）;鹽酸（分析純，4 L，上海凌峰化學試劑有限公司，批號：20140220）;甲醇（色譜純，4 L，Tedia Company，美國，批號：20035159）;甲酸（色譜純，500 mL，Acslabchem，美國，批號：C10332080）。

1.3?分析樣品?杜仲藥材（采購于四川成都，經南京中醫藥大學陳建偉教授鑒定為杜仲科植物Eucommia ulmoides Oliv.的干燥樹皮），生產日期分別為2017年2月4日（第1批批號：20170204）、2017年4月22日（第2批批號：20170422）、2017年6月5日（第3批批號：20170605）。

1.4?實驗動物?雄性SD大鼠，SPF級，體質量180～220 g，購于南京中醫藥大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（浙）2004-0001。動物飼養在飼養溫度為20 ℃，相對濕度為60%，每天光照12 h的環境中。本實驗動物飼養于南京中醫藥大學藥物安全評價中心，所有動物相關研究均符合南京中醫藥大學動物倫理委員會的管理準則（倫理審批號：201903A011）。

2?方法與結果

2.1?杜仲極細粉的制備及粒度測定?利用超微粉碎機將經預粉碎后的杜仲普通粉體進行粉碎，得到杜仲極細粉。實驗中為探究極細粉與傳統飲片體外溶出差異而設置了3個不同批次，分別為20170204、20170422和20170603。利用激光粒度儀測定上述3批杜仲極細粉的粒徑，繪制出以體積為基準的粒徑頻率分布圖，得到各極細粉的D10值、中位徑D50值和D90值，各粒徑結果如表1。

2.2?杜仲極細粉有效成分溶出總量的測定

2.2.1?色譜條件?Kromasil 100-5-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動相：0.1%甲酸（A）-甲醇（B），梯度洗脫（0～5 min，95%～82%A;5～15 min，82%～81%A;15～28 min，81%～77%A;28～44 min，77%～75%A;44～54 min，77%～74%A）;流速1 mL/min;柱溫30 ℃;進樣量10 μL;京尼平苷酸和京尼平的檢測波長為250 nm，松脂醇二葡萄糖苷的檢測波長為277 nm。在上述色譜條件下，各色譜峰分離度良好。

2.2.2?對照品溶液的制備?分別精密稱取京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷的對照品各1.78、0.96、3.48 mg，置于10 mL的量瓶中，再加甲醇定容為分別含京尼平苷酸0.178 mg/mL、京尼平0.096 mg/mL、松脂醇二葡萄糖苷0.348 mg/mL的溶液，制得對照品溶液。

2.2.3?供試品溶液的制備?取3個不同生產批次分別編號為（20170204、20170422、20170603）的杜仲極細粉和傳統飲片，一式3份，精密取1 g粉末，置于50 mL具塞圓底燒瓶中，精密加入純水20 mL，稱重，將燒瓶放在溫度為100 ℃的恒溫水浴鍋中回流提取1 h，放冷，再稱重，用純水補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液，按“2.2.1”項下的色譜條件進行測定。

2.2.4?專屬性試驗?分別取對照品溶液和供試品溶液進行HPLC檢測，記錄色譜圖并對專屬性進行比較，結果顯示京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷均有良好的專屬性。混合對照品（含有京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷）和供試品的HPLC。見圖1。

2.2.5?線性關系考察?取“2.2.2”項下配制的混合對照品溶液適量，甲醇稀釋2、4、16、32倍。在“2.2.1”項色譜條件下，分別測定京尼平苷酸峰面積。以京尼平苷酸的質量濃度（g/L）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算線性回歸方程。提示京尼平苷酸內線性關系良好。以同樣的方法分別繪制京尼平和松脂醇二葡萄糖苷的標準曲線。見表2。

2.2.6?中間精密度試驗?分別精密吸取京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷的對照品溶液10 μL，連續進樣6次，在“2.2.1”項色譜條件下測定，記錄峰面積，測得京尼平苷酸、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷峰面積的RSD分別為0.31%，0.38%和0.06%，結果表明HPLC儀器精密度良好。

2.2.7?供試品溶液穩定性試驗?取第2批杜仲極細粉供試品溶液（批號：20170422），在“2.2.1”項色譜條件下，分別在配置后0、2、4、8、12、24 h進樣測定，記錄各成分峰面積，計算得到京尼平苷酸、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷峰面積RSD依次為：1.93%、1.04%、0.21%。表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.2.8?重復性試驗?精密取6份第2批杜仲極細粉供試品溶液（批號：20170422），按上述“2.2.1”色譜條件進行測定，計算得到京尼平苷酸、京尼平、松脂醇二葡萄糖苷峰面積RSD分別為1.71%，1.83%，1.10%，表明該方法重復性良好。

2.2.9?回收率試驗?取6份第2批杜仲極細粉供試品（批號：20170422），精密稱定，置具塞錐形瓶中，一式6份，分別精密加樣京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷的對照品，按照“2.2.3”項下的方法操作，回流提取1 h，制得供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下測定得到各有效成分的峰面積，分別計算它們的回收率，結果表明京尼平苷酸的平均回收率（n=6）為100.9%，RSD為1.81%;京尼平的平均回收率為98.73%，RSD為0.63%;松脂醇二葡萄糖苷的平均回收率為98.94%，RSD為0.58%。說明加樣回收率良好，符合要求。見表3。

2.2.10?杜仲極細粉飲片與傳統飲片溶出總量的比較?取樣品粉末或傳統飲片，按照“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項的色譜條件進樣測定，標準曲線法分別計算含有量。通過兩樣本間均值t檢驗比較同一批杜仲藥材2種不同飲片形式在相同有效成分上的差異，結果杜仲極細粉中京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷的質量分數分別在2.58～3.46 mg/g，0.64～0.74 mg/g和2.67～3.53 mg/g，而杜仲傳統飲片3種有效成分的質量分數分別在0.65～1.65 mg/g，0.07～0.23 mg/g和1.63～1.81 mg/g，杜仲極細粉中3種有效成分含量都顯著高于杜仲傳統飲片（P<0.05）。見表4。

2.3?累積溶出率的測定

分別取“2.1”項下制備的杜仲傳統飲片和極細粉各約15 g，精密稱定，投入溶出杯中，按照2015版《中華人民共和國藥典》（二部）附錄的溶出度漿法測定法[7]，以已經經過10 h超聲脫氣的900 mL蒸餾水為溶劑，漿法，轉速為100 r/min，溫度（37.0±0.5）℃，分別于5、10、15、30、45、60、80、120、240 min時各取樣2 mL，在取樣的同時向溶出杯中補充相同體積和溫度的蒸餾水，再將取出的樣品溶液濾過，取續濾液過0.22 μm的微孔濾膜，得到以蒸餾水為溶出介質的供試品溶液[8]。以同樣的方法，按照2015版《中華人民共和國藥典》（四部）通則項下制備人工胃液、人工腸液[9]，在進行與上述以蒸餾水為溶出介質的實驗步驟相同的溶出實驗，最后分別得到了以人工胃液、人工腸液為溶出介質的供試品溶液。取“2.3”項下制備的供試品溶液，按照“2.2.1”項下的色譜條件測得不同時間京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷的溶出量。以“2.2.10”項所測得的各有效成分的質量分數為100%，計算各時間點的累積溶出率[累積溶出率=（溶出量/含有量）×100%]。以累積溶出率為縱坐標，時間為橫坐標作圖，繪制累積溶出率變化曲線，見圖2。將圖2中不同時間點各有效成分的累積溶出率數據按威布爾分布函數進行處理，擬合參數，求出溶出度參數T50、Td[10]。其相應的威布爾參數見表5～7。

2.3.1?以人工胃液為溶出介質的杜仲極細粉和傳統飲片的溶出度比較

2.3.1.1?溶出量的比較?杜仲極細粉3種有效成分都高于傳統飲片，以240 min為溶出終點，杜仲極細粉飲片京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷溶出率分別為97%、72%和41%，而杜仲傳統飲片分別為50%、35%和19%，其中，與傳統飲片比較，杜仲極細粉京尼平苷酸和京尼平差異均有統計學意義（P<0.05）。見圖2。

2.3.1.2?溶出速率的比較?杜仲極細粉京尼平苷酸溶出速率常數T0.5和Td分別在4.47～10.37 min和9.21～17.85 min，其傳統飲片京尼平苷酸T0.5和Td分別在68.18～262.02 min和141.31～589.17 min，傳統飲片與極細粉飲片比較差異有統計學意義（P<0.05）。

2.3.2?以人工腸液為溶出介質的杜仲極細粉和傳統飲片的溶出度比較

2.3.2.1?溶出量的比較?以240 min為溶出終點，杜仲極細粉飲片京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷溶出率分別為90%、75%和94%，而杜仲傳統飲片分別為48%、42%和45%，杜仲極細粉飲片與傳統飲片比較，3種有效成分差異均有統計學意義（P<0.05）。

2.3.2.2?溶出速率的比較?杜仲極細粉京尼平苷酸、京尼平和松脂醇二葡萄糖苷溶出速率常數T0.5分別為2.72～10.68 min、4.62～17.41 min和4.25～12.47 min，而傳統飲片3種有效成分T0.5分別為188.94～385.26 min、167.64～529.64 min和202.41～503.47 min，杜仲極細粉飲片與傳統飲片比較，3種有效成分差異均有統計學意義（P<0.05），說明杜仲經極細粉碎后有效成分溶出速率顯著提高，平均在30 min達到了溶出飽和，相反，傳統飲片組在240 min還未達到溶出飽和。

2.4?藥動學研究

2.4.1?色譜條件?BEH-C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，Waters公司）;預柱C18保護柱（10 mm×2.1 mm，1.7 μm，Waters公司）;流速為0.3 mL/min，柱溫40 ℃;進樣量為2 μL;離子源為ESI源。流動相：0.1%甲酸（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～1 min，95%～95%A;1～1.5 min，95%～13%A;1.5～2.4 min，13%～10%A;2.4～3.0 min，10%～5%A;3～3.5 min，5%～95%A;3.5～4 min，95%～95%A。

2.4.2?標準曲線制備?取大鼠空白血漿90 μL，分別加入京尼平苷酸標準系列溶液10 μL和10 μL內參（1 210 ng/mL）制成相當于濃度為1、5、10、50、100、500、1 000 ng/mL的血漿樣品，其余按下文“2.4.8”項下血漿樣品的處理方法操作，在“2.4.1”項色譜質譜條件下分離測定，分別以京尼平苷酸溶度為橫坐標，京尼平苷酸與內標物的峰面積比值為縱坐標，求得的直線回歸方程Y=0.002 99X+0.031 66（r=0.999 2）

2.4.3?方法專屬性?分別取空白血漿、空白血漿加混合對照品溶液及內標、灌胃給藥后20 min的血漿樣品按“2.4.8”項下血漿樣品的處理方法操作，在“2.4.1”項色譜質譜條件下分離測定，考察方法的專屬性;各成分間在此色譜條件下互不影響，且大鼠血漿中內源性物質不干擾各組分的測定。結果見圖4。京尼平苷酸及內標溶液在此質譜色譜條件下互不影響，且大鼠血漿中的內源性物質不干擾京尼平苷酸的測定。

2.4.4?線性關系考察?取大鼠空白血漿90 μL，分別加入京尼平苷酸標準系列溶液10 μL和10 μL內參（1 210 ng/mL）制成相當于濃度為1、5、10、50、100、500、1 000 ng/mL的血漿樣品，其余按“2.4.8”項下血漿樣品的處理方法操作，在“2.4.1”項色譜質譜條件下分離測定，分別以京尼平苷酸溶度為橫坐標，京尼平苷酸與內標物的峰面積比值為縱坐標，求得的直線回歸方程Y=0.002 99X+0.031 66（r=0.999 2），即為標準曲線，在1～1 000 ng/mL范圍內線性關系良好，定量下限為1 ng/mL。

2.4.5?精密度試驗?取空白血漿90 μL，按“2.4.2”項下操作制成1、50、800 ng/mL 3個濃度的質量控制（QC）樣品，每個質量濃度重復6樣本分析，連續測定3 d，記錄峰面積，計算準確度和精密度。結果顯示，京尼平苷酸的日內精密度的RSD分別為5.63%、6.55%、2.55%;準確度分別為107.06%、102.54%、100.63%;日間精密度的RSD分別為7.23%、4.42%、1.84%;準確度分別為103.08%、106.42%、101.06%;該方法的精密度和準確度良好，符合生物樣品分析方法的要求。

2.4.6?穩定性試驗?按“2.4.2”項下操作配制1、50、800 ng/mL 3個濃度的QC樣品，每個濃度3樣本，考察短期穩定性、長期穩定性和凍融穩定性，即血漿樣品室溫放置4 h，-20 ℃凍藏30 d和經歷3次凍融循環周期后的穩定性。見表9。由表可知，含有京尼平苷酸的血漿樣品在以上條件下，都具有較好的穩定性。

2.4.7?提取回收率和基質效應?精密吸取京尼平苷酸對照品溶液10 μL加入90 μL空白血漿，按“2.4.2”項下分別配制成1、50、800 ng/mL 3個濃度的QC樣品，每一個濃度進行6樣本分析，記錄其峰面積。以提取后的色譜峰面積與未經提取直接進樣的色譜峰面積之比，考察樣品提取回收率;將提取后的空白血漿樣品加入對照品溶液所測得的峰面積與同濃度標準溶液測得的峰面積之比，即為基質效應，結果顯示，京尼平苷酸提取回收率的RSD分別為7.29%、5.11%、7.84%;基質效應分別為3.35%、5.93%、5.27%。該方法提取回收率和基質效應良好，符合生物樣品分析方法的要求。

2.4.8?血漿樣品處理?從冰箱取出待測樣品，充分解凍后渦旋60 s混合均勻。取90 μL的血漿樣品，加10 μL內標，渦旋10 s混合均勻。加入甲醇300 μL，渦旋3 min，靜置3 min后，以12 000 r/min離心半徑8.60 cm，轉速離心10 min，取上清液200 μL，常溫真空干燥。待樣品揮干后，加入100 μL甲醇，渦旋3 min，以12 000 r/min離心半徑8.60 cm，轉速離心10 min，取上清，取2 μL用于UPLC-MS/MS分析。藥動學參數通過DAS2.0軟件進行處理[12]。

2.4.9?給藥方法與血漿采集?杜仲水煎液的制備：取杜仲生品50 g，置于砂鍋之中，精密加入水500 mL，武火煎煮至沸騰，文火煎煮20 min后，煎煮2次，用雙層紗布過濾后，合并2次煎煮濾液，使用旋轉蒸發儀蒸發濃縮至含藥量為0.4 g/mL，即得傳統飲片組灌胃給藥所需的高劑量水煎液，以同樣的方法制備含藥量分別為0.2 g/mL和0.1 g/mL的水煎液，即中劑量與低劑量水煎液，備用。杜仲極細粉混懸液的制備：精密稱取杜仲極細粉16 g，放入研缽中，加入0.5%羧甲基纖維素鈉40 mL研磨成混懸液，即得含藥量為0.4 g/mL的高劑量流體，以同樣的方法制備含藥量分別為0.2 g/mL和0.1 g/mL的極細粉混懸液，備用。雄性的SD大鼠36只，隨機分為杜仲傳統飲片組和極細粉組，每組18只，每組又分別分為高、中、低3個劑量組，每組6只。實驗前12 h禁食，實驗期間自由飲水，杜仲生藥材的劑量分別為1 000、2 000、4 000 mg/kg（根據2015版《中華人民共和國藥典》，杜仲藥材的用量是6～10 g。根據體表面積換算法，折算成大鼠的用量），按照杜仲提取物2.0 mL/200 g的灌胃劑量進行給藥。分別于給藥后10 min、20 min、30 min、60 min、120 min、150 min、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h經大鼠眼球后靜脈叢采血約0.5 mL，置肝素化試管中，4 000 r/min，離心半徑8.60 cm，離心10 min，分離血漿，-20 ℃冷凍保存，備用。

2.4.10?動力學參數計算?血藥濃度-時間結果見圖5，并用DAS 2.0藥動學軟件擬合，計算藥動學參數，結果見表10。由圖5和表10可知，大鼠灌胃給藥后，水煎液3個劑量組達峰時間（Tmax）平均在63 min，而極細粉由低劑量到高劑量的Tmax分別為75、90、132 min，在相同劑量下，極細粉組分別是水煎液組的1.15、1.50、2.03倍，說明傳統飲片水煎液相較于極細粉混懸液跟有利于有效成分的吸收，而底、高劑量極細粉組與相應的傳統飲片組的MRT（0-t）差異有統計學意義（P<0.01），說明極細粉中京尼平苷酸在體內消除緩慢。

3?討論

實驗數據表明，杜仲極細粉2（X2）與杜仲傳統飲片2（C2）京尼平苷酸的溶出總量分別為3.34 mg/g和1.52 mg/g，京尼平的溶出總量分別為0.74 mg/g和0.23 mg/g，松脂醇二葡萄糖苷的溶出總量分別為3.53 mg/g和1.63 mg/g，杜仲極細粉2（X2）3種有效成分的溶出總量相較于杜仲傳統飲片2（C2）分別增加了54.49%、68.91%和53.82%，表明杜仲傳統飲片經超微粉碎成極細粉后可以顯著提高有效成分的溶出（P<0.05），理論上植物細胞中的化學成分可能受細胞屏障的影響，有效成分不易與提取溶劑接觸，較難溶解完全，而超微粉碎技術破除了這種障礙，比如，將細胞屏障之一的杜仲膠微粉化，因而增加了有效成分的溶出[11]。

藥時曲線的溶出總量上，以240 min為終點，通過比較同批杜仲藥材同一有效成分在2種不同劑型的溶出行為，發現3批杜仲極細粉京尼平苷酸在人工胃液和人工腸液中的溶出總量顯著高于3批傳統飲片（P<0.01），極細粉組京尼平在3種溶出介質中都顯著高于傳統飲片組（P<0.05），且傳統飲片組京尼平在蒸餾水中未檢出，可能是由于苷元極性較低，使其在水中較難溶出;松脂醇二葡萄糖苷在人工腸液和蒸餾水中極細粉組顯著高于傳統飲片組（P<0.05），而在人工胃液中，差異無統計學意義（P>0.05）;說明杜仲傳統飲片經超微粉碎后可以顯著提高有效成分在胃腸道的溶出，從而增強藥效;通過比較同一種劑型的有效成分在3種溶出介質溶出總量，發現松脂醇二葡萄糖苷在人工腸液中的溶出總量都明顯高于人工胃液和蒸餾水（P<0.05），說明腸道可能為松脂醇二葡萄糖苷的主要吸收部位。

根據溶出曲線和威布爾分布函數的擬合參數可知，杜仲極細粉組有效成分平均在30 min達到了溶出飽和，達到了溶出總量的90%，相反，傳統飲片組在240 min還未達到溶出飽和，只達到溶出總量的45%，說明杜仲極細粉可以顯著提高有效成分的溶出速率和溶出總量。原因可能是極細粉碎過程破壞了杜仲的細胞壁，藥材比表面積增大，導致其溶出速率增大。表明了杜仲選取極細粉入藥更有利于有效成分的溶出，從而減少用藥劑量，達到節約藥材的目的。

雖然在相同劑量下，杜仲極細粉組AUC（0-t）與傳統飲片組比較差異無統計學意義（P>0.05），傳統飲片組的Tmax低于相應的極細粉組，但極細粉高、低劑量組的平均駐留時間MRT（0-t）與傳統飲片高、低劑量組差異有統計學意義（P<0.01），說明杜仲極細粉碎后減緩了京尼平苷酸在體內的消除速率，從而延長其在體內的作用時間，其原因可能是極細粉顆粒吸附在胃腸壁上，延長極細粉排除體外所需要的時間[13]，從而有助于藥效的持久發揮。杜仲極細粉與傳統飲片比較，生物利用度沒有提高，原因可能是極細粉的給藥方式與其正常的用法不同，通常極細粉用法為熱水沖服，而本實驗給藥方式為羧甲基纖維素鈉混懸液，與熱水比較混懸液中杜仲極細粉有效成分未在短時間內快速溶出，導致曲線下面積和達峰時間差異無統計學意義。

細胞級粉碎是對中藥材進行超微粉碎的目的，即打破中藥材的細胞壁，從而減小細胞內的有效成分的溶出阻力，加快一般藥材的浸潤、溶脹、滲透和擴散[7，9，14]。將中藥材進行超微粉碎之后，其粉體的色澤變得均勻，質感變得細膩，顆粒感會逐漸消失，藥物的有效成分利用度提高，同時微細化的中藥物料會有比較強的溶解性、表面吸附力、分散性和親和力，從而同時增大了中藥材的溶出量和溶出率，最終有利于藥物的吸收與利用[14-15]。杜仲粉體臨床用藥療效的水平一定程度上受有效成分的溶出度的影響，將其制成極細粉入藥，提高溶出速率的同時[16]，也有利于保證杜仲在復方應用中發揮出最大的療效并減少貴重藥材的用量[17]。

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（2019-11-02收稿?責任編輯：王明）