結直腸癌TRDMT-1、CEACAM-1的表達及與腫瘤生物學特性的相關性

馮婧 趙凱 周鑫

結直腸癌又稱為大腸癌，指大腸黏膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤，具有較高的病死率，這主要與缺乏早期診斷的生物學指標有關，此外與腫瘤的浸潤和轉移也具有一定關系［1-2］。腫瘤細胞的生長主要依靠新生血管為其提供新陳代謝的基本物質，腫瘤血管密度越大，血供越豐富，生長越快，發(fā)生轉移的風險也相應增高［3］。癌胚抗原相關細胞黏附分子-1（cancer embryo antigen-related cell adhesion molecules1，CEACAM-1）屬于癌胚抗原家族成員之一，可促進血管形成，具有調控細胞增殖、分化及凋亡的作用［4］。tRNA 天冬氨酸甲基轉移酶1（tRNA aspartic acid methyltransferase 1，TRDMT1）的結構、序列與DNA 胞嘧啶甲基轉移酶家族成員具有一定相似性。既往研究顯示，TRDMT1 在血液惡性腫瘤中呈高表達［5］。故本研究分析TRDMT-1、CEACAM-1 在結直腸癌中的表達及與腫瘤生物學特性的相關性，以此提高對該病的診治水平。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集本院2017年4月至2018年6月收治且經手術或穿刺活檢確診的62 例結直腸癌患者的臨床資料其中男39 例，女23 例；平均年齡（58.74±18.31）歲；組織學分化程度：高分化15 例，中分化28 例，低分化19 例；有淋巴結轉移者35 例；25 例腫瘤浸潤深度未及外膜，其余37 例侵及外膜。同選取本組患者距離腫瘤組織＜5 cm 的正常組織腸黏膜組織作為參照（見圖1）。納入標準：①術前未接受化療、放療或其他治療手段；②臨床資料完整；③無其它惡性疾病；④未合并其他臟器腫瘤；⑤所有患者均自愿參與本次研究，且簽署知情同意書。排除標準：①復發(fā)性腫瘤；②轉移瘤；③伴有心腦血管疾病及其他手術禁忌癥者；④過敏體質。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化檢測

采用S-P 免疫組化染色，首先進行標本準備：組織切片后脫蠟、水化。然后根據(jù)S-P 免疫組化染色法對TRDMT-1、CEACAM-1 進行檢測。兔抗人TRDMT1-1 單克隆抗體，兔抗人單克隆濃縮型CEACAM-1 抗體。檢測過程嚴格按照說明進行。一抗陰性對照使用PBS（磷酸鹽緩沖液）進行代替。

1.2.2 微淋巴管密度（lymphatic microvessel density，LMVD）檢測

采用CD34 抗體標記腫瘤微血管細胞質，根據(jù)Weidner 法［6］，在200 倍光鏡下取4 個熱點區(qū)，觀察著色的內皮細胞簇和單個的內皮細胞作為微血管并計數(shù)，獲取其平均值即為LMVD 值。

1.2.3 染色結果判斷［7］

TRDMT-1、CEACAM-1 陽性存在于細胞質中，以棕黃色、褐色顆粒為主（見圖1）。評分標準采用ASCO/CAP 發(fā)布的檢測指南以1%為陽性界值判斷腫瘤細胞陽性率，根據(jù)整張切片的平均著色情況判斷腫瘤細胞染色強度。參照Allred 評分方法對腫瘤細胞陽性率和染色強度進行分級。0 分：無陽性細胞表達，1 分：陽性表達率＜10%，2 分：陽性表達率為10%～50%，3 分：陽性表達率為50%～75%，4 分：陽性表達率＞75%。染色強度判定：0 分，無色；1 分，淡黃色；棕黃色，2 分；棕褐色，3 分。總積分：上述2 項評分的乘積。陽性：總積分＞4 分。

1.3 觀察指標

觀察TRDMT-1、CEACAM-1 及LMVD 在癌旁正常組織與結直腸癌中的表達情況及與結直腸癌病理因素的關系，并分析TRDMT-1、CEACAM-1 不同表達水平的LMVD 值，術后對患者進行兩年隨訪，分析患者預后情況及影響其預后的相關因素。

圖1 CEACAM-1 在正常癌旁組織、結直腸癌組織中的表達（ISH，×400）Figure 1 The expression of CEACAM-1 in normal adjacent tissues and colorectal cancer tissues（ISH，×400）

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0 軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（±s）表示，兩兩比較采用t檢驗；計數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗；采用非條件多因素Logistic 回歸分析影響結直腸癌患者預后死亡的危險因素，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TRDMT-1、CEACAM-1 及LMVD 在不同組織中的表達

結直腸癌的CEACAM-1、TRDMT-1 陽性表達率高于癌旁正常組織差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；結直腸癌組織中的LMVD 值顯著高于癌癥正常組織（P＜0.05）。見表1。

表1 TRDMT-1、CEACAM-1 及LMVD 在不同組織中的表達［n（%），（±s）］Table 1 Expressions of TRMT1，CEACAM-1 and LMVD in different tissues［n（%），（±s）］

表1 TRDMT-1、CEACAM-1 及LMVD 在不同組織中的表達［n（%），（±s）］Table 1 Expressions of TRMT1，CEACAM-1 and LMVD in different tissues［n（%），（±s）］

組別結直腸癌癌旁正常組織t/χ2值P 值n 62 62 CEACAM-1陰性22（35.48）43（69.35）14.259 0.001陽性40（64.52）19（30.65）TRDMT-1陰性24（38.71）45（72.58）14.409 0.001陽性38（61.29）17（27.42）LMVD 14.29±2.79 4.42±1.14 22.976 0.001

2.2 TRDMT-1、CEACAM-1 在結直腸癌中的表達與其臨床病理因素的關系

結直腸癌組織中TRDMT-1、CEACAM-1 表達均與腫瘤漿膜浸潤、TNM 分期、肝轉移、淋巴結轉移、脈管浸潤有關（P＜0.05），CEACAM-1 表達與腫瘤直徑、組織學分化程度無關，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），而TRDMT-1 表達與腫瘤直徑、組織學分化程度關系密切（P＜0.05）。TRDMT-1、CEACAM-1 在有漿膜浸潤、肝轉移、淋巴結轉移、脈管浸潤且TNM 分期晚的組織中陽性表達率較高（P＜0.05）。見表2。

2.3 TRDMT-1、CEACAM-1 在結直腸癌中的表達與LMVD 的關系

TRDMT-1、CEACAM-1 陽性表達者LMVD 值均顯著高于TRDMT-1、CEACAM-1 陰性表達者（P＜0.05）。見表3。

2.4 影響結直腸癌患者預后死亡的危險因素分析

術后對患者進行兩年隨訪，62 例患者中，死亡13 例（20.97%），生存49 例（79.03%）。結果顯示，漿膜浸潤、分化程度、TNM 分期、淋巴結轉移、LMVD值、TRDMT-1 及CEACAM-1 是影響結直腸癌患者預后死亡的危險因素（P＜0.05）。見表4。

3 討論

據(jù)臨床相關報道顯示，青年人結直腸癌患者預后5年生存率顯著優(yōu)于60 歲以上老年結直腸癌患者。因此，早期診斷是提高結直腸癌臨床療效的關鍵［8］。癌胚抗原（CEA）、糖類抗原（CA）-75 等腫瘤標志物是臨床上常用于早期檢測結直腸癌的指標，但其檢測結果常常無法令人滿意，故尋找一更為敏感，特異性更高的結直腸癌早期診斷方法成為了目前防控工作的重點［9］。

腫瘤DNA 異常甲基化是腫瘤進展的表觀遺傳機制之一，TRDMT-1 可通過催化DNA 分子胞嘧啶5 號碳原子結合甲基團促使其形成甲基化DNA［10］。TRDMT-1 表達異常可導致DNA 異常甲基化。目前發(fā)現(xiàn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展與DNA 甲基轉移酶密切相關，其在腫瘤多呈高表達，可導致抑癌基因高甲基化并失活，缺失促凋亡分子，或使其表達下調，進而使癌細胞增殖加快。王瓊［11］等研究報道過，TRDMT-1 在胃癌組織中的陽性表達顯著高于癌旁正常組織，可促進胃癌發(fā)生、發(fā)展，評估預后。但目前有關TRDMT-1 在結直腸癌中的研究非常欠缺。

表2 TRDMT-1、CEACAM-1 在結直腸癌中的表達與其臨床病理因素的關系［n（%）］Table 2 Correlation between the expression of TRMT1 and CEACAM-1 in colorectal cancer and its clinicopathological factors［n（%）］

表3 TRDMT-1、CEACAM-1 在結直腸癌中的表達與LMVD 的關系（±s）Table 3 Relationship between the expression of TRMT-1 and CEACAM-1 and LMVD in colorectal cancer（±s）

表3 TRDMT-1、CEACAM-1 在結直腸癌中的表達與LMVD 的關系（±s）Table 3 Relationship between the expression of TRMT-1 and CEACAM-1 and LMVD in colorectal cancer（±s）

項目CEACAM-1 TRDMT-1陰性陽性陰性陽性LMVD 值9.91±2.14 17.36±2.06 9.81±2.79 16.80±2.47 t 值13.440 10.322 P 值0.001 0.001

表4 影響結直腸癌患者預后死亡的危險因素分析Table 4 Analysis of risk factors affecting prognosis and death of colorectal cancer patients

CEACAM-1 是一種跨膜糖蛋白，是癌胚抗原家族及免疫超蛋白家族黏附分子之一，廣泛分布于人體上皮細胞、淋巴細胞等多種細胞中。最早是在Okegawa T 等［12］研究木瓜蛋白酶不溶性質膜成分的某些作用和功能中被發(fā)現(xiàn)的。通過不同剪切方式可生成不同的亞型，按照胞內段的長短可分為CEACAM-1-L 和CEACAMl-S 兩個亞組［13］。前者可通過其磷酸化參與細胞內信號的轉導，有效抑制下游信號；后者含有原肌球蛋白、肌動蛋白的結構域，可有效調節(jié)細胞骨架。隨著臨床研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)CEACAM-1 還參與了胰島素代謝、調節(jié)細胞增殖、血管淋巴結新生等病理生理過程［14］。Arabzadeh A［15］等研究發(fā)現(xiàn)，CEACAM-1 參與了腫瘤微血管的異質性生成過程，認為其可能是腫瘤新生血管的標志物，可作為腫瘤靶向治療的靶點。

本組研究表明TRDMT-1、CEACAM-1 高表達可促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展，影響腫瘤直徑及浸潤深度，導致腫瘤侵襲性增強，加快淋巴結轉移。此外，TRDMT-1 在結直腸癌中的表達與LMVD 具有一定關系，故通過阻斷TRDMT-1 性好傳導可有效抑制腫瘤新生血管形成，阻斷腫瘤營養(yǎng)供應渠道，進而延緩腫瘤發(fā)生、發(fā)展。與此同時，TRDMT-1、CEACAM-1 陽性表達率越高，LMVD 值也越高，腫瘤內部血管生成加快，為癌細胞生長提供豐富的營養(yǎng)，使其生長加快、侵襲力更強。且通過檢測TRDMT-1、CEACAM-1 表達可有效評估患者預后情況。

綜上所述，TRDMT-1、CEACAM-1 的高表達及LMVD 的升高與結直腸癌的生物學行為和進展關系密切，臨床上可根據(jù)TRDMT-1、CEACAM-1 表達情況對患者進行病情評估、預后監(jiān)測。