甲狀腺癌細針穿刺組織中CEACAM1表達量及其與腫瘤惡性程度的相關(guān)性

徐顯昌 周寧 陳志剛

甲狀腺癌是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，其發(fā)病率占內(nèi)分泌腫瘤的首位［1］。臨床常采用手術(shù)聯(lián)合放化療治療，可提高患者生存率。據(jù)報道顯示，甲狀腺癌患者5年生存率達90%［2］。但仍有部分甲狀腺癌患者因局部復發(fā)、浸潤及遠處轉(zhuǎn)移導致預后較差，這與癌細胞的增殖和侵襲密切相關(guān)，但目前關(guān)于甲狀腺癌細胞增殖和侵襲的調(diào)控機制尚未明確［3］。細針穿刺能夠準確判斷組織性質(zhì)。癌胚抗原黏附分子（carcinoembryonic antigen related cell adhesion molecule，CEACAM）是細胞跨膜糖蛋白，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用［4］。研究證實，甲狀腺癌患者CEACAM1 水平呈高表達［5］。為進一步明確甲狀腺癌細針穿刺組織中CEACAM 表達與病情發(fā)展變化的關(guān)系，本研究分析甲狀腺癌組織中CEACAM 表達與腫瘤惡性程度的相關(guān)性。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年4月至2020年4月于本院行甲狀腺結(jié)節(jié)細針穿刺活檢的118 例患者為研究對象。納入標準：①均經(jīng)甲狀腺超聲證實存在甲狀腺結(jié)節(jié)，符合細針穿刺活檢的指征，且經(jīng)病理檢查確診為甲狀腺癌和良性甲狀腺腫瘤；②年齡：30～75 歲；③入院前半年內(nèi)無外科手術(shù)史；排除標準：①嚴重肝腎功能不全者；②合并自其他惡性腫瘤者；③合并橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺功能減退和亢進等；④合并全身感染性疾病。根據(jù)穿刺后病理檢查結(jié)果分為甲狀腺癌組和良性甲狀腺腫瘤組。其中，甲狀腺癌組（n=55）：男24 例，女21 例，年齡：30～75歲，平均（50.36±6.57）歲；腫瘤直徑4～13 mm，平均（6.92±1.22）mm；甲狀腺良性腫瘤組（n=63）：男34例，女30 例，年齡：30～74 歲，平均（51.17±6.64）歲；腫瘤直徑3～15 mm，平均（7.51±1.26）mm。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準，所有受試者簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 mRNA 含量和陽性表達率測定

超聲定位后確認所有研究對象甲狀腺病灶部位，于超聲下進行細針穿刺，獲得甲狀腺病灶后抽提組織中的RNA 并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后使用試劑盒擴增目的基因CEACAM1 和內(nèi)參基因actin，計算mRNA 含量：RNA 濃度=（OD260～320）×稀釋倍數(shù)×0.04 μg/μL。OD230，260，280，320 分別是鹽濃度、核酸、蛋白質(zhì)等有機物和背景（溶液渾濁度）的吸光度值。對腫瘤組織中CEACAM1 染色，顯微鏡下觀察并判斷染色強度及染色陽性細胞率［6］。

1.2.2 血清腫瘤標記物檢測

入院后第二天采集患者空腹外周靜脈血4 mL在3 000 r/min 下離心10 min，進行離心沉淀細胞，采用羅氏全自動化學發(fā)光疫分析儀（北京邁潤醫(yī)療醫(yī)療器械有限公司，型號：Cobas e 60）測定血清細胞角蛋白19 片段（serum cytokeratin 19 fragment，Cyfra21-1）、半乳糖血凝素-3（galactose hemagglutinin-3，Cal-3）、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）水平。

1.2.3 增殖、侵襲基因

甲狀腺癌患者均接受手術(shù)切除腫瘤，取術(shù)中腫瘤組織樣本，用常規(guī)Western 免疫印跡法測定FOXA1、ObR、PCNA、BCORL1、S100A4、SATB1、Twist1 蛋白表達：內(nèi)參抗體為beta-tubulin 抗體，試劑準備后進行單層貼壁細胞總蛋白的提取、組織中總蛋白的提取及加藥物處理的貼壁細胞總蛋白的提取，然后制作標準曲線，檢測樣品含的蛋白量。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以（±s）表示，行t檢驗，計數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗，各變量間相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)分析、以相關(guān)系數(shù)r表示兩資料間的相關(guān)性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組CEACAM1 表達量比較

甲狀腺癌組CEACAM 表達量和陽性率高于甲狀腺良性腫瘤組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組CEACAM1 表達量比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of CEACAM1 expression between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組CEACAM1 表達量比較［n（%），（±s）］Table 1 Comparison of CEACAM1 expression between 2 groups［n（%），（±s）］

指標甲狀腺癌組甲狀腺良性腫瘤組t/χ2值P 值n 55 63 mRNA 含量0.99±0.07 0.20±0.04 76.443 0.000陽性表達率44（80.00）15（23.81）24.877 0.000

2.2 兩組血清腫瘤標記物含量比較

甲狀腺癌組血清Cyfra21-1、Cal-3、CEA 及MMP-9 水平均高于甲狀腺良性腫瘤組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 兩組腫瘤組織增殖基因蛋白表達量比較

甲狀腺癌組增殖基因FOXA1、ObR、PCNA 蛋白表達量高于甲狀腺良性腫組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 兩組腫瘤組織侵襲基因蛋白表達量比較

甲狀腺癌組侵襲基因BCORL1、S100A4、SATB1、Twist1 蛋白表達量高于甲狀腺良性腫組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表2 兩組血清腫瘤標記物含量比較（±s）Table 2 Comparison of serum tumor markers between 2 groups（±s）

表2 兩組血清腫瘤標記物含量比較（±s）Table 2 Comparison of serum tumor markers between 2 groups（±s）

指標甲狀腺癌組甲狀腺良性腫瘤組t 值P 值n 55 63 Cyfra21-1（ng/mL）16.77±0.36 5.57±0.20 212.320 0.000 Cal-3（ng/mL）7.46±2.33 4.81±0.52 8.785 0.000 CEA（μg/L）30.29±6.04 17.68±4.12 13.387 0.000 MMP-9（ng/mL）14.49±4.03 8.20±2.27 10.613 0.000

表3 兩組腫瘤組織增殖基因蛋白表達量比較（±s）Table 3 Comparison of protein expression levels of tumor proliferation genes between 2 groups（±s）

表3 兩組腫瘤組織增殖基因蛋白表達量比較（±s）Table 3 Comparison of protein expression levels of tumor proliferation genes between 2 groups（±s）

指標甲狀腺癌組甲狀腺良性腫組t 值P 值n 55 63 FOXA1 173.21±20.14 98.74±15.22 20.300 0.000 ObR 149.75±16.28 99.05±12.46 19.125 0.000 PCNA 194.71±25.08 100.0±18.37 23.594 0.000

2.5 CEACAM mRNA 表達量與Cyfra21-1、Cal-3、CEA、MMP-9、1FOXA1、ObR、PCNA、BCORL1、S100A4、SATB1、Twist1 相關(guān)性分析

Spearman 相關(guān)分析顯示，CEACAMmRNA 表達量與Cyfra21-1、Cal-3、CEA、MMP-9、FOXA1、ObR、PCNA、BCORL1、S100A4、SATB1、Twist11呈正相關(guān)性（P＜0.05）。見表5。

3 討論

CEACAM 是癌胚抗原家族成員之一，屬于免疫球蛋白家族，由583 個氨基酸組成，主要分布于上皮細胞、內(nèi)皮細胞、粒細胞、淋巴細胞和腫瘤細胞中，參與細胞生長、分化、凋亡、細胞間黏附，并調(diào)節(jié)免疫［6-7］。大量研究證實，CEACAM1 在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用［8-9］。CEACAM1 可介導腫瘤細胞黏附，調(diào)節(jié)腫瘤細胞增殖、凋亡及分化，參與腫瘤血管和淋巴管生成過程，并抑制免疫細胞對腫瘤細胞的殺傷，促進腫瘤侵襲和遷移［10］。張鋼等［11］報道顯示，CEACAM1 在前列腺癌中呈低表達，可作為早期診斷因子。國外報道顯示，CEACAM1 在直腸癌及癌旁組織中表達減低甚至缺失，這種減低和缺損導致癌細胞活躍期提前，促進直腸癌發(fā)生發(fā)展［12］。同時趙丹等［13］報道顯示，CEACAM1 在甲狀腺癌，非小細胞中呈高表達，可一定程度促進腫瘤組織本身的增殖和進展。而本研究結(jié)果，提示CEACAM1 高表達可能與甲狀腺癌發(fā)生有關(guān)。

表4 兩組腫瘤組織侵襲基因蛋白表達量比較（±s）Table 4 Comparison of protein expression levels of tumor invasion genes between 2 groups（±s）

表4 兩組腫瘤組織侵襲基因蛋白表達量比較（±s）Table 4 Comparison of protein expression levels of tumor invasion genes between 2 groups（±s）

指標甲狀腺癌組織甲狀腺良性腫瘤組織t 值P 值n 55 63 BCORL1 164.37±15.39 96.83±11.27 27.421 0.000 S100A4 187.68±20.01 98.16±17.03 26.254 0.000 SATB1 191.60±22.17 95.86±18.24 25.728 0.000 Twist1 183.21±17.65 99.02±14.33 28.582 0.000

表5 CEACAM mRNA 表達量與Cyfra21-1、Cal-3、CEA、MMP-9、1FOXA1、ObR、PCNA、BCORL1、S100A4、SATB1、Twist1 相關(guān)性分析Table 5 Correlation analysis between CEACAM mRNA expression and Cyfra21-1、Cal-3、CEA、MMP-9、1FOXA1、ObR、PCNA、BCORL1、S100A4、SATB1、Twist1

Giovanella 等［14］報道甲狀腺癌患者血清Cyfra21.1 水平與腫瘤惡性程度相關(guān)。Cyfra21-1 為細胞角蛋白19 的可溶性片段，作為新的上皮來源性質(zhì)的腫瘤標志物，在腫瘤中應用較為廣泛；Cal-3是半乳糖特意凝集素，對細胞增殖、細胞與細胞外基質(zhì)相互作用及血管形式具有促進效應；CEA 是酸性糖蛋白，主要形成于胚胎，健康人血清呈低表達，當機體細胞一旦出現(xiàn)癌變其可重新合成；MMP9 是降解細胞外基質(zhì)和基底膜中Ⅳ型膠原的主要成員，對腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移具有重要作用［15］。研究表明，甲狀腺癌患者血清Cyfra21-1、Cal-3、CEA 水平較甲狀腺良性腫瘤患者較高［16］。而本研究也支持了這一觀點，結(jié)果提示甲狀腺癌患者存在血清指標的含量異常。腫瘤增殖及侵襲基因蛋白表達量可反映腫瘤惡性程度。諸多研究證實，F(xiàn)OXA1、ObR、PCNA與甲狀腺癌增殖相關(guān)，可促進腫瘤細胞增殖［17］。而BCORL1、S100A4、SATB1、Twist1 是目前研究較多的甲狀腺癌侵襲基因，其中BCORL1、1S100A4 可促進腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移；SATB1 可促進甲狀腺癌上皮細胞轉(zhuǎn)化；Twist1 可通過NF-kB 信號通路實現(xiàn)促侵襲作用［18］。本研究結(jié)果提示甲狀腺癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移活性高于甲狀腺良性腫瘤。由此可見，CEACAM1 對早期診斷和預后評估中具有重要意義，臨床可將其作為參考。

綜上所述，甲狀腺癌細針穿刺組織中CEACAM 呈高表達，且與Cyfra21-1、Cal-3、CEA、MMP-9、FOXA1、ObR、PCNA、BCORL1、S100A4、SATB1、Twist11 呈正相關(guān)性。