血清凋亡分子caspase-3、P53與突發性耳聾病情及治療效果的相關性

王智超 樂海桂

突發性耳聾是耳鼻咽喉科的常見疾病，以不明原因的瞬間聽力損失為特征，以單側發病多見，伴有耳悶脹感、耳鳴、眩暈等癥狀［1］。目前，該病的發病機制尚不清楚，相關研究認為耳蝸微循環障礙、細胞凋亡異常激活可能與突發性耳聾的發生有關［2-3］。P53 蛋白及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3，caspase-3）是兩種參與耳蝸組織中細胞凋亡調控的分子，P53 通過caspase 依賴和caspase 非依賴兩種途徑引起級聯反應、促進細胞凋亡，caspase-3 則直接執行細胞凋亡的過程。冷輝的動物實驗發現，在順鉑誘導耳聾小鼠的耳蝸組織中caspase-3 及P53 表達增加［4］，但caspase-3 及P53 是否與突發性耳聾的發病有關并未見相關報道。因此，本研究將具體分析血清凋亡分子caspase-3、P53 與突發性耳聾病情及治療效果的相關性，旨在為闡明突發性耳聾的發病機制、發現突發性耳聾新的病情評價標志物提供依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2018年9月至2019年6月東風茅箭醫院耳鼻喉科收治的50 例突發性耳聾患者作為觀察組，其中男性28 例、女性22 例，年齡37～59 歲、平均（47.47±8.95）歲；另取同期體檢的50 例健康志愿者作為對照組，其中男性30 例、女性20 例，年齡35～60 歲、平均（48.32±9.37）歲，兩組間一般資料的比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：①符合《突發性耳聾診斷和治療指南（2015）》［5］中突發性耳聾的診斷標準并進行治療；②入組時留取血清標準；③臨床資料完整；排除標準：①合并中耳病變；②遺傳及藥物因素引起的聽力下降；③既往有耳鼻手術史。

1.2 血清caspase-3、P53 的檢測

觀察組患者入院后采集外周靜脈血5～8 mL，對照組志愿者體檢時采集外周靜脈血5～8 mL，靜置凝血后3 000 轉/分離心10 min，分離血清后采用酶聯免疫吸附法試劑盒（上海西唐公司）檢測caspase-3、P53 的含量，按照試劑盒說明書進行實驗操作。

1.3 突發性耳聾病情的評估

采用聽力損傷程度及聽力曲線類型評估突發性耳聾的病情，聽力損傷程度包括聽閾26～40 d 分貝聽力水平（Decibel Hearing Level，BHL 的輕度缺失、41～60 d BHL 的中度缺失、61～80 d BHL 的重度缺失、≥81 d BHL 的極重度缺失；聽力曲線類型包括≤1 k Hz 任意頻率下降＞15 d BHL 的低中頻下降型、2 k Hz 以上頻率下降＞15 d BHL 的中高頻率下降型、各頻率聽閾均有下降且（0.5～4.0）k Hz 聽閾均值＜80 d BHL 的平坦下降型、各頻率聽閾均有下降且（0.5～4.0）k Hz 聽閾均值≥80 d BHL 的全聾型。

1.4 治療效果的評估

治療后參照《突發性耳聾診斷和治療指南（2015）》［5］評估療效，受損頻率聽力恢復正常為痊愈、聽力增加30 d BHL 為顯效、聽力增加15～30 d BHL 為有效、聽力增加＜15 d BHL 為無效?？傆行槿?、顯效及有效。

1.5 統計學方法

采用SPSS 21.0 及Prism6.0 軟件進行數據分析，計量資料以（±s）表示、兩組間比較采用t檢驗、多組間比較采用方差分析，計數資料以n（%）表示、組間比較采用χ2檢驗，預測療效采用ROC曲線分析。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清caspase-3、P53 含量的比較

與對照組比較，觀察組患者血清中caspase-3、P53 的含量明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組血清caspase-3、P53 含量的比較（±s）Table 1 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents between 2 groups（±s）

表1 兩組血清caspase-3、P53 含量的比較（±s）Table 1 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents between 2 groups（±s）

組別觀察組對照組t 值P 值n 50 50 Caspase-3（pg/mL）17.67±5.29 6.58±1.31 14.389 0.000 P53（pg/mL）0.98±0.29 0.39±0.10 13.600 0000

2.2 觀察組中不同病情患者血清caspase-3、P53含量的比較

觀察組中不同聽力損傷程度血清caspase-3、P53 含量及聽力曲線類型患者比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 觀察組中不同caspase-3、P53 含量患者治療效果的比較

與觀察組中caspase-3、P53 含量≤中位數的患者比較，caspase-3、P53 含量＞中位數患者的治療總有效率較低，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表2 觀察組中不同病情患者血清caspase-3、P53 含量的比較（±s）Table 2 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents in patients with different diseases condition in the observation group（±s）

表2 觀察組中不同病情患者血清caspase-3、P53 含量的比較（±s）Table 2 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents in patients with different diseases condition in the observation group（±s）

病情聽力損傷程度n 分類輕度中度重度極重度F 值P 值平坦型低中頻下降型高中頻下降型全聾型F 值P 值11 19 13 7聽力曲線類型15 18 7 10 Caspase-3(pg/mL)8.95±2.44 15.52±4.08 22.13±5.77 28.93±7.74 28.391 0.000 7.58±2.23 14.58±3.24 26.39±8.85 32.26±9.12 34.184 0.000 P53(pg/mL)0.54±0.14 0.79±0.22 1.21±0.29 1.76±0.35 23.575 0.000 0.49±0.14 0.80±0.24 1.22±0.31 1.87±0.36 32.389 0.000

表3 觀察組中不同caspase-3、P53 含量患者治療效果的比較［n（%）］Table 3 Comparison of treatment effect of patients with different levels of Caspase-3 and p53 in the observation group［n（%）］

2.4 血清caspase-3、P53 含量預測療效的ROC 曲線分析

血清caspase-3、P53 含量預測療效的ROC 曲線下面積為0.771（95%CI：0.642～0.899）。根據約登指數最大值確定最佳截點分別為14.76 pg/mL、0.835 ng/mL。見圖1。

圖1 血清caspase-3、P53 含量預測療效的ROC 曲線Figure 1 ROC curve of serum caspase-3，P53 content predicting curative effect

3 討論

突發性耳聾是造成聽力損傷、影響生活質量的常見原因，表現為感音神經性耳聾，伴有耳悶脹感、耳鳴、眩暈等癥狀。該病的病理生理改變復雜，關于致病因素、發病機制等均不十分清楚，臨床治療常采用激素、改善循環、高壓氧等方式，但療效差異較大［6-8］。目前關于突發性耳聾的研究認為，聽力損傷程度及聽力曲線類型影響治療效果，聽力損傷程度越高以及全聾型患者的治療效果較差［9-10］。

近些年，越來越多的學者開始關注突發性耳聾的發病機制，也有多種標志物被證實對治療效果具有評估價值。微循環障礙、細胞凋亡等引起耳蝸功能降低是目前已知與感音神經性耳聾發生密切相關的因素，血管硬化、內皮損傷、血栓形成等引起耳蝸微循環障礙后，局部毛細胞會發生過度凋亡，進而引起聽力降低［11-12］。已有研究報道，膽固醇代謝指標、同型半胱氨酸代謝指標、C 反應蛋白、內皮細胞特異性分子-1 等與微循環障礙相關的標志物在突發性耳聾患者血清中存在異常且與預后及療效有關［13-16］，但凋亡標志物在突發性耳聾病情評估中的作用尚不清楚。

本研究選擇凋亡分子caspase-3 及P53 作為評估突發性耳聾的標志物。已有動物實驗表明，在順鉑誘導耳聾小鼠的耳蝸組織中caspase-3 及P53 的表達均明顯增加，P53 能夠通過信號轉導促進caspase-3 表達，進而由caspase-3 來執行細胞凋亡過程。P53 及caspase-3 異常高表達能夠釋放進入血液循環，腦血管疾病相關的研究證實，腦梗死患者血清中P53 及caspase-3 的含量明顯增加且與神經損傷程度密切相關。本研究結果表明P53 及caspase-3的增多與突發性耳聾的發病有關，這也與既往其他學者關于凋亡與突發性耳聾的相關研究結果吻合。

突發性耳聾的病情輕重不一，聽力損傷程度及聽力曲線類型是評估病情的常用方法，聽力損傷程度越重、提示病情越重；聽力曲線類型中全聾型的病情最重，中高頻下降型可能由毛細胞損傷引起、病情較重，由內耳血管痙攣引起的平坦型及內耳膜迷路積水引起的低中頻下降型病情較輕。本研究結果發現：隨著聽力損傷程度及聽力曲線類型的加重，血清中P53 及caspase-3 的含量明顯增加，表明P53 及caspase-3 的增加與突發性耳聾病情的加重有關。已有研究表明，聽力損傷程度及聽力曲線類型是影響突變型耳聾治療效果的因素，本研究結果發現：P53 及caspase-3 含量增加會使治療總有效率降低，且P53及caspase-3對療效具有預測價值。

綜上所述，血清凋亡分子caspase-3、P53 增多與突發性耳聾的發生、病情加重及治療效果可能有關，未來caspase-3、P53 有望作為突發性耳聾的病情評估標志物用于臨床，同時也為今后研究細胞凋亡在突發性耳聾分別中的作用機制提供了新思路。