牦牛布氏桿菌病流行病學調(diào)查

張文秀

牦牛布魯氏桿菌病是由布魯氏桿菌引發(fā)的一種人畜共患病，除了危害牛之外，還可以危害羊、豬等多種牲畜動物，同時也是一種人畜共患病。該種疾病的典型特征是隱性感染，只有牛群進入繁殖階段之后，才會表現(xiàn)出突然流產(chǎn)，產(chǎn)下死胎，僵尸胎等癥狀。牛布魯氏桿菌病廣泛分布于世界各地，給畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成的危害十分嚴重。

一、試驗材料與方法

1、實驗材料選取

本次研究共選擇化隆縣昂思多鎮(zhèn)10個自然村的160頭牦牛，6個家庭牧場的103頭牦牛和3個中小養(yǎng)殖場的160頭牦牛開展牦牛布魯氏桿菌病流行病學調(diào)查。隨機采集血液，帶回實驗室之后常規(guī)方法分離，得到血清放置在-20℃的環(huán)境下保存。

2、檢測方法

本次牦牛布魯氏桿菌病檢測主要選擇使用牛布氏桿菌病毒抗體檢測ELISA試劑盒。在檢測過程中涉及到蒸餾水，5μL，10μL，50μL，100μL，200μL，500μL，1000μL的加樣器，震蕩器和磁力攪拌器、操作之前需要做好血清的處理工作。操作過程中避免受到任何細胞的刺激，選擇使用不含熱源和內(nèi)毒素的試管收極血液之后，放置在1000轉的離心機內(nèi)，離心處理10min，將血清和紅細胞迅速分離。細胞上清液放置在1000轉的離心機內(nèi)，離心處理10min去除顆粒和聚合物，將組織當中加入適量生理鹽水充分搗碎，放在離心機內(nèi)離心處理10min取上層清液。如果獲得到的血清樣本不立即使用，應該將其分成小部分，放置在-20℃環(huán)境下保存，避免反復冷凍。首先，操作前的準備工作。操作之前所涉及到的實驗吸射液應該在實驗過程中準備，不能夠儲存，稀釋之前應該將標準品震蕩均勻稀釋比例，按照說明書要求開展。緩沖稀釋液，選擇使用50倍的蒸餾水稀釋。在使用之前，所有的試劑就應該混合均勻，不能夠產(chǎn)生大量泡沫，以免加樣過程中出現(xiàn)誤差;其次，操作步驟。標準品的稀釋。本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。40pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液，20pg/ml 4號標準品150μl的5 號標準品加入150μl標準品稀釋液，10pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液，5pg/ml 2號標準品150μl的3號標準品加入150μl 標準品稀釋液2.5pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液。分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30min。將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min。每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 min以內(nèi)進行;最后，計算。以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)即為樣品的實際濃度。

二、結果分析

檢測結果顯示不同養(yǎng)殖模式下牦牛的陽性率分別為0.63%、0.97%、0.00%，其中以家庭牧場和自然村散養(yǎng)戶陽性率最高，中小養(yǎng)殖場沒有發(fā)現(xiàn)陽性病例。總體檢測陽性2份，陽性率為0.47%。不同養(yǎng)殖模式之下的發(fā)病率存在差異。造成不同結果出現(xiàn)的原因主要是因為不同養(yǎng)殖模式之下所采用的養(yǎng)殖管理方案存在很大差異性，其中散養(yǎng)養(yǎng)殖模式、家庭牧場的養(yǎng)殖戶普遍存在著不合理養(yǎng)殖管理。由于一直堅持傳統(tǒng)放牧養(yǎng)殖模式，牛群在戶外活動過程中接觸病原微生物的幾率大大增加。再加上養(yǎng)殖較為分散，養(yǎng)殖隨意性很強，整體的衛(wèi)生環(huán)境普遍較差，給病原微生物的繁殖傳播提供了條件。該種疾病的發(fā)生流行詳細情況，如表1所示。

三、討論

本次調(diào)查結果發(fā)現(xiàn)，不同養(yǎng)殖模式之下，牛布魯氏桿菌病的感染率呈現(xiàn)很大的差異性，其中以家庭牧場的感染率最高達到0.97%，其次是自然村散養(yǎng)戶達到0.63%，中小規(guī)模養(yǎng)殖場發(fā)病率0.00%，超過了農(nóng)業(yè)衛(wèi)生部所制定的布病控制在0.2%以下的標準。出現(xiàn)該種情況，主要是因為牦牛布魯氏桿菌病屬于慢性傳染性疾病，其危害程度雖然不及重特大傳染性疾病傳播速度快，致死率高，但是由于慢性感染會嚴重威脅到動物的身體抵抗能力。再加上動物防疫重心發(fā)生轉移，一年兩次的血清檢測比例相對較低，檢測數(shù)量較少，很難查明本地區(qū)布魯氏桿菌病的整體發(fā)生情況，使得布魯氏桿菌病發(fā)生之后得不到有效控制，不能夠做到有的放矢。對此就需要我們提高重視程度，構建針對性的防控方案，更好的控制該種疾病的發(fā)生流行

（作者單位：810907青海省海東市化隆縣昂思多鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）