婦炎康聯合物理因子治療慢性盆腔炎的療效及對微小RNA-224-3P及轉化生長因子β/Smad信號通路表達的影響

彭智聰 許美珍

(廣東省中山市中醫院康復科，中山市 528403，電子郵箱：rencheng1214@163.com)。

盆腔炎是一種由上生殖道多種微生物感染引起的炎癥，年輕、性活躍女性多見，美國每年有750 000名女性患盆腔炎，以15～29歲為主[1-2]。其中，慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease，CPID)最為常見，因其易反復導致患者生活質量下降，約有20%的CPID患者因輸卵管瘢痕導致不孕，9%發生異位妊娠，18%出現慢性盆腔疼痛[3]。目前，藥物治療是CPID的主要治療手段，但治療效果并不理想。微小RNA(microRNA，miRNA)是一種長度在19～24個核苷酸之間的小型非編碼RNA，其可調節特定靶點，參與多種生理和病理過程[4-5]。miRNA表達水平在循環系統中較為穩定，可用于評估疾病情況及治療效果[6]。有研究發現，miRNA-224-3P對炎癥反應有一定的抑制作用[7]，但其與CPID的關系目前尚不清楚。轉化生長因子β(transforming growth factor beta，TGF-β)與炎癥、炎癥性損傷和上皮恢復有一定的關系[8-9]，在損傷組織的修復和細胞更新以及機體炎癥反應的發生發展中有舉足輕重的作用[10]。本研究探討婦炎康聯合物理因子治療慢性盆腔炎的療效及其對miRNA-224-3P及TGF-β/Smad信號通路表達的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年3月至2018年10月在我院治療的62例CPID患者作為研究對象，納入標準：(1)患者及其家屬對本研究均知情同意，并簽署知情同意書；(2)患者符合《2010年美國疾病控制中心盆腔炎治療指南》CPID診斷標準[11]；(3)經影像學檢查顯示盆腔有積液。排除標準：(1)合并肝腎功能不全患者；(2)合并其他炎癥性疾病患者；(3)患有精神疾病患者；(4)中途退出研究者。按隨機數字表法將62例患者分為觀察組和對照組，每組31例，其中觀察組年齡24～45(35.31±4.29)歲，病程0.4～10.2(4.26±2.67)年；對照組年齡27～43(35.46±3.25)歲，病程0.3～10.6(4.38±2.59)年。兩組患者年齡、病程差異均無統計學意義(均P>0.05)。本研究獲得醫院倫理委員會審核通過。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：對照組給予口服諾氟沙星和甲硝唑抗感染治療，其中諾氟沙星片(上海新亞藥業有限公司，國藥準字：H20031181，批號：20190409)0.1 g/次，3次/d；甲硝唑(銀川生化制藥廠，國藥準字：H64020094，批號：20190613)0.2 g/次，3次/d，28 d為一個療程。觀察組患者在對照組治療方案基礎上，給予口服婦炎康片(廣東德鑫制藥有限公司，國藥準字Z44023648，批號：201900714，規格：0.25 g×18片×6板)1.5 g/次，3次/d，28 d為一個療程，并給予物理因子(中頻電)治療，中頻電治療方法：患者取仰臥位，在下腹部放置2個帶襯墊的矩形電極，利用砂袋固定好，設置合適的電流強度，40 min/次，1次/d，20 d為一個療程。兩組均治療一個療程。

1.2.2 觀察指標：(1)TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平：治療前、療程結束后3 d內采集患者空腹靜脈血約3 mL，室溫下靜置1 h，3 500 r/min離心5 min后收集血清，儲存于-80℃備用。采用酶聯免疫吸附測定試驗檢測血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平，其中TGF-β1試劑盒購自美國eBioscience公司(批號：70-EK1812)，Smad-3(批號：121201)和Smad-7(批號：121271)試劑盒均購自上海西塘公司，均按照試劑盒說明書步驟進行操作。(2)miRNA-224-3P相對表達水平檢測：采集患者治療前、療程結束后3 d內空腹靜脈血約3 mL，室溫下靜置1 h，3 500 r/min離心5 min后收集血清，儲存于-80℃備用。采用RNA提取試劑盒(北京天根生化科技公司，批號：DP419)提取血清總RNA，DU800型分光光度計測定RNA的濃度及純度，隨即進行逆轉錄反應(每15 μL反應體系加入含3 μL逆轉錄引物和7μL Master，5 μL RNA樣品，逆轉錄成cDNA)，以cDNA為模板，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)作為內參，按照實時定量聚合酶鏈式反應(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)試劑盒(北京天根生化科技公司，批號：KR113)說明書檢測miRNA-224-3P的相對表達水平，反應條件：95℃ 15 min，94℃ 15 s，55℃ 30 s，70℃ 35 s，40個循環，采用2-ΔΔCt計算miRNA-224-3P的相對表達水平。miRNA-224-3P正向引物5′-AAAAUGGUGCCCUAGUGACUACA-3′；反向引物5′-UGAAGUCACUAGGGCACCAUUU U-3′，GAPDH正向引物5′-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3′，反向引物 5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。引物由上海生工生物技術有限公司合成。

1.2.3 療效評價[12]：療程結束后3 d內進行療效評價。痊愈：盆腔腫塊、性交痛、下腹墜脹以及異常白帶等癥狀完全消失，機體炎癥水平恢復正常，婦科檢查無按壓痛；顯效:盆腔腫塊、性交痛、下腹墜脹以及異常白帶等癥狀基本消失,機體炎癥水平顯著降低,婦科檢查無按壓痛,B超檢查正常,3個月無復發；有效:盆腔腫塊、性交痛、下腹墜脹以及異常白帶等癥狀改善,機體炎癥水平降低,婦科檢查按壓痛情況、B超檢查情況均改善；無效:未達到“有效”標準?？傆行?(痊愈+顯效+有效)例數/總例數×100%。

1.3 統計學分析 采用SPSS 20.0軟件進行統計學分析。計量資料以(x±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗；計數資料以例數(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗。以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者血清miRNA-224-3P相對表達水平比較 治療前，兩組miRNA-224-3P相對表達水平差異無統計學意義(P>0.05)，治療后，兩組miRNA-224-3P相對表達水平較治療前升高，且觀察組高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者血清miRNA-224-3P相對表達水平比較(x±s)

2.2 兩組患者血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平比較 治療前，兩組患者血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平差異無統計學意義(P>0.05)。治療后，兩組患者血清TGF-β1、Smad-3水平均較治療前降低，Smad-7水平均較治療前升高，且觀察組TGF-β1、Smad-3水平低于對照組，Smad-7水平高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 患者治療前后血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平比較(x±s，pg/mL)

2.3 兩組患者療效比較 觀察組療效優于對照組(P<0.05)，但兩組總有效率差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 兩組患者療效比較[n(%)]

3 討 論

CPID是一種在盆腔或與盆腔相關的結構中持續、非循環疼痛的炎癥，長期的炎癥狀態導致身體其他部位受到牽連[13]，加上CPID具有較高的發病率和容易復發的特點，嚴重影響患者的生活質量。研究顯示，CPID多為病原體感染所導致，主要表現為盆腔組織或周邊組織的炎癥反應，而機體免疫損傷和炎癥相關細胞因子的異常表達與CPID的發生發展密切相關[14-15]。目前CPID的治療以抗生素治療為主，但部分患者感染源不明確，導致抗生素的選擇受到一定的限制，病情嚴重者需進行手術治療。物理因子治療是利用物理因子的物理能，調節機體的神經、體液、內分泌等生理機能，起到消散炎癥及清除殘留浸潤硬結的作用，同時還可以預防并發癥，故物理因子治療在CPID、頸椎病及多種炎癥性疾病的臨床治療中得到廣泛應用[16-17]。婦炎康具有清熱解毒、軟堅散結、消炎止痛等功效，治療陰道炎、CPID等疾病有顯著的臨床效果[7,18]。本研究結果顯示，在常規抗感染治療基礎上，給予婦炎康聯合物理因子治療CPID的療效優于單純常規抗感染治療(P<0.05)，提示婦炎康聯合物理因子治療CPID的臨床療效更好。

miRNA-224-3p是miRNA-224家族成員之一，研究顯示，miRNA-224-3p高表達可導致Toll樣受體4的激活受到抑制[19]，大鼠NRK-52E細胞的炎癥反應減輕，缺氧無糖損傷誘導的細胞凋亡得到改善[9]。還有研究顯示，雷公藤甲素通過上調miRNA-224-3p表達水平改善高糖誘導的NRK-52E細胞炎癥反應[20]。以上研究結果提示 miRNA-224-3p與機體炎癥反應密切相關，但miRNA-244家族成員與盆腔炎癥的相關性鮮見報告。本研究結果顯示，治療后兩組血清miRNA-224-3p相對表達水平均較治療前升高，且觀察組高于對照組(P<0.05)，提示低表達的miRNA-224-3p可能與盆腔炎的發生發展有關，上調miRNA-224-3p表達水平有助于緩解盆腔炎癥狀，提高療效，而婦炎康聯合物理因子治療可以促進miRNA-224-3p的表達。TGF-β/Smad通路在調節組織炎癥損傷以及修復中起著關鍵作用[21]，TGF-β1是細胞因子超家族的一員，其可調控細胞生長和分化、黏附以及凋亡的整個過程，還參與機體損傷的修復、炎癥的發生發展等多種病理過程，被認為是調控組織炎癥和修復機體損傷的關鍵細胞因子之一。有研究顯示，機體發生炎癥損傷后TGF-β1表達增加，這與其參與上皮炎癥的損傷和修復有關[22]。Smad是目前發現的唯一存在細胞內的TGF-β相應酶激活物[23]，其可介導TGF-β在細胞內的信號傳導，其中Smad3和Smad7在TGF-β/Smad信號通路的轉導過程中有著重要的作用，Smad7作為TGF-β蛋白的負調控因子，在整個信號通路中起著負調控的作用[24]。本研究結果顯示，治療后兩組TGF-β1、Smad-3的表達較治療前下降，Smad-7的表達較治療前上升，且觀察組變化更明顯(P<0.05)，提示藥物干預后TGF-β1/Smad信號通路表達受到抑制，而婦炎康聯合物理因子治療CPID可以提高療效可能與調節TGF-β/Smad信號通路作用相關。但有研究發現多種藥物具有上調CPID患者TGF-β1表達的作用[25-26]，與本研究結果存在差異，可能與納入的研究對象年齡及病程不同有關，且藥物對信號通路的影響是一個復雜的過程，本研究結果還有待進一步驗證。

綜上所述，在常規抗感染基礎上，給予婦炎康聯合物理因子治療CPID患者療效優于常規抗生素治療，這可能與其促進miRNA-224-3P表達，調節TGF-β/Smad信號通路有關。