Ang-(1-7)、ACE2、Mas與子宮內膜癌患者臨床和病理特征關系研究

陳麗華，朱婕曼，劉玉鳳，劉 浩，馬春星，張 凡，劉云春

子宮內膜癌屬女性常見上皮性惡性腫瘤，近年來在我國其患病率呈逐年增長態勢，并呈年輕化趨勢，圍絕經期及絕經后婦女好發，病死率較高[1]。目前該病具體病因尚未完全明確，可能與遺傳因素、內分泌代謝相關疾病(包括肥胖、高血壓病、糖尿病及甲狀腺功能減退等)、子宮內膜息肉和子宮內膜增生等因素相關[2]。子宮內膜癌的發生及發展是多種原因共同作用的結果[3]。腎素-血管緊張素系統(renin-angiotensin system， RAS)作為人體內重要的調節系統，屬腫瘤微環境的關鍵組成成分；RAS系統包括血管緊張素轉化酶(angiotensin converting enzyme， ACE)-血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ， AngⅡ)-血管緊張素Ⅱ1型受體(angiotensinⅡtype 1 receptor， AT1R)軸和血管緊張素轉換酶2(angiotensin-Converting enzyme 2， ACE2)-血管緊張素-(1-7)[angiotensin-(1-7)， Ang-(1-7)]-Mas受體軸2條代謝途徑，后者已被證實為治療癌癥的有利靶點[4]。ACE2作為該通路中的一種重要血管緊張素轉換酶同系物，屬血管舒張物質及心血管系統保護因子，可水解AngⅡ生成Ang-(1-7)，而AngⅡ為RAS重要效應因子，可經介導炎癥反應在癌癥的病理生理過程中起到關鍵作用[5]。Mas作為該通路中一種關鍵致癌基因，其編碼的蛋白質Mas受體屬G蛋白耦聯受體，在癌癥的發生過程中發揮著重要作用[6]。本研究回顧性分析子宮內膜癌組織中Ang-(1-7)、ACE2和Mas的表達情況，探討Ang-(1-7)、ACE2和Mas與子宮內膜癌患者臨床和病理特征的關系，旨在為該病早期診斷、治療及預后評估提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2018年1月—2020年1月河北北方學院附屬第一醫院收治的符合納入及排除標準的行子宮內膜癌切除手術的子宮內膜癌120例的臨床資料。120例年齡18～80(54.62±8.57)歲；絕經狀態：未絕經53例，絕經67例；臨床分期：Ⅰ或Ⅱ期92例，Ⅲ或Ⅳ期28例；病理類型：腺癌80例，腺癌伴鱗狀上皮化生40例；病理分期：G1期74例，G2或G3期46例；浸潤深度：≥淺肌層36例，<淺肌層84例；淋巴結轉移情況：有淋巴結轉移32例，無淋巴結轉移88例。本研究經醫院醫學倫理委員會批準同意執行(批號：2018-3號)。

1.2納入及排除標準 納入標準：①所有患者均符合“子宮內膜癌篩查和早期診斷專家共識”[7]中子宮內膜癌診斷標準，并皆經術后病理檢查證實診斷；②術前均未行任何相關治療，包括內分泌治療和放化療等；③年齡≥18歲；④臨床資料完整；⑤患者和(或)其家屬簽署相關知情同意書。排除標準：①伴心、腎及肝等重要臟器功能不全及精神疾病者；②合并其他惡性腫瘤者；③妊娠期或哺乳期婦女。

1.3研究方法

1.3.1臨床及病理資料收集：收集并記錄患者臨床及病理資料，包括年齡、絕經狀態、臨床分期、病理類型、病理分期、浸潤深度、淋巴結轉移情況。

1.3.2Ang-(1-7)、ACE2和Mas檢測方法

1.3.2.1主要儀器及試劑：主要儀器包括HM550恒溫箱式冷凍切片機(德國MICROM公司生產)、TGL-16型臺式高速離心機(江蘇金壇市億通電子有限公司生產)、PHY-Ⅲ型病理組織漂烘處理儀(儀征市康福醫療器材有限公司生產)、CX21型光學顯微鏡(日本Olympus公司生產)和PLS-MZ001智能病理圖文系統(北京普利生儀器有限公司生產)。主要試劑包括兔抗人ACE2多克隆抗體(英國abcam公司生產)、兔抗人Mas多克隆抗體(武漢伊艾博生物科技有限公司生產)、SP試劑盒(福州邁新生物技術開發有限公司生產)、二氨基聯苯胺(diaminobenzidine， DAB)顯色試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司生產)和檸檬酸鹽抗原修復液(福州邁新生物技術開發有限公司生產)。

1.3.2.2免疫組織化學SP法檢測Ang-(1-7)、ACE2和Mas表達情況：采集患者子宮內膜癌組織及距離腫瘤組織邊緣≥5 cm的癌旁正常組織，使用免疫組織化學SP法檢測子宮內膜癌組織和癌旁正常組織中Ang-(1-7)、ACE2和Mas表達情況。所有組織標本經10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋后組織蠟塊切成4 μm厚度，進行連續切片，根據各試劑盒說明書進行免疫組織化學染色和蘇木精-伊紅染色。石蠟組織切片烘干脫蠟，阻斷內源性過氧化物酶活性后抗原修復，滴加一抗、二抗后DAB顯色，經蘇木素復染、鹽酸酒精分化、酒精梯度脫水、二甲苯透明后中性樹膠封固，行顯微鏡觀察。陽性對照選取已知Ang-(1-7)、ACE2和Mas陽性切片，陰性對照取磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗。

1.3.2.3結果判斷[8]：Ang-(1-7)、ACE2和Mas主要定位于細胞胞膜和胞漿，以出現棕黃色顆粒細胞記為陽性表達。每張切片均于放大400倍的光學顯微鏡下選擇5個高倍視野，計算陽性表達的細胞個數，獲得每個視野的陽性率。

1.4觀察指標 比較不同子宮內膜組織中Ang-(1-7)、ACE2和Mas表達情況，并分析子宮內膜癌組織Ang-(1-7)、ACE2和Mas表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征的關系。

2 結果

2.1不同子宮內膜組織中Ang-(1-7)、Mas和ACE2表達情況比較 子宮內膜癌組織中Ang-(1-7)和ACE2陽性表達率顯著低于癌旁正常組織，Mas陽性表達率顯著高于癌旁正常組織，差異有統計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 不同子宮內膜組織中Ang-(1-7)、ACE2和Mas表達情況比較[例(%)]

2.2Ang-(1-7)表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征關系 臨床分期為Ⅰ或Ⅱ期、病理分期為G1期、浸潤深度<淺肌層、無淋巴結轉移的子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織Ang-(1-7)陽性表達率顯著高于臨床分期為Ⅲ或Ⅳ期、病理分期為G2或G3期、浸潤深度≥淺肌層、有淋巴結轉移的子宮內膜癌患者，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；子宮內膜癌組織Ang-(1-7)表達與子宮內膜癌患者年齡、絕經狀態和病理類型無明顯相關性(P>0.05)，見表2。

表2 子宮內膜癌組織Ang-(1-7)表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征的關系[例(%)]

2.3ACE2表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征關系 臨床分期為Ⅰ或Ⅱ期、病理分期為G1期、浸潤深度<淺肌層、無淋巴結轉移的子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織ACE2陽性表達率顯著高于臨床分期為Ⅲ或Ⅳ期、病理分期為G2或G3期、浸潤深度≥淺肌層和有淋巴結轉移的子宮內膜癌患者，差異有統計學意義(P<0.05)；子宮內膜癌組織ACE2表達與子宮內膜癌患者年齡、絕經狀態和病理類型無明顯相關性(P>0.05)，見表3。

表3 子宮內膜癌組織ACE2表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征的關系[例(%)]

2.4Mas表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征關系 臨床分期為Ⅰ或Ⅱ期、病理分期為G1期、浸潤深度<淺肌層、無淋巴結轉移的子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織Mas陽性表達率顯著低于臨床分期為Ⅲ或Ⅳ期、病理分期為G2或G3期、浸潤深度≥淺肌層、有淋巴結轉移的子宮內膜癌患者，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；子宮內膜癌組織Mas表達與子宮內膜癌患者年齡、絕經狀態和病理類型無明顯相關性(P>0.05)，見表4。

3 討論

子宮內膜癌屬婦科常見惡性腫瘤，發病率及病死率均較高，預后較差，可能與腫瘤臨床分期、病理分期、浸潤深度及淋巴結轉移等因素密切相關[9]。臨床文獻報道顯示，腫瘤的生長與轉移依賴血管生成，而血管生成在子宮內膜癌的發生、進展及預后中起著重要作用[10-11]。RAS在腫瘤新生血管生成中具有重要作用，其作為調節體液平衡及血壓的重要系統，主要包括2條代謝途徑，即ACE-AngⅡ-AT1R軸和ACE2-Ang-(1-7)-Mas受體軸，有報道證實ACE2-Ang-(1-7)-Mas受體軸可有效抑制乳腺癌細胞遷移及侵襲，其中Ang-(1-7)、ACE2和Mas可能與乳腺癌的發生及發展密切相關[12-13]。但目前關于Ang-(1-7)、ACE2和Mas是否參與子宮內膜癌的發病尚未明確，尤其關于三者與子宮內膜癌患者臨床和病理特征的關系，臨床相關報道較少。為此，我們展開相關研究，旨在為子宮內膜癌臨床診斷、治療及預后評估提供參考。

本研究結果顯示，子宮內膜癌組織中Ang-(1-7)和ACE2陽性表達率顯著低于癌旁正常組織，差異有統計學意義。提示Ang-(1-7)、ACE2可能在子宮內膜癌的發生、發展過程中發揮著重要作用。ACE2屬于一種類似ACE的酶，但ACE作為一種肽酞二肽酶，存在兩個酶催化區，而ACE2屬羧肽酶，僅存在一個酶催化區。ACE2可水解AngⅠ及AngⅡ，分別生成Ang-(1-9)及Ang-(1-7)，而Ang-(1-9)在ACE水解作用下可進一步生成少量Ang-(1-7)。目前臨床已證實Ang-(1-7)可通過其特異性Mas受體及與激肽系統的交互作用發揮拮抗AngⅡ作用，產生促進凋亡等效應[14]。筆者推測，在ACE-AngⅡ-AT1R軸與子宮內膜病變相互促進的同時，ACE2-Ang-(1-7)-Mas受體軸也被激發，可能發揮著反向調節作用，達到遏制病變、保護子宮內膜的效應，其機制可能與ACE2抑制AngⅡ縮血管作用，增加局部供氧有關，但具體機制尚需今后深入研究。本研究結果還顯示，臨床分期為Ⅰ或Ⅱ期、病理分期為G1期、浸潤深度<淺肌層、無淋巴結轉移的子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織Ang-(1-7)和ACE2陽性表達率顯著高于臨床分期為Ⅲ或Ⅳ期、病理分期為G2或G3期、浸潤深度≥淺肌層、有淋巴結轉移的子宮內膜癌患者。表明子宮內膜癌患者ACE2表達與臨床分期、病理分期、浸潤深度、淋巴結轉移有關。有文獻報道，過表達ACE2可抑制血管內皮生長因子-A產生，降低微血管密度，抑制肺癌細胞增殖，阻滯細胞周期，誘導細胞凋亡[15]。另有文獻報道，過表達ACE2可抑制乳腺癌細胞遷移、侵襲，其作用可能通過促進Ang-(1-7)生成實現[16]。推測造成本結論的原因可能與ACE2低表達誘導AngⅡ縮血管作用增強，促進腫瘤細胞增殖、浸潤及轉移有關。

表4 子宮內膜癌組織Mas表達與子宮內膜癌患者臨床和病理特征的關系[例(%)]

本研究結果顯示，子宮內膜癌組織中Mas陽性表達率顯著高于癌旁正常組織，差異有統計學意義；臨床分期為Ⅰ或Ⅱ期、病理分期為G1期、浸潤深度<淺肌層、無淋巴結轉移的子宮內膜癌患者子宮內膜癌組織Mas陽性表達率顯著低于臨床分期為Ⅲ或Ⅳ期、病理分期為G2或G3期、浸潤深度≥淺肌層、有淋巴結轉移的子宮內膜癌患者。提示Mas可能在子宮內膜癌的發生、發展過程中發揮著重要作用。Mas屬于一種致癌基因，其cDNA序列存在一個編碼325個氨基酸的開放閱讀框，該區域所編碼的Mas蛋白質屬典型G蛋白耦聯受體，可結合Ang-(1-7)，發揮調節體液平衡及血壓的作用[17]。有文獻報道顯示，Ang-(1-7)可促進細胞Mas表達，而Mas表達提升的人肝癌細胞凋亡現象顯著增加[18]。推測造成本結論的原因可能與Mas過表達通過維持轉化細胞生存并經抑制接觸而誘導腫瘤擴散，促進細胞非依賴性生長進程有關，或與Ang-(1-7)及其他信號通路共同調節腫瘤形成有關，但具體作用機制仍需今后進一步研究。

綜上所述，Ang-(1-7)、ACE2和Mas可能參與子宮內膜癌的發生和發展，且子宮內膜癌組織中Ang-(1-7)、ACE2和Mas表達異常與腫瘤臨床分期、病理分期、浸潤深度、淋巴結轉移密切相關。但因本研究選取樣本量偏少，結果可能存在一定偏倚，故今后仍需深入研究進行證實。