液相色譜法測定食品中的糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸

張作松 施震地

摘 要：采用液相色譜法對食品中添加的苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、糖精鈉和安賽蜜進行檢測。樣品加水混勻后再添加蛋白質沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅以去除蛋白質，再超聲、離心提取，上清液過0.22 μm濾膜制成待測樣品，經過C18色譜柱分離，流動相為甲醇-乙酸銨溶液（體積比為8∶92），等梯度洗脫，26.2 min實現4種待測物的有效分離。加標濃度分別為1、5、10 mg/kg時，加標回收率在78.3%～117.4%，相對標準偏差（RSD）在1.6%～4.1%，本方法可用于檢定食品中的上述4種添加劑。

關鍵詞：液相色譜;苯甲酸;山梨酸;糖精鈉和安賽蜜;添加劑

食品很容易因為溫濕度、環境等出現變質，給企業帶來巨大經濟損失，也會制約食品行業發展。防腐劑的添加很好地延長了食品的保質期，因此被廣泛添加到食品中。目前常添加的有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、丙酸及其鹽、脫氫乙酸等。甜味劑能夠改善口感進而增加食欲，常用的甜味劑有糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜、紐甜與阿力甜等[1]。近些年的研究表明食品添加劑超量使用也會危害人體健康，食品安全國家標準對防腐劑和甜味劑的添加量作出明確規定，以保證食品安全[2]。本文采用液相色譜法同時測定食品中所添加的苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、糖精鈉和安賽蜜。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters allianc acquity e2695液相色譜儀;渦旋混合器;HR/T20 MM立式高速冷凍離心機;KH-250DB數控型超聲波清洗器。甲醇（HPLC純）;乙酸銨、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅均為分析純;標準試劑：山梨酸、安賽蜜、苯甲酸、糖精鈉純度均>99%。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動相：甲醇+乙酸銨溶液=8+92;柱溫：35 ℃;進樣量：10 μL，檢測波長：230 nm;流速：1 mL/min。

1.3 樣品前處理

取2.5 g左右樣品于50 mL離心管中，加入25 mL水渦旋振蕩，加入2 mL 10.6%的亞鐵氰化鉀溶液渦旋20 s混勻，再加入2 mL 22%的乙酸鋅溶液渦旋1 min后定容至刻度線，超聲30 min，于10 000 r/min離心10 min，上清液轉移至50 mL容量瓶中，殘渣再加水混勻后離心提取一次，上清液合并至原容量瓶中，用水定容至刻度線混勻，取上清液2 mL過

0.22 μm濾膜，供液相色譜上機檢測。

2 結果與討論

2.1 流動相條件的選擇

參照GB 5009.28-2016《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》檢測標準，通過改變甲醇的比例[1]對比驗證標準品目標峰的分離和出峰時間，最后確定流動相條件為：甲醇+乙酸銨溶液=8+92。

2.2 標準曲線的建立與分析

準確稱取標準品（精確到0.000 1 g），以空白樣品為基質制備基質空白標準溶液，用空白標準基質配制成梯度為1、5、10、25、50、100 mg/L與200 mg/L

的混合系列標準工作液，使用前配制，然后對標準工作液進行檢測。圖1是4種標準品的色譜圖，從圖1中可以看出，安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的出峰時間分別在10.68、12.41、17.13 min與26.24 min，實現了4種樣品的同時檢測。將色譜檢出的峰面積與標準溶液濃度進行擬合，計算出目標物的線性回歸方程、相關系數、線性范圍和檢出限，如表1所示。4種樣品擬合曲線的線性相關系數達到0.999以上。回收率試驗的加標濃度分別為1、2.5、5 mg/kg，每份樣品分別重復測定4次，結果表明樣品的平均回收率在78.3%～117.4%，相對標準偏差（RSD）在1.6%～4.1%。

3 結論

本文通過液相色譜法檢測食品中的苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、糖精鈉和安賽蜜，參考GB 5009.28-2016《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》，為防腐劑和甜味劑的檢測提供了一種高效、快捷的檢測方法。利用液相色譜技術建立了同時測定多組分防腐劑和甜味劑的方法，提高了檢測效率、縮短了樣品的檢測時間，并能確保檢測結果的準確性，這也為以后的食品檢測工作提供了思路上的借鑒。

參考文獻

[1]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會，國家食品藥品監督管理總局.GB 5009.28-2016食品安全國家標準食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定[S].北京：中國標準出版社，2017.

[2]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局.SN/T3538—2013出口食品中六種合成甜味劑的檢測方法液相色譜一質譜/質譜法[S].北京：中國質檢出版社，2013.