番茄紅素聯(lián)合地塞米松治療雙硫侖樣反應(yīng)的研究＊

陳星宇 胡薇 朱法蓉 邢琪 汪莉萍

雙硫侖樣反應(yīng)是臨床最常見(jiàn)的藥物副反應(yīng)之一，臨床常利用其副反應(yīng)幫助嗜酒患者戒酒，故又稱(chēng)戒酒硫樣反應(yīng)[1]。雙硫侖樣反應(yīng)臨床癥狀多樣，病情嚴(yán)重程度與藥物、酒精攝入量、患者體質(zhì)等因素密切相關(guān)，個(gè)體差異大，病情輕重不一，嚴(yán)重影響患者工作與生活質(zhì)量，更有甚者會(huì)有生命危險(xiǎn)[2-3]。藥物與酒精的中間產(chǎn)物抑制乙醛脫氫酶活性導(dǎo)致乙醛代謝受阻并大量蓄積是目前雙硫侖樣反應(yīng)機(jī)制的主流學(xué)說(shuō)[4]。近年來(lái)隨著醫(yī)療衛(wèi)生知識(shí)的普及，患病率得到了有效的控制，但是患者服用頭孢類(lèi)藥物期間或停藥后攝入酒水的案例仍時(shí)有發(fā)生。當(dāng)前，關(guān)于雙硫侖樣反應(yīng)的研究幾乎以臨床案例分析為主，基于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究卻較少，本實(shí)驗(yàn)參考劉非凡等[5-6]建立動(dòng)物模型的方法及其研究成果，對(duì)番茄紅素和地塞米松緩解雙硫侖反應(yīng)綜合征的作用機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)別的昆明種小鼠56只，25～35 g，雌雄各半，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供。實(shí)驗(yàn)前3 d使小鼠自由攝食、飲水，適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。

1.2 藥品及試劑

番茄紅素（貨號(hào)：B20378，規(guī)格：20 mg粉劑，上海源葉生物科技有限公司）；地塞米松磷酸鈉（貨號(hào)：MB1536，規(guī)格：1 g粉劑，大連美侖生物科技有限公司）；頭孢哌酮鈉（貨號(hào)：CN00021511，規(guī)格：2 g粉針劑，麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠(chǎng)）；總超氧化物歧化酶活性測(cè)試盒（貨號(hào)：A001-3-2，規(guī)格：96 T，南京建成生物工程研究所）；丙二醛測(cè)試盒（貨號(hào)：A003-1，規(guī)格：100 T/96樣，南京建成生物工程研究所）；谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（貨號(hào)：C009-2，規(guī)格：96 T，南京建成生物工程研究所）；乙醛脫氫酶活性測(cè)試盒（貨號(hào)：A075-1-1，規(guī)格：50管/48樣，南京建成生物工程研究所）；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：P0010S，規(guī)格：200 T，Beyotime）；乙酸（貨號(hào)：10000218，規(guī)格：500 ml，上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；無(wú)水乙醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；食用油（嘉里糧油有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組與處理 56只小鼠隨機(jī)分為7組（n=8）：正常組（N組）、模型組（O組）、地塞米松組（P組）、番茄紅素低、中、高劑量組（L組、M組、H組）、中劑量番茄紅素聯(lián)合地塞米松組（U組）。N組：生理鹽水灌胃（0.2 ml/10 g）、生理鹽水腹腔注射（0.2 ml/10 g）；O組：前3 d用濃度50%酒精灌胃（0.2 ml/10 g），后3 d于灌胃前1 h腹腔注射頭孢哌酮鈉（0.5 mg/g），其他各組動(dòng)物模型均按照O組相同方法建立；P組：注射頭孢哌酮鈉1 h后給予腹腔注射0.002 mg/g地塞米松磷酸鈉液；L組、M組和H組：注射頭孢哌酮鈉1 h后給予食用油稀釋成低、中、高濃度（5、10、20 mg/kg）番茄紅素灌胃；U組：注射頭孢哌酮鈉1 h后給予腹腔注射0.002 mg/g地塞米松磷酸鈉液聯(lián)合10 mg/kg番茄紅素灌胃。

1.3.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法 各組動(dòng)物最后1次腹腔注射60 min后處死小鼠，用生理鹽水灌注動(dòng)物肝臟至發(fā)白，取肝臟凍存于-80 ℃，各組取肝臟及保存方法同上。取組織塊研磨制成10%組織勻漿，12 000 r/min，4 ℃，離心20 min，取上清液即10%勻漿上清液待測(cè)。樣本蛋白濃度、SOD、MDA、ALT、ALDH均按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟測(cè)試。

1.4 觀(guān)察指標(biāo)

小鼠肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）活性、乙醛脫氫酶（ALDH）活性、丙二醛（MDA）含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)及單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠肝臟SOD活性、MDA含量比較

L組及N組SOD活性高于O組，MDA含量與O組接近，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；M組和H組SOD活性均高于L組，MDA含量均低于L組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但M組及H組SOD活性、MDA含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；P組及U組SOD活性均高于其余組，MDA含量均低于其余組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但P組及U組SOD活性、MDA含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.2 各組小鼠肝臟ALT活性比較

O組ALT活性低于N組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；L組、M組和H組ALT活性均高于O組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），L組、M組和H組ALT活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；P組及U組ALT活性均高于其余組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但P組及U組ALT活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

2.3 各組小鼠肝臟ALDH活性比較

O組ALDH活性低于N組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；L組、M組和H組ALDH活性均高于O組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），L組、M組和H組ALDH活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；P組和U組ALDH活性均高于其余組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但P組及U組ALDH活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠肝臟中SOD、MDA、ALT、ALDH比較 （±s）

表1 各組小鼠肝臟中SOD、MDA、ALT、ALDH比較 （±s）

*與O組比較，P<0.05；其余統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果以文字描述為準(zhǔn)。

組別 SOD[U/（mg·prot）] MDA[nmol/（mg·prot）] ALT[U/（g·prot）] ALDH[U/（mg·prot）]N 組（n=8） 244.33±17.50 8.80±2.07 21.12±3.09 95.63±30.52*O 組（n=8） 168.42±21.89 9.97±3.10 14.98±2.09 60.52±6.88 P 組（n=8） 411.17±33.29* 4.40±1.48* 34.77±12.13* 142.76±17.17*L 組（n=8） 177.08±28.87 10.73±2.22 16.61±2.64 61.21±9.52 M 組（n=8） 260.21±31.14* 5.97±1.43* 24.45±6.75 64.50±14.78 H 組（n=8） 279.65±84.36* 6.13±2.30* 25.04±6.46 77.43±21.57 U 組（n=8） 472.47±98.37* 4.20±1.22* 36.52±5.98* 128.37±21.08*F值 35.78 13.16 13.28 25.44 P值 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05

3 討論

雙硫侖樣反應(yīng)是由于乙醛脫氫酶和多巴胺β-羥化酶功能的障礙中斷乙醇的正常代謝過(guò)程，進(jìn)而乙醛、多巴胺代謝障礙、滯留、蓄積，隨后機(jī)體產(chǎn)生一系列的人體生理、病理的應(yīng)激變化，最終形成一組典型的雙硫侖樣反應(yīng)臨床綜合征[7]。正常代謝過(guò)程中，乙醇經(jīng)細(xì)胞色素CYP2E1代謝后產(chǎn)生大量羥自由基、過(guò)氧化氫和超氧陰離子并促進(jìn)體內(nèi)氧自由基生成和脂質(zhì)過(guò)氧化，誘發(fā)器官損傷，尤其是肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)[8-10]。同時(shí)，乙醛和氧自由基都極易與細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和其他復(fù)雜分子相互作用，形成稱(chēng)為加合物的混合化合物，與蛋白形成的加合物與多種疾病相關(guān)（免疫相關(guān)疾病或心血管疾?。11-14]。大量蓄積的乙醛與谷胱甘肽和半胱氨酸結(jié)合，使其失去清除自由基作用而產(chǎn)生大量羥基和自由基[15]，通過(guò)氧化應(yīng)激和Ca2+失衡介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激乙醛亦可在體外誘導(dǎo)神經(jīng)毒性，乙醛還與肝損傷及致癌作用密切相關(guān)[16-17]。可見(jiàn)病理過(guò)程中產(chǎn)生的大量自由基對(duì)機(jī)體可產(chǎn)生潛在損傷，氧化應(yīng)激可能造成的損傷不可忽視。

番茄紅素是目前自然界的植物中被發(fā)現(xiàn)的清除自由基的能力最強(qiáng)的抗氧化劑之一，其抗氧化能力其他胡蘿卜素遠(yuǎn)不能及[18]。最近研究表明，番茄紅素可通過(guò)清除超氧陰離子、羥基自由基減輕血管內(nèi)皮及平滑肌的氧化損傷，降低組織氧化應(yīng)激反應(yīng)改善脂質(zhì)過(guò)氧化，拮抗肝臟線(xiàn)粒體膜脂質(zhì)過(guò)氧化，具有抗氧化、抗血脂異常和器官保護(hù)的作用[19]。因此，番茄紅素緩解雙硫侖樣反應(yīng)癥狀可能與清除自由基拮抗氧化應(yīng)激反應(yīng)和臟器保護(hù)有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)，地塞米松可通過(guò)提高乙醛脫氫酶活性對(duì)于降低病死率緩解臨床癥狀具有顯著作用，再一次證實(shí)乙醛脫氫酶活性受抑制是雙硫侖反應(yīng)的重要機(jī)制。番茄紅素對(duì)于緩解雙硫侖樣反應(yīng)癥狀具有一定療效，高濃度治療效果更佳，H組SOD活性增高（P<0.05），MDA含量降低（P<0.05），ALT和ALDH活性無(wú)顯著變化，可見(jiàn)，高劑量番茄紅素對(duì)緩解臨床癥狀和降低病死率與氧自由基含量密切相關(guān)，與乙醛脫氫酶活性相關(guān)性較低。P組和U組ALT活性均顯著增加，藥物治療造成的肝臟損傷可能與乙醛蛋白加合物和激素副作用有關(guān)。P組ALDH活性稍高于U組，其原因可能與聯(lián)合用藥稀釋了地塞米松磷酸鈉的濃度有關(guān)。U組SOD和ALDH活性均顯著增加MDA含量顯著降低，小鼠治療后恢復(fù)較快并且更精神活潑，可見(jiàn)在提高乙醛脫氫酶活性的基礎(chǔ)上增加機(jī)體抗氧化能力有益于雙硫侖樣反應(yīng)小鼠快速康復(fù)。綜上所述，除乙醛脫氫酶活性受抑制外，自由基在雙硫侖樣反應(yīng)過(guò)程中具有重要意義。另有文獻(xiàn)表明，地塞米松作為肝藥酶P450誘導(dǎo)劑增高乙醛脫氫酶活性，還可通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的NO水平進(jìn)而提高機(jī)體抗氧化能力[22]。本實(shí)驗(yàn)為雙硫侖樣反應(yīng)臨床治療提供有力的理論依據(jù)，同時(shí)番茄紅素應(yīng)用于雙硫侖樣反應(yīng)的劑量、療效和肝臟保護(hù)作用仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)探究。