雞球蟲病流行病學、防治藥物與疫苗研究進展

廖申權，戚南山，呂敏娜，吳彩艷，李 娟，蔡海明，林栩慧，胡俊菁，于林增，張健騑，謝明權，孫銘飛

（1.廣東省農業科學院動物衛生研究所/農業農村部獸用藥物與診斷技術廣東科學觀測實驗站/廣東省畜禽疫病防治研究重點實驗室，廣東 廣州 510640；2.嶺南現代農業科學與技術廣東省實驗室茂名分中心，廣東 茂名 525000）

家禽養殖業是畜牧業的基礎性產業，禽肉和蛋已成為人們蛋白質消費的主要來源。據聯合國糧食及農業組織（FAO）統計，雞肉成為全球第一大類動物蛋白，產量連續4年超過豬肉，2019年全球禽肉產量超過3.3億t，雞年養殖量達660億羽；我國禽肉產量世界第一，2019年達8 034萬t，家禽年出欄量超過146億羽，其中白羽肉雞與黃羽肉雞年出欄量達93億羽，肉雞養殖在家禽養殖中占主導地位。雞球蟲病是一種嚴重危害雞養殖業發展且呈全球范圍流行的寄生蟲病。雖然面臨禽流感及其他重要傳染病的威脅，但是雞球蟲病仍然是導致全球雞養殖業巨大經濟損失的最嚴重疾病之一。據不完全統計，全球每年因雞球蟲病引起的經濟損失高達30億美元［1］。預計到2050年，全球家禽養殖量將是目前的兩倍以上，如何有效防控雞球蟲病將成為養殖行業關注的重點。大多數學者認為雞球蟲有7個種，分別是柔嫩艾美耳球蟲（Eimeria tenella）、毒害艾美耳球蟲（E. necatrix）、堆型艾美耳球蟲（E.acervulina）、巨型艾美耳球蟲（E. maxima）、布氏艾美耳球蟲（E. brunetti）、和緩艾美耳球蟲（E.mitis）和早熟艾美耳球蟲（E. praecox），其致病力由強到弱為柔嫩艾美耳球蟲＞毒害艾美耳球蟲＞布氏艾美耳球蟲＞巨型艾美耳球蟲＞堆型艾美耳球蟲＞和緩艾美耳球蟲＞早熟艾美耳球蟲。目前，雞球蟲病的防治仍主要采用在飼料中添加抗球蟲藥物的手段，但是隨著抗球蟲藥物長期、大量使用，導致雞球蟲抗藥性及藥物殘留等問題，因而雞球蟲病的安全、有效防控措施備受關注。同時，世界各國已先后提出了抗生素、生長促進劑“退出”計劃［2］，尤其是歐盟已于2012年全面禁止在飼料中添加抗球蟲藥物，雞球蟲病的防控在新形勢下面臨新的挑戰。近年來，國內外學者在雞球蟲病的流行病學研究、防治藥物開發與疫苗研制等方面開展了大量研究工作，本文從雞球蟲病流行病學、防治藥物開發及疫苗研制等方面，系統地總結了國內外雞球蟲病的防控研究進展，以期為生產實踐提供理論依據。

1 雞球蟲病流行病學

1.1 雞球蟲的感染與繁殖

雞球蟲是一類單宿主型的寄生蟲，生活史不需要中間宿主，其感染是“自限性”的。孢子化卵囊被雞只攝入后侵入腸上皮細胞，經過2～4代裂殖生殖，再經配子生殖，形成未孢子化卵囊排出體外。如果雞體沒有再次感染雞球蟲，體內就不會有雞球蟲存在，但在實際生產過程中，雞體不斷地從環境中攝入球蟲卵囊，球蟲的感染不斷發生，但是雞體需要一次攝入大量孢子化卵囊才出現明顯的臨床癥狀，致病劑量因球蟲蟲種不同而存在明顯差異［3］。在飼養過程中，雞可以通過少量多次的自然感染獲得免疫力，而沒有攝入卵囊或者攝入卵囊數量不足以產生堅強免疫力時，雞仍可能因攝入環境中的卵囊經過2～4個生活史循環后達到致病劑量而感染發病。雞球蟲的繁殖力較強，不同蟲種的卵囊繁殖力卻存在一定差異，接種最佳劑量孢子化卵囊后，每只雞的最大卵囊繁殖力依次為堆型、柔嫩、布氏、巨型和毒害艾美耳球蟲［4］。研究顯示，雞球蟲的繁殖力受“占位效應”的影響，當感染劑量低于占位閾值時，裂殖子數量較少，腸道內豐富的未感染腸上皮細胞給配子體發育提供了良好條件，卵囊得到充分發育，平均卵囊產量較高；當感染劑量高于占位閾值時，球蟲經多次裂殖生殖后產生大量裂殖子，腸上皮細胞呈現“過飽和”現象，不利于裂殖子發育和配子生殖，從而導致平均卵囊產量降低［5］。理論上1個柔嫩艾美耳球蟲卵囊感染后可以產生180萬個卵囊后代［6］，而實際上柔嫩艾美耳球蟲的最大卵囊產量僅為4.29萬個［5］。

1.2 流行病學特征

1.2.1 雞球蟲病流行情況 集約化養雞場是雞球蟲病暴發的最適宜場所，其發病率為50%～70%，如不采取有效措施，其死亡率為20%～30%，嚴重時可高達80%。雞球蟲在世界范圍廣泛流行，在伊朗、羅馬尼亞、尼日利亞、中國、印度、巴基斯坦、韓國及埃塞俄比亞的流行率分別為55.96%、91%、52.9%、65.8%、77.7%、43.89%、78.7%、56%［7-12］。不同地區不同養殖場各蟲種的感染強度有所不同，但都以數種球蟲的混合感染為主。研究顯示，羅馬尼亞雞球蟲的優勢蟲種為堆型（91%）和柔嫩艾美耳球蟲（61%）［8］，捷克斯洛伐克、法國及瑞典雞球蟲的優勢蟲種為堆型（100%）、柔嫩（77%）和巨型艾美耳球蟲（25%）［13］，美國雞球蟲的優勢蟲種為巨型（34%）、早熟（24%）、堆型（22%）、柔嫩艾美耳球蟲（15%）［14］，亞洲、非洲及中東地區雞球蟲的優勢蟲種為堆型（19%～87%）、柔嫩（27%～62%）、布氏（10%～60%）、毒害艾美耳球蟲（4%～30%）［15］。我國雞球蟲的流行情況為柔嫩（90%）、早熟（88%）、堆型（72%）、巨型（68%）、和緩（60%）、毒害（26%）、布氏艾美耳球蟲（8%）［11］。按地理區域分，東北、華北地區的優勢蟲種均為柔嫩、巨型和堆型艾美耳球蟲，總感染率分別為54.6%和67.1%；華中地區優勢蟲種為柔嫩、毒害、堆型和巨型艾美耳球蟲，總感染率為37.9%；華東地區常見蟲種為柔嫩、毒害、堆型、巨型與和緩艾美耳球蟲，總感染率達63.5%；華南、西南和西北地區7種球蟲均常見，總感染率分別為 65.6%、21.4% 和 39.7%［16］。

1.2.2 雞球蟲病流行的影響因素 雞球蟲的感染與雞只日齡、品種，飼養管理，環境氣候，其他病原及雞體免疫力等影響因素相關。不同品種、日齡的雞只均可感染球蟲并發生雞球蟲病。研究顯示，狼山雞、藏雞等10個品種對球蟲的易感性較低，白羽雞、清遠麻雞等7個品種對球蟲易感性較高［17］，雛雞感染率明顯高于成年雞，15～50日齡雛雞最易感，較小日齡雞接觸卵囊數量較少，不容易一次性攝入致病劑量的球蟲卵囊，較大日齡雞因在飼養過程中受少量球蟲卵囊的重復感染而獲得免疫力，可以抵抗致病劑量球蟲卵囊的感染。散養、地面平養、網上飼養及籠養飼養模式下雞球蟲陽性率逐漸降低。高溫高濕氣候有利于球蟲卵囊的孢子化和球蟲感染，但現代養雞場集約化程度高、飼養密度大，墊料與環境中球蟲卵囊荷載量增多，導致雞群易暴發球蟲病，發病季節性不明顯，呈現常年流行。雞體感染免疫抑制或腸道病原后會加重球蟲病的發生，雞體是否感染免疫抑制性病原對于采取藥物或疫苗防控球蟲的效果具有重要影響。此外，世界各國先后提出抗生素生長促進劑退出計劃，我國也于2020年7月1日起實施藥物飼料添加劑退出計劃，隨著獸用抗菌藥使用減量化行動的實施，腸道細菌?。ㄈ珉u壞死性腸炎等）的發病率和流行率將呈上升趨勢，從而加劇因雞球蟲感染引起的腸炎等癥狀，為雞球蟲病的有效防控帶來新的挑戰。

2 雞球蟲病防治藥物開發

自1948年磺胺喹噁啉用于預防和治療雞球蟲病以來，國內外研發了50多種抗球蟲藥物，其中上市的抗球蟲藥物40余種?？骨蛳x藥物包括聚醚類離子載體抗生素、化學合成藥及天然產物藥，常見抗球蟲藥物見表1、表2［18］。

2.1 聚醚類離子載體抗生素

聚醚類抗生素（Polyether antibiotics, PEs）是一類從鏈霉菌（Streptomycesspp.）、馬杜拉放線菌（Actinomaduraspp.）等發酵產物中分離，具有離子載體性質的抗生素［19］。常見的聚醚類抗生素有莫能菌素（Monensin，MON）、鹽霉素（Salinomycin,SAL）、那拉菌素（Narasin，NAR）、馬杜霉素（Maduramicin，MAD）、山度霉素（Semduramicin，SEM）、拉沙菌素（Lasalocid，LAS）和我國成功研制的海南霉素（Hainanmycin，HAI）等。莫能菌素、鹽霉素和那拉菌素是一類單價離子載體抗生素，分別從肉地桂鏈霉菌（Streptomyces cinnamonensis）、白色鏈霉菌（S. albus）和金黃色鏈霉菌（S.aureofaciens）發酵物中提取得到［20］。馬杜霉素與山度霉素是一類單價糖苷離子載體抗生素，分別由放線菌Actinomadura yumaensis和A. roseorufa發酵而制成［21］。拉沙菌素為二價離子載體抗生素，由沙拉鏈霉菌（S. lasaliensis）發酵生成［22］。

聚醚類抗生素在化學結構上含有多個醚基和一個一元有機酸，具有促進離子通過細胞膜的能力，離子載體類抗球蟲藥物作用于雞球蟲無性繁殖和有性繁殖階段，干擾陽離子的正常轉運，破壞球蟲細胞膜內外滲透壓而發揮藥理作用［23］。該類抗球蟲藥物廣泛應用于養雞業，主要原因是：此類藥物具有廣譜的抗球蟲效果，對7種雞球蟲均有活性；雞球蟲對此類藥物的耐藥性產生較為緩慢；此類藥物不能完全抑制球蟲發育、繁殖，少量卵囊的刺激有利于雛雞產生一定保護水平的免疫力；此類藥物僅用于畜禽生產，且不用于畜禽食源性細菌病及人類疾病的治療，對人類健康不構成威脅。但是聚醚類抗生素的安全范圍小，禁與泰妙菌素、竹桃霉素、部分磺胺類藥物和抗氧化劑等并用。

2.2 化學合成類藥物

化學合成類抗球蟲藥物包括磺胺喹噁啉（Sulfaquinoxaline，SQ）、呋喃西林（Nitrofurazone，NIT）、尼卡巴嗪（Nicarbazin，NCB）、呋喃唑酮（Furazolidone，FUR）、氨丙啉（Amprolium，AMP）、氯羥吡啶（Clopidol，CLO）、丁氧喹啉（Buquinolate）、芐氧喹甲酯（Nequinate）、癸氧喹酯（Decoquinate，DEC）、氯苯胍（Robenidine，ROB）、常山酮（Halofuginone，HAL）、阿德呋啉（Aprinocid，APR）、妥 曲珠 利（Totrazuril，TOL）、 地 克 珠 利（Diclazuril，DIC）、 二 硝托胺（Zoalene，ZOA）、磺胺間二甲氧嘧啶（Sulfamethoxine，SMZ）等。氨丙啉是抗硫胺素類衍生物，可以競爭性抑制球蟲攝取硫胺，使得蟲體不能合成硫胺焦磷酸鹽，從而缺乏α-酮酸脫氫酶系的輔酶，阻礙蟲體的糖代謝，抑制球蟲的發育［24］。氨丙啉對柔嫩和堆型艾美耳球蟲作用最強，對毒害、布氏和巨型艾美耳球蟲作用較弱，常與乙氧酰胺苯甲酯聯合使用，可提高抗球蟲活性［25］?；前粪瓏f啉具有抗菌和抗球蟲活性，其基本結構與對氨基苯甲酸（para-aminobenzoic acid，PABA）相似，可競爭二氫葉酸合成酶，影響二氫葉酸形成，從而阻斷核蛋白合成，抑制球蟲生長繁殖［26］，常與乙氧酰胺苯甲酯聯用，自1948年批準上市以來，至今仍廣泛應用于球蟲病的防治。

表1 抗球蟲藥物及雞球蟲耐藥性情況［18］Table 1 Overview of anticoccidial products and the resistance of Eimeria spp.［18］

表2 抗球蟲天然產物藥物Table 2 Anticoccidial natural products

喹啉類（丁氧喹啉、癸氧喹酯、芐氧喹甲酯）以及氯羥吡啶、尼卡巴嗪、氯苯胍、妥曲珠利等藥物通過抑制球蟲線粒體呼吸作用，影響蟲體正常代謝，從而抑制球蟲的發育繁殖［27-29］。喹啉類抗球蟲藥物通過破壞蟲體線粒體的電子傳遞，影響線粒體呼吸作用；尼卡巴嗪具有較廣的抗球蟲譜，與鹽霉素有協同作用，但尼卡巴嗪存在安全范圍窄，在高溫高濕條件下容易引起雞群熱應激，還可引起褐色蛋殼顏色變淺及產蛋率和孵化率下降等缺點；妥曲珠利可以抑制呼吸鏈琥珀酸-細胞色素C還原酶、NADH氧化酶及琥珀酸氧化酶活性，抑制球蟲線粒體氧化磷酸化作用，從而影響球蟲發育［30］。地克珠利與常山酮具有廣譜抗球蟲效果，但仍不清楚其抗球蟲機理。

此外，復方抗球蟲制劑可提高效果作用效果，減緩球蟲抗藥性的產生［31］。商品化的復合制劑包括國外研制的Unistat-3（二硝苯甲酰胺+磺胺硝苯+洛克沙砷）、Amprol Plus（氨丙啉+乙氧酰胺苯甲酯）、Agribon（磺胺間二甲氧嘧啶+奧美普林）、Maxiban（那拉菌素+尼卡巴嗪）、PoultrySulfa（磺胺二甲嘧啶+磺胺甲基嘧啶+磺胺喹噁啉）等；國內研制的鹽酸氨丙啉乙氧酰胺苯甲酯預混劑、鹽酸氨丙啉乙氧酰胺苯甲酯磺胺喹噁啉預混劑、氧酰胺苯甲酯預混劑及甲基鹽霉素尼卡巴嗪預混劑等。研究表明，尼卡巴嗪+馬杜霉素，尼卡巴嗪+乙氧酰胺苯甲酯等藥物的聯合使用具有很好的抗球蟲效果［32］。因此，聯合用藥或復方制劑的應用是防止或減緩球蟲抗藥性產生的有效措施之一。

2.3 天然產物藥物

天然產物是從自然界存在的生物體內分離、提取的有機化合物，通過生化作用及光合作用形成，具有免疫調節、抗炎癥及抗氧化等活性。研究顯示，植物精油類天然產物如青蒿、百里香、茶樹、丁香等提取的精油可體外破壞球蟲卵囊［33］。商業化植物精油如香芹酚、香芹酮、異胡薄荷醇、百里香酚、丁香酚等具有一定的抗球蟲活性，通常添加于飼料作為預防性抗球蟲藥［34］。中草藥單方如青蒿、常山、白頭翁及苦參等［35］，中草藥復方制劑，如復方球蟲散、雞球康、艾球康、常青克球靈等均有良好的防治效果［36-37］。植物精油及中草藥等抗球蟲作用機理仍不清晰，主要體現在抑制球蟲發育、增強動物機體免疫功能等方面。近年來，天然產物因其得天獨厚的優勢受到抗寄生蟲藥物研究學者們的青睞，但由于對天然產物抗球蟲作用機理了解仍較少，并且缺乏有效的藥靶，使得抗球蟲新藥研究進展緩慢。因而，發現并確證有效的藥靶，并以其為基礎高通量篩選、驗證具有高效抗球蟲效果的天然產物進而研發抗球蟲藥物，成為抗球蟲天然產物新藥研究的策略之一。目前，雞球蟲藥靶研究取得一定進展，已報道的藥靶包括葡萄糖-6-磷酸異構酶（Glucose-6 -phosphate isomerase，GPI）、 周 期蛋白依賴性激酶2（Cyclin-dependent kinases related kinase 2，CRK2）、丙二酰單酰輔酶A:ACP轉?；?酶（Malonyl-CoA:acyl-carry protein transacylase，MCAT）、鈣依賴性蛋白激酶4（Calcium-dependent protein kinase 4，CDPK4）及己糖激酶（Hexokinase，HK）等［38-40］。以這些藥靶為基礎，篩選出BES062021、BES143551、BES241415、BES252034、萘醌、8-羥基喹啉、紫堇塊莖堿及芒果苷等具有較好抗球蟲活性的抑制劑，其中紫堇塊莖堿及芒果苷屬于天然產物，這些抑制劑的發現為抗球蟲新藥研發提供有潛力的先導化合物。

2.4 雞球蟲抗藥性研究

20世紀40—90年代，不斷有新的抗球蟲藥物被開發、上市，并得到廣泛應用。但同時雞球蟲也迅速產生抗藥性，全球范圍內均有雞球蟲抗藥性的研究報道，部分藥物的首次抗藥性報道見表1［18］。調查發現，不同藥物的抗藥性產生速度不同，如聚醚類離子載體抗生素、氨丙啉、尼卡巴嗪等藥物的抗藥性產生較慢；氯羥吡啶、氯苯胍、常山酮、地克珠利等藥物抗藥性產生速度適中；喹啉類（丁氧喹啉、癸氧喹酯、芐氧喹甲酯）藥物的抗藥性產生很快。自90年代，雞球蟲抗藥性問題引起國內學者的關注，孔繁瑤等［41］從我國12個省區分離15株柔嫩艾美耳球蟲，并檢測分離株對5種球蟲的敏感性，發現分離株僅對國內尚未廣泛使用的地克珠利敏感，對其他4種抗球蟲藥物均表現不同程度抗藥性；劉群［42］對山東地區雞球蟲抗藥性進行調查，發現不同蟲種對聚醚類離子載體抗生素和常山酮等都存在不同程度抗藥性，僅對地克珠利敏感；謝明權等［43］對廣東地區雞球蟲抗藥性進行分析，發現多數蟲株對聚醚類離子載體抗生素表現為強抗藥性，并存在交叉抗藥性。隨后，國內學者對我國不同地區雞球蟲抗藥性情況進行研究，進一步證實雞球蟲幾乎對所有抗球蟲藥物都能產生抗藥性，并且存在嚴重的多重抗藥和交叉抗藥。因此，不斷研制新藥以及合理應用已有藥物，延緩球蟲抗藥性的產生，延長抗球蟲藥物的使用壽命，可以提高抗球蟲藥物的治療效果。

3 雞球蟲病疫苗研制

3.1 活卵囊疫苗

雞球蟲免疫是一種帶蟲免疫，雞攝入少量球蟲活卵囊后，卵囊在體內繁殖，新產生的卵囊隨糞便排于墊料，并在環境中完成孢子化，雞再次攝入孢子化卵囊，經2～3次輕度的循環感染而刺激雞體產生免疫力。目前，投入市場應用的雞球蟲病疫苗以活卵囊疫苗為主。1951年美國批準了第一個商品化的雞球蟲病活卵囊疫苗，此后加拿大、英國、捷克、澳大利亞、西班牙、中國等陸續批準雞球蟲病活疫苗上市（表3）［44-45］。

3.1.1 強毒活卵囊疫苗 雞球蟲病強毒活卵囊疫苗是由未經任何致弱處理的強毒株研制而成。 美國研制的 CocciVac?-B、CocciVac?-D、VACM?、ADVENT?、Inovocox?， 加拿大研發的 Immucox?C1、Immucox?C2 以及新西蘭研制的Nobilis?COX-ATM為強毒活卵囊疫苗［46］。強毒活疫苗使用期間，不使用抗球蟲藥物，疫苗免疫后出現不良反應的風險較大，控制接種后雞舍墊料中疫苗蟲株經生活史循環排出的卵囊數量尤為重要。因此，有學者提出以抗藥性強毒株制備活疫苗，其中商品化疫苗Nobilis?COX-ATM和VACM?均由抗離子載體類藥物強毒蟲株組成［47］，該類疫苗在免疫過程中可以使用離子載體類抗球蟲藥治療野毒蟲株的感染，不影響雞體產生免疫力，但此類疫苗使用的是抗藥性強毒株，如在野外產生多重抗藥或交叉抗藥，雞群存在暴發球蟲病的風險，其臨床應用受到一定的局限性。

3.1.2 弱毒活卵囊疫苗 為克服強毒活卵囊疫苗的不良反應，研究人員先后使用加熱、冷凍、輻照、雞胚傳代培養、細胞培養及早熟選育等致弱方式對球蟲進行毒力減弱研究［48-52］。1989年，第一個早熟選育系雞球蟲病活疫苗Paracox?-5和Paracox?-8研制成功［53］。以雞胚致弱與早熟選育相結合，Shirley等［54］研制了 Livacox?Q、Livacox?T。隨后，早熟選育技術成為研制弱毒活卵囊疫苗的首選技術，國外先后研發了Eimeriavax?4m、Inmuner?Gel-Coc、Hipracox?Broilers等疫苗；我國于2000年批準了第一個雞球蟲病疫苗，該疫苗由中國農業科學院上海家畜寄生蟲病研究所與上海市農業科學院畜牧獸醫研究所共同研制。之后，北京農學院、齊魯動物保健品有限公司、佛山市正典生物技術有限公司、廣東省農業科學院動物衛生研究所等單位研制的雞球蟲病活卵囊疫苗均獲得國家農業農村部批準。

3.2 重組疫苗

3.2.1 DNA疫苗 DNA疫苗由編碼抗原基因的真核表達質粒組成。國內外學者在雞球蟲候選抗原的研究方面已取得一定進展，篩選、鑒定出了保護性抗原：3-1E、14-3-3、EtMIC2、EtMIC1、EnMIC2、MIC4、GX5401、p250、EalA、IMP-1、LDH、EtSAG1、EtCDPK、Gam82、Etp28、cSZ1、SAG10、HSP90和EtHSP70等［55-59］。DNA疫苗存在免疫原性不足等缺點，在免疫過程中可利用疫苗佐劑增強疫苗的免疫原性。DNA疫苗佐劑包括PRR激動劑（TLR1～TLR13）、基因趨化因子（IP-10、CCR7、CCL19、CCL21）、共刺激分子（CD80、CD86、CD40）、干擾素（IFN-α、IFN-γ）和白細胞介素（IL-1β、IL-2、IL-8、IL-15、IL-17）等［60］。研究顯示，3-1E DNA疫苗與IFN-γ或IL-1β、

IL-8、IL-15的聯合免疫可有效減少雞體卵囊排出量［61］。Zhang等［62］將pEtK2、IL-2基因亞克隆到真核表達載體pVAX1上，構建pVAX1-pEtK2-IL-2質粒，肌肉注射免疫發現可以誘導雞體產生免疫力。雞球蟲DNA疫苗研究取得一定進展，但其免疫佐劑、免疫劑量及免疫策略等仍需要進一步研究。

表3 雞球蟲病疫苗Table 3 Vaccines against avian coccidiosis

3.2.2 亞單位疫苗 亞單位疫苗包含重組蛋白或球蟲天然蛋白等保護性抗原。2002年第一個商品化的亞單位疫苗CoxAbic?獲得批準，該疫苗包含以親和層析純化的巨型艾美耳球蟲配子體天然抗原，疫苗免疫母雞后，可抑制子代雛雞產生卵囊，將雞舍的卵囊數量控制在一定水平，雛雞通過卵囊循環而進一步獲得免疫力。Xie等［63］分析了堆型、巨型、毒害和柔嫩艾美耳球蟲裂殖子的保護性抗原，發現5～12個可溶性蛋白片段和3～7膜蛋白片段。Miller等［64］利用柔嫩艾美耳球蟲子孢子抗原（GX3263）免疫雞1次，可獲得部分保護力，減輕盲腸病變。堆型艾美耳球蟲子孢子表面抗原p240/p160及裂殖子抗原p250均能較好刺激雞體T淋巴細胞免疫反應。Belli等［65］克隆、表達重組抗原gam56和gam82（CoxAbic?疫苗的主要抗原組分），免疫雞體可以產生針對堆型、巨型和毒害艾美耳球蟲的部分免疫力。但該類疫苗存在生產成本高、工業化生產難度較大等缺點。隨著現代生物技術的迅猛發展，利用生物信息學技術等設計可刺激雞體T細胞、B細胞表位的免疫原性多肽，為亞單位疫苗的研制提供新思路。

3.2.3 活載體疫苗 活載體疫苗是利用基因工程技術將編碼抗原的基因導入活載體而制成。雞球蟲病的活載體疫苗主要以細菌、病毒和球蟲為活載體。目前應用于球蟲的細菌載體包括沙門氏菌、大腸桿菌、卡介苗、谷草桿菌和乳酸桿菌等。覃宗華等［66］以減毒沙門氏菌為載體表達堆型艾美耳球蟲子孢子表面抗原cSZ1，經口免疫4日齡雛雞，免疫后2周可檢測到特異性抗體，3周時抗體水平達到高峰，隨后進行感染試驗，發現免疫組排卵囊量明顯減少。已有研究構建了重組ZJ111/pcDNA3-5401減毒鼠傷寒沙門氏菌，重組 pMV261-ADF、pMV361-ADF、pMV361-rho、pMV361-rho-IL2卡介苗，重組EtAMA1乳酸桿菌和重組3-1E芽孢桿菌等以細菌為載體的疫苗，以及重組rFPV-Rhomboid的雞痘病毒疫苗和重組Etp28的桿狀病毒疫苗［67］。隨著CRISPR/Cas9等轉基因技術在球蟲上的成功應用，使得以轉基因球蟲作為疫苗活載體成為可能，為活載體疫苗研究提供技術儲備。

4 展望

傳統的雞球蟲病防控策略主要采用“預防為主、治療為輔”的方式。自1948年磺胺喹噁啉及1951年雞球蟲病活卵囊疫苗上市以來，國內外先后有40多個抗球蟲藥物和20余種雞球蟲病活疫苗在臨床應用。自1986年瑞士開始實施“禁抗”以來，挪威、丹麥、歐盟、美國、中國和巴西等國家或地區先后實施“減抗替抗”政策，歐盟于2012年全面禁止在飼料中添加抗球蟲藥物預防雞球蟲病，限制或禁止抗球蟲藥物在飼料中添加使用已成為一大趨勢，集約化養雞場球蟲病的防控面臨嚴峻挑戰。目前，雞球蟲病活疫苗已得到較為廣泛的使用，但由于雞球蟲特殊的生物學特性，免疫接種不能完全取代抗球蟲藥物。自1990年成功研制山度霉素以來，至今無新的抗球蟲藥物面世，主要原因在于對雞球蟲藥靶研究仍較少，而雞球蟲病傳統活卵囊疫苗存在病原擴散等問題，重組疫苗僅能誘導雞體產生部分保護力無法取代傳統活卵囊疫苗。因此，未來需要聯合多組學與生物技術，進一步研究雞球蟲抗藥性機制，挖掘藥靶，闡明球蟲入侵機制及球蟲與宿主的相互作用機理，進而利用各種平臺技術篩選高效抗球蟲先導化合物和重要的保護性抗原，為抗球蟲新藥研究與疫苗研制提供理論基礎。