浸潤性膀胱癌患者血清高爾基體磷酸化蛋白3和內皮生長因子水平與臨床病理特征和術后生存率的關系研究

李 蓉，姜 新，金玉明，王敏捷，陳穎虹

(南部戰區海軍第一醫院泌尿外科，廣東 湛江 524005)

膀胱癌為高發病率惡性腫瘤[1]。男性發病率在所有惡性腫瘤中位列第4，女性則位列第7[2]。近年來，膀胱癌的發病率不斷升高，越來越受到社會各界的重視。肌層浸潤性膀胱癌(MIBC)為膀胱癌的重要類型，具有高復發、易轉移的特點[3]。目前，診斷MIBC的指標大多只能對當前腫瘤情況進行判斷，并不能有效評估膀胱癌的預后。血管內皮生長因子(VEGF)、高爾基體磷酸化蛋白3(GOLPH3)與腫瘤密切相關[4～6]，但這兩種因子的血清水平與MIBC預后的關系的報道較少。本研究對MIBC患者血清中GOLPH3、VEGF進行檢測，觀察這兩種指標水平在不同臨床病理特征的差異，并探討血清GOLPH3、VEGF水平與患者術后生存率的關系，為臨床評估MIBC的術后生存率提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料2010年4月至2016年9月我院治療的MIBC患者110例(MIBC組)，納入標準：移行細胞癌；無其他惡性腫瘤；患者知情同意；膀胱部分切除術+氨甲喋呤、長春新堿、阿霉素和順鉑方案(MVAC)及吉西他濱、順鉑(GC)化療方案。排除標準：心肺功能不全，多器官衰竭或妊娠。選擇同期健康體檢者90例為對照組，兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 檢測方法MIBC患者于術前采集空腹時的外周靜脈血5 ml，健康體檢者于體檢當日采集空腹時的外周靜脈血5 ml，靜止放置40 min，然后以1500

rpm，4 ℃，10 min的條件離心，將上層血清轉移至新的EP管中，放于-80 ℃冰箱保存。GOLPH3、VEGF以ELISA檢測。

1.3 隨訪MIBC患者出院后隨訪，每兩個月進行一次隨訪，在隨訪過程中記錄患者是否存活，隨訪時間為36個月。在隨訪過程中未出現失訪病例。

1.4 統計學方法采用SPSS 22.0軟件處理數據。計量資料比較采用t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。血清指標評估術后生存率的準確性采用ROC曲線判斷；相關性分析采用Spearman相關分析或Pearson相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組GOLPH3、VEGF水平比較MIBC組GOLPH3、VEGF水平高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 兩組GOLPH3、VEGF水平比較

2.2 不同臨床病理特征的MIBC患者GOLPH3、VEGF水平比較血清GOLPH3、VEGF水平比較，復發者高于初發者，中、高度分化者高于低度分化者，淋巴結轉移者高于淋巴結無轉移者，腫瘤數量多發者高于單發者，腫瘤直徑>3 cm者高于直徑≤3 cm者，血管淋巴浸潤者高于無血管淋巴浸潤者(P<0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理特征MIBC患者血清GOLPH3、VEGF水平比較

2.3 不同生存情況患者血清GOLPH3、VEGF的ROC曲線隨訪期間，38例死亡(死亡組)，生存者72例(生存組)，以ROC曲線分析兩組術前血清GOLPH3、VEGF水平。術后隨訪36個月，不同預后患者血VEGF、GOLPH3 ROC曲線下面積分別為0.831、0.806，預測膀胱癌患者預后的最佳臨界值為403.67 pg/ml、412.45 ng/L，VEGF預測不同生存情況患者的靈敏度、特異度分別為72.5%、75.0%，GOLPH3預測不同生存情況患者的靈敏度、特異度分別為82.5%、65.0%。見圖1、表4。

圖1 不同生存情況患者血清GOLPH3、VEGF的ROC曲線 a.VEGF ROC曲線；b.GOLPH3 ROC曲線

表4 不同生存情況患者血清GOLPH3、VEGF的ROC曲線特征

2.4 不同血清GOLPH3、VEGF水平MIBC患者生存率比較以血清VEGF>403.67 pg/ml為臨界值，將MIBC患者分成VEGF高水平組(68例)和VEGF低水平組(42例)，VEGF高水平組術后36個月的生存率低于VEGF低水平組(P<0.05)；以血清GOLPH3>412.45 ng/L為臨界值，將MIBC患者分成GOLPH3高水平組(57例)和GOLPH3低水平組(53例)，GOLPH3高水平組術后36個月生存率低于GOLPH3低水平組(P<0.05)，見表5。

表5 不同血清GOLPH3、VEGF水平MIBC患者生存率比較

2.5 GOLPH3、VEGF與不同臨床病理特征的相關性GOLPH3、VEGF與組織分化程度、初發和復發、淋巴結轉移、血管淋巴浸潤、腫瘤數量和大小呈正相關(P<0.05)，與性別、年齡和是否存在原位癌無相關性(P>0.05)。見表6。

表6 GOLPH3、VEGF與不同臨床病理特征的相關性

3 討論

膀胱癌的致病機制至今仍未闡明，MIBC易復發、預后差，因此積極探索病因，尋找有效的生物標志物評估預后情況可以促進不良預后膀胱癌患者的個體化治療[8]。VEGF為糖蛋白，能促進內皮細胞加速增殖，誘導血管新生[9]。在人腫瘤組織中發現VEGF是一種主要的轉移因子，與腫瘤淋巴管的形成密切相關，Zhang 等發現膀胱癌中VEGF高表達，且其水平與膀胱癌侵襲、轉移正相關[10，11]，故認為VEGF能誘導生成病灶淋巴管，增強其轉移能力。人外周血的VEGF主要來源于腫瘤組織，本研究中，MIBC組VEGF高于對照組，淋巴結轉移、血管淋巴浸潤患者VEGF較無淋巴結轉移和無血管淋巴浸潤患者，腫瘤數量多及直徑大的患者VEGF水平升高，說明膀胱癌腫瘤組織分泌和釋放VEGF，可促進病灶血管生成，促進其生長直徑，還可促進其浸潤、轉移。本研究中，復發患者VEGF高于初發患者，在中高度分化的患者中顯著高于低度分化的患者，該結果與鄭元振[12]的結論一致，提示VEGF可作為診斷膀胱癌并判斷其嚴重程度的輔助指標。術后隨訪36個月發現，VEGF較最佳臨界值低的患者生存率高，且VEGF水平與組織分化程度、初發和復發、淋巴結轉移、血管淋巴浸潤、腫瘤數量和大小正相關，說明血清VEGF水平可以用來輔助評估膀胱癌患者的術后生存率。

GOLPH3是一種高爾基體基質蛋白，最初是在小鼠的高爾基體中發現，主要與蛋白質加工和轉運有關[13]。近年來的研究顯示，GOLPH3在多種惡性腫瘤組織(如卵巢癌、乳腺癌和黑色素瘤等)中高表達，并且與腫瘤的生物學行為密切相關[14]。GOLPH3基因過表達可以使腫瘤細胞體積增加，縮短細胞周期，GOLPH3基因敲除以后可以減小腫瘤細胞體積，加快細胞周期，提示腫瘤細胞增殖分化與GOLPH3關系密切[15]，分析其機制可能和受體酪氨酸蛋白激酶信號通路激活有關[16]。GOLPH3與腫瘤的化療耐藥有關，Zhang等[6]使用小鼠模型發現耐藥的MIBC組織中GOLPH3表達顯著增加，GOLPH3是miR34a的靶基因，miR34a/ GOLPH3軸的表達水平與膀胱癌的預后和復發明顯相關。最新的一項臨床研究表明膀胱癌患者血清中的GOLPH3明顯升高，并且腫瘤組織中GOLPH3水平與病理分級、腫瘤TNM分期和淋巴結轉移密切相關，GOLPH3可作為膀胱癌診斷的標志物[5]。本研究中，GOLPH3與組織分化程度、初發和復發、淋巴結轉移、血管淋巴浸潤、腫瘤數量和大小正相關，提示血清GOLPH3能夠輔助診斷膀胱癌并評價其嚴重程度。術后隨訪36個月發現，不同預后患者血GOLPH3 ROC曲線下面積為0.806，預測膀胱癌患者預后的最佳臨界值為412.45 ng/L，低于臨界值水平的患者生存率明顯高于高GOLPH3血清水平患者，說明血清GOLPH3水平也可以用來輔助評估膀胱癌患者的術后生存率。

綜上所述，血清膀胱癌患者的組織分化程度、初發和復發、淋巴結轉移、血管淋巴浸潤、腫瘤數量和大小等臨床病理特征與GOLPH3、VEGF水平關系密切，通過檢測這兩種指標的血清水平有助于評估患者的病情狀況和術后生存率。本研究的樣本量較少，后續研究還應該擴大樣本量、延長隨訪時間再進行驗證。