IGF-1R/PI3K信號通路介導胰島素樣生長因子-1抗MPP+誘導多巴胺能神經元損傷的作用機制研究*

原昕，趙夢佳，張欣，袁良杰

［山東第一醫科大學（山東省醫學科學院）基礎醫學院,山東 泰安271000］

帕金森病是以中腦黑質多巴胺能神經元進行性缺失為特征的一種神經退行性疾病［1］。胰島素樣生長因子-1（insulin like growth factor-1,IGF-1）是一種分子量為70 個氨基酸的神經營養因子,在外周主要來源于肝臟［2］；在中樞神經系統,IGF-1在中腦黑質區和紋狀體區均有表達［3］。在帕金森病的發病過程中,血清中IGF-1 水平發生改變。臨床研究發現,帕金森病患者在發病早期血清中的IGF-1 水平升高［4］,隨著疾病的進展血清中含量降低［5］。表明IGF-1 的濃度變化參與了帕金森病的發生、發展。IGF-1 具有神經保護作用,離體細胞實驗研究證明,IGF-1 能夠對抗Aβ25-35 誘導的SH-SY-5Y 細胞的凋亡［6］。AYADI 等［7］研究表明,IGF-1 能夠對抗6-OHDA 誘導的多巴胺能神經元的損傷。不同濃度的IGF-1 是否能夠發揮保護多巴胺能神經元的作用,以及下游的信號分子機制是什么而有待進一步深入研究。本實驗采用多巴胺能細胞系SH-SY5Y 細胞作為研究對象,利用神經毒素1-甲基-4-苯基吡啶離子（1-methy-4-phenylpyridinium,MPP+）損傷SH-SY5Y 細胞,制備帕金森病離體細胞模型,研究不同濃度的IGF-1對SH-SY5Y 細胞的保護作用,以及胰島素樣生長因子-1 受體（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）阻斷劑JB-1 和PI3K 阻斷劑LY294002 對IGF-1 神經保護作用的阻斷效應。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

人源胰島素樣生長因子-1（human insulin like growth factor-1,hIGF-1） 購自美國Biovision （93-4119-1000）公司,溶于0.9%Nacl、MPP+（D-048）購自美國Sigma 公司,溶于0.01M PBS、JB-1 購自美國Sigma 公司,LY294002 購自上海碧云天生物技術有限公司,DMEM 培養基、青鏈霉素雙抗均購自美國GIBCO 公司,胎牛血清購自北京Cell Max公司,抗Bax 和Bcl-2 抗體購自美國Cell Signaling Technology 公司,抗β-actin 抗體購自美國博士德生物工程有限公司。……