高通量測序在孕早期自然流產中的應用

張華，楊黎明，袁路，劉敏，張富青

（鄭州市婦幼保健院 生殖遺傳科,河南 鄭州 450012）

孕早期自然流產在所有臨床妊娠中的發生率約為15%～20%［1］,大多數流產發生于妊娠前10周。引起自然流產的原因眾多,常見的包括內分泌因素,解剖因素,免疫因素,微生物感染,遺傳因素,男性因素。其中,遺傳因素尤其是胚胎染色體異常被認為占所有自然流產的50%～65%［2-4］。因此,流產絨毛染色體檢測對于明確流產原因是至關重要的。

高通量測序技術（high throughput sequencing）也稱為二代測序（next generation sequencing,NGS）技術,它是對傳統測序技術革命性的改變。可一次進行全基因組水平DNA 序列測定,具有檢測周期短,高通量,高分辨率,高敏感性和高準確性等優勢,不僅能檢出染色體非整倍體,還可檢出＞100 kb 的染色體基因組拷貝數變異（copy number variations,CNVs）。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2018 年1 月至2019 年9 月在鄭州市婦幼保健院生殖遺傳科就診并成功進行流產絨毛染色體分析的自然流產患者520 例。患者均對本研究知情同意,孕周小于12 周,既往月經規律,無孕期感染史。

1.2 研究方法

凱杰試劑盒提取絨毛組織DNA 后進行文庫構建,用NextSeq CN500 測序儀進行測序。數據分析參照DGV :http://dgv.tcag.ca/dgv/app/home,OMIM：http://omim.org/,DECIPHER:http://decipher.sanger.ac.uk/,PubMed:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed。變異分析參照HGMD ClinVar 和ACMG。

2 結果

520 例流產絨毛中,201 例染色體結果正常,319 例異常,異常率為61.3%。染色體非整倍體295 例（56.7%）,致病性染色體拷貝數變異24 例（4.6%）。異常核型中,出現頻率從高到低依次為：常染色體三體（包括嵌合型）（64.6%）,三倍體（10.7%）,X 單體（8.8%）,致病性CNVs（7.5%）。見圖1。

圖1 異常絨毛染色體核型分布頻率

2.1 常染色體三體

共檢出206 例常染色體三體,包括189 例純合三體和17 例常染色嵌合三體。……