哺乳期母豬豬瘟抗體變化及仔豬母源抗體水平和免疫效果研究

南文金，黃健強，吳靜波，胡鴻惠，鐘 瀾，陳細浩，彭國良*

（1.韶關學院 廣東省粵北生豬養殖廢棄物減量化工程技術研究中心，廣東 韶關 512005；2. 韶關市畜牧研究所，廣東 韶關 512005）

豬瘟是一種豬烈性傳染病，該病在我國屬于一類動物疫病，嚴重影響養豬業發展.豬瘟由豬瘟病毒屬豬瘟病毒感染引起，豬瘟病毒為單股正鏈RNA病毒，只感染家豬和野豬，不感染其他動物和人［1］.該病毒在世界多地有流行，歐美國家通過凈化該病使之在家豬群中發生率很低，呈偶爾散發.在歐洲國家和地區，該病主要流行在野豬群中，并對其國內家豬構成嚴重威脅［2-3］，因此，對該病的防治極為重視.早在上世紀50年代，我國科學家就研制出了豬瘟C毒株弱毒疫苗，該疫苗被公認為是效果最好的豬瘟疫苗，為世界養豬業做出了卓越貢獻，很多國家利用該疫苗消滅了豬瘟病毒.我國豬瘟主要通過免疫疫苗進行防控，該病為強制免疫疾病，高密度的疫苗接種使得豬瘟防控在我國取得了良好的效果.根據中國獸藥監察所2011—2018年的流行病學調查結果，該病在我國豬群中的陽性帶毒率從9.26%下降到0.7%［4］，已經具備凈化豬瘟的條件.雖然該病在豬群中帶毒率很低，但在養豬生產中不容忽視，馬振乾對2015—2017年采自全國各地的3 000余份發病豬樣品進行豬瘟病毒核酸進行檢測，結果不同年份發病豬樣品核酸陽性率為12.8%～16.4%［5］，鄒敏等研究也證明在發病豬樣品豬瘟病毒核酸檢出率還比較高［6］.因此，養豬生產中一旦豬瘟疫苗免疫失敗，造成的危害極大.豬瘟疫苗免疫效果直接影響到豬瘟防控成效，不同學者的對各地區豬瘟免疫效果檢測報道表明，我國豬群中種豬免疫效果相對較好，但商品豬群免疫效果不理想，部分豬場甚至出現免疫失敗，特別是保育豬群的抗體水平一直比較低，成為高風險群體［7-8］.隨著集約化養豬發展，如何通過監測抗體水平進行豬瘟免疫程序優化，使豬群整體抗體水平高，抗體離散度小顯得尤為重要.本研究以某豬場基本生產流程和現有免疫程序為基礎，通過對哺乳期母豬抗體水平變化和母源抗體對疫苗免疫檢測，對該豬場免疫效果進行科學評價，為豬場豬瘟免疫程序科學制定提供依據和參考.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品

2018年6—9月采集自廣東某規模化豬場，存欄基礎母豬1 200頭.根據試驗方案分別采集相應的母豬和仔豬血液.

1.1.2 豬瘟抗體檢測試劑盒和主要儀器

豬瘟病毒抗體檢測試劑盒購自北京愛德士元亨生物科技有限公司，酶標儀為美國Thermo公司MULTISKAN GO型號全波長酶標儀.

1.2 方法

1.2.1 母豬哺乳期豬瘟抗體變化

選擇同期分娩母豬40頭，分別在分娩當天和仔豬斷奶當天耳靜脈采血，實驗室常規方法制備血清，血清-25 ℃保存.

1.2.2 母豬分娩日抗體和仔豬28日齡母源抗體關系

選擇同期分娩13頭母豬，分娩日豬瘟抗體阻斷率在37.39%～91.37%間，25日齡斷奶，28日齡每窩仔豬隨機選擇4頭仔豬前腔靜脈采血檢測豬瘟母源抗體水平，仔豬打耳號標記.

1.2.3 母源抗體對仔豬免疫效果影響

根據1.1.2試驗檢測的28日齡窩仔豬豬瘟抗體平均阻斷率高低，選擇母源抗體水平不同的6窩仔豬，豬瘟母源抗體平均阻斷率分別為37.39%、56.58%、67.67%、73.69%、86.26%和91.25%，每頭母豬所產仔豬隨機選擇4頭（和1.1.2試驗同樣編號仔豬）.分別在仔豬35日齡、42日齡、56日齡、70日齡、84日齡和105日齡前腔靜脈采血分離血清.仔豬豬瘟疫苗免疫程序為28日齡和56日齡進行豬瘟疫苗首免和二免，免疫劑量1頭份，疫苗某公司生產的豬瘟細胞苗.

1.2.4 抗體檢測方法和數據分析

實驗室常規方法制備血清，-25℃保存血清，為減低檢測批次間誤差，將試驗采集的母豬血清和仔豬血清分為兩個批次集中檢測，所有血清檢測都用美國IDEXX公司生產的同一個試劑盒進行檢測及數據分析.

2 結果

2.1 母豬哺乳期豬瘟抗體的變化

對40頭同期分娩母豬哺乳前后豬瘟抗體水平檢測，結果如圖1所示，一個哺乳期內，豬瘟抗體平均阻斷率由68.57%下降到60.98%，平均下降幅度為12.47%，哺乳前抗體離散度為30.06%，斷奶后抗體離散度為39.44%.經數據統計分析發現，哺乳期抗體下降幅度個體間差異明顯，下降幅度在0.31%～63.75%，但出現了3頭母豬（9號、23號和26號）哺乳后抗體水平升高.從圖1可知，分娩當天母豬抗體水平越高，哺乳期抗體水平下降幅度越小，分娩當天母豬抗體阻斷率高于70%的23頭母豬中，抗體阻斷率下降幅度超過10%的占8.7%（2/23），而分娩當天母豬抗體阻斷率低于70%的17頭母豬中，有58.82%（10/17）的抗體下降幅度超過10%.

2.2 母豬分娩日抗體和28日齡仔豬母源抗體的關系

對13頭母豬所產仔豬28日齡豬瘟抗體進行檢測，結果見圖2. 28日齡窩仔豬平均母源抗體水平和母豬分娩日抗體水平呈正相關.當母豬分娩日抗體阻斷率高于85%時，28日齡窩仔豬平均抗體阻斷率大于60%，母豬抗體阻斷率在70%～85%間的，仔豬抗體阻斷率在40%～50%間，母豬抗體阻斷率低于70%，仔豬抗體阻斷率都低于40%.

圖1 母豬哺乳期豬瘟抗體的水平變化

圖2 母豬分娩日豬瘟抗體水平和28日齡窩的平均抗體水平

2.3 母源抗體水平對仔豬豬瘟疫苗免疫效果的影響

對28日齡母源抗體水平不同的6窩仔豬首免和二免后的抗體水平進行監測，結果如圖3所示.發現在28日齡首免后6窩仔豬母源抗體迅速下降，當首免日母源抗體阻斷率低于45%的，仔豬母源抗體在首免后14日，即42日齡時，豬瘟抗體水平下降到最低，56日齡二免后抗體持續上升，二免疫后14天，即仔豬70日齡，窩平均抗體阻斷率達都為陽性（阻斷率＞40%），至105日齡時，平均抗體阻斷率超過60%.28日齡母源抗體超過60%的兩窩仔豬首免后至56日齡，即首免后28天，抗體水平都呈下降趨勢，56日齡二免后抗體水平上升，但維持時間較短，70日齡后抗體水平就明顯開始下降，至105日齡，窩仔豬平均抗體阻斷率處于陽性臨界值.

圖3 母源抗體水平和免疫后抗體的水平變化

3 討論

3.1 母豬哺乳期豬瘟抗體水平的變化

在規模化豬場，母豬豬瘟疫苗免疫程序主要有兩種，一種稱為“普免”，即每年對所有經產母豬進行2～4次豬瘟疫苗免疫，另一種稱為跟胎免疫，即在母豬哺乳結束時對母豬進行豬瘟疫苗接種.本試驗選擇的豬場經產母豬采用的跟胎免疫豬瘟疫苗方式，仔豬斷奶時母豬接種2頭份豬瘟細胞苗，從圖1檢測數據可知，該豬場母豬分娩當天，即哺乳前母豬豬瘟抗體陽性率（抗體阻斷率＞40%）雖然達到90%（36/40），但抗體水平不高，平均阻斷率為68.57%，抗體不均勻，離散度為30.06%，哺乳前母豬豬瘟抗體檢測數據反應了該豬場母豬免疫沒有達到理想效果，通過追溯發現，抗體陰性母豬主要為出現返情和流產母豬，沒有正常受胎和分娩后沒有進行豬瘟疫苗補免，導致再次懷孕分娩時距離上次接種疫苗時間過長，抗體水平較低，此外，本試驗選擇的40頭分娩母豬中由6頭為頭胎母豬，這部分母豬在分娩時候豬瘟抗體水平也相對較低，這可能是導致平均抗體水平較低，抗體離散度較大主要原因.

試驗中一個哺乳期結束后數據統計表明，對于哺乳前抗體水平較高的母豬，經過哺乳后抗體下降幅度較小，絕大多數哺乳前抗體阻斷率超過70%的母豬，抗體阻斷率下降幅度不超過10%，但哺乳前抗體阻斷率低于70%的母豬，哺乳對抗體影響較大，有超過50%的哺乳前抗體阻斷率低于70% 的母豬哺乳結束后抗體下降幅度超過10%.從試驗獲得的數據可知，不論是哺乳前母豬抗體水平高還是低，哺乳后抗體下降幅度都存在個體間差異，經過對每窩仔豬數量進行統計（文中為列舉數據），這種個體間差異和母豬哺乳仔豬數量沒有明顯關系，其原因還需進一步研究.另外，在檢測的40頭母豬中，出現3頭母豬（編號為9號、23號和26號）斷奶時豬瘟抗體阻斷率上升（阻斷率分別上升9.7%，1.55%和25.4%），在排除了采血時血液嚴重溶血影響檢測結果后，分析認為該豬場可能存在豬瘟隱形感染情況，特別是在沒有免疫豬瘟疫苗情況下，抗體水平率突然大幅度升高的26號母豬.

通過研究哺乳對母豬抗體水平影響對豬場選擇適合的免疫程序具有參考意義.哺乳對母豬豬瘟抗體影響的公開研究報道較少，因條件所限，本試驗跟蹤檢測的母豬數量也有限，僅為一個豬場的數據，只是依據該試驗豬場的免疫程序和免疫劑量進行了初步研究，這種變化和母豬胎次、免疫程序、疫苗類型、免疫劑量以及不同公司商品化疫苗間的關系還需進一步系統開展研究.

3.2 母豬哺乳前豬瘟抗體水平和28日齡仔豬母豬抗體間的關系

大量研究報道證明，新生仔豬母源抗體水平在吃初乳后1～2天即達到高峰，在1周后開始下降［9］，為減少多次采血對新生仔豬造成的應急影響，所以本試驗沒有進行斷奶前仔豬母源抗體消長檢測，而是根據該試驗豬場生產流程和免疫程序，在仔豬28日齡首次免疫豬瘟疫苗時間開始進行抗體檢測跟蹤（該豬場采用的25日齡斷奶，仔豬30日齡轉群）.從圖2的檢測數據分析可知，母豬哺乳前抗體水平和28日齡仔豬母源抗體呈正相關，當母豬哺乳前抗體阻斷率高于70%時，28日齡母源抗體還為陽性，當母豬哺乳前抗體阻斷率低于70%時，28日齡仔豬母源抗體都為陰性.陳果亮在開展母豬哺乳前抗體和35日齡仔豬母源抗體水平關系時也有類似結果，當母豬抗體阻斷率高于70%時，35日齡仔豬母源抗體還為陽性［9］，但本試驗中，仔豬采用28日齡首免豬瘟疫苗，沒有檢測35日齡仔豬母源抗體.試驗中仔豬個體間數據分析表明，即使是同一窩仔豬28日齡母源抗體個體之間也存在差異.

仔豬在首免豬瘟疫苗前主要依靠母源抗體提供保護，但仔豬母源抗體水平會影響疫苗免疫效果［10］，首免日齡應選擇的母源抗體下降到陽性臨界值，即阻斷率40%～50%時進行豬瘟疫苗首免［11］.通過試驗選擇豬場采用的豬瘟28日齡首次免疫豬瘟疫苗時母源抗體檢測結果可知，母豬哺乳前抗體對仔豬28日齡母源影響明顯，這和陳果量報道的母豬哺乳前抗體水平和35日齡仔豬母源抗體影響結果相一致［9］，因此，豬場要取得理想豬瘟抗體免疫效果，首先要對母豬豬瘟免疫程序進行優化，使得母豬抗體陽性率高，均勻性好，離散率低，才能有利于仔豬免疫程序的設計和提高免疫效果.

3.3 母源抗體水平對仔豬免疫效果的影響

本研究中采用該豬場現有商品豬群豬瘟免疫程序，即28日齡和56日齡進行豬瘟疫苗首免和二免，免疫劑量為1頭份傳代細胞苗，選擇的6窩仔豬28日齡首次免疫豬瘟疫苗當天母源抗體處于不同水平，其中，抗體阻斷率低于30%（陰性）仔豬1窩，抗體阻斷率30%～40%仔豬2窩，抗體阻斷率40%～50%（陽性，低抗體）仔豬1窩，抗體阻斷率大于60%和70%各仔豬各1窩.從圖3抗體變化圖可知，不論28日齡母源抗體處于陽性還是陰性，免疫豬瘟疫苗后，在首免后7天和14天母源抗體都迅速下降，從首免后14天，即仔豬42日齡后，母源抗體低于50%的4窩仔豬豬瘟抗體水平出現上升，到56日齡二免時抗體阻斷率還沒有達到陽性值水平，二免后抗體水平迅速上升，二免后2周，仔豬70日齡豬瘟抗體阻斷率都達到陽性值，且抗體水平持續上升，至105日齡試驗結束，抗體阻斷率都超過60%，部分超過70%.而母源抗體平均阻斷率超過60%的兩窩仔豬，首免后母源抗體迅速下降，至56日齡二面時抗體阻斷率低于30%，二免后抗體水平迅速上升，二免后2周，抗體阻斷率在50%左右，但抗體維持時間較短，至84日齡已經開始下降，105日齡時抗體阻斷率下降到陽性臨界值附近.

研究認為，豬瘟疫苗接種后中和抗體效價＞32時，對豬瘟病毒攻擊具有良好的保護效果［12］，而病毒中和試驗操作復雜，試驗要求高，并不適合臨床中大規模檢測評估. IDEXX 公司的豬瘟病毒抗體檢測試劑盒檢測的豬瘟病毒E2蛋白抗體水平和中和抗體具有良好的相關性，當中和抗體效價為1∶32時相當于該試劑盒阻斷率為50%［9］，所以，在養豬生產中，抗體阻斷率高于50%被用來評估豬場免疫合格與否臨界值.從該豬場檢測數據看，該豬場存在的主要風險是母豬豬瘟抗體水平離散度高，導致仔豬豬瘟疫苗首免時母源抗體水平高低不均勻.

本文研究結果也再次證明，規模化養豬豬場要想把豬瘟發生風險降低，必須根據母源抗體消長確定合理的首免疫時間，而要達到母源抗體消長較為一致，首先要做好母豬群的科學免疫，使母豬群豬瘟抗體不但合格率達到較高水平，抗體均勻度也要較為一致，才有利于商品豬群的科學免疫.