茶薪菇多糖對運動性肌肉疲勞功能恢復的影響*

劉其龍

（百色學院體育學院，廣西 百色 533000）

茶薪菇（Agrocybe aegerita）又名楊樹菇或茶樹菇，民間將之視為“神菇”，屬于新型野生食用菌，產于江西、福建兩省。其外觀誘人，味道脆嫩、鮮美，內含多種營養(yǎng)成分，蛋白質含量達19.53%，18種氨基酸中賴氨酸含量1.75%及含多種礦物質[1]。茶薪菇不僅可作為美食，而且其藥用價值也受到人們的廣泛認可。

據(jù)相關研究顯示[2]，茶薪菇可以增強記憶力、提高人體免疫力、降低體內膽固醇水平、延緩衰老、防癌抗癌，同時還具有祛濕、健脾、止瀉以及利尿等功效[3]。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)茶薪菇多糖還可以緩解運動性肌肉疲勞[4]。為證實這一研究成果，選擇連續(xù)脈沖式電流對中華大蟾蜍離體排腸肌進行直接刺激建立疲勞模型，以期探討茶薪菇多糖在緩解運動性肌肉疲勞方面的作用。

1 材料準備及試驗方法

1.1 茶薪菇子實體多糖提取

將自然風干后的茶薪菇子實體放入60℃烘箱內烘干，后用粉碎機粉碎成粉末狀過篩，添加12倍粉末重量的蒸餾水與其充分混勻，90℃恒溫水浴4 h；水浴后于于轉速為 8 000 r·min-1～30 000 r·min-1的離心機中離心2 h，過濾下層殘渣保存?zhèn)溆茫锨逡杭訜釢饪s為原體積1/4，后在濃縮液中加入4倍體積無水乙醇，沉淀24 h后抽濾混合液，取固體沉淀物于培養(yǎng)皿內，置于-75℃低溫冰箱中30 min，后于冷凍干燥機中冷凍干燥至粉末狀后即為茶薪菇水溶性粗多糖[5]。

茶薪菇子實體多糖得率（W，%）計算公式為：

式中：W為多糖得率（%）；m為多糖含量（g）；M為茶薪菇子實體干重（g）。

多糖含量的測定根據(jù)文獻[6]制作蒽酮標準曲線來進行。茶薪菇子實體多糖得率為7.13%，多糖含量為9.61%（以純糖含量計算）。試驗前需通過任氏液分別配制3種不同茶薪菇多糖溶液，濃度分別為0.01 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1以及 0.10 mg·mL-1。

1.2 分組方法及試驗儀器

試驗隨機分為3組，即0.10 mg·mL-1的高濃度組、0.05 mg·mL-1的中濃度組以及 0.01 mg·mL-1的低濃度組。每組預備重量為60 g～90 g的中華大蟾蜍10只，來自吉林永發(fā)蟾蜍養(yǎng)殖場，雌雄兼用，每只蟾蜍1個排腸肌標本為對照組，給予任氏液試劑；另1個排腸肌為試驗組。

試驗儀器為二道生理記錄儀，成都儀器廠LMS-2B型；一型雙道電子刺激器，安微蚌埠實用技術研究所；肌肉張力換能器，高碑店市新航機電設備有限公司；上皿電子天平，上海精科天平FA2004.Ma×200 g。

1.3 試驗方法

1.3.1 標本準備

蟾蜍雙毀髓后對排腸肌進行分離，后將坐骨神經(jīng)去除，放置在任氏液內浸泡10 min以待備用。

1.3.2 試驗過程

將蟾蜍1個排腸肌標本放置于25 mL任氏液肌槽中浸泡20 min～25 min，另一個排腸肌標本放置于25 mL茶薪菇多糖肌槽中浸泡同樣時間；連接肌肉與坐骨神經(jīng)端，通過細線將其固定于肌槽上，經(jīng)由細線讓肌肉另一端與肌肉張力換能器連接，對肌肉進行調節(jié)，讓其保持恒定的張力，并以基線描記。通過銀電極對肌肉表面進行輕觸并給予頻率為1 Hz、波寬為0.3 ms以及直流電20 V的連續(xù)方波刺激，同時于二道生理記錄儀上對肌肉收縮曲線進行描記。當收縮幅度分別為最大收縮幅度的90%、50%、10%時做好相應的時間記錄。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)的處理，使用（均數(shù)±標準差）表示，采用t檢驗，差異顯著水平為 P＜0.05。

2 結果

2.1 茶薪菇多糖對蟾蜍收縮幅度的影響

茶薪菇多糖對蟾蜍收縮幅度下降到最大收縮幅度10%時時間的影響如表1所示。

表1 茶薪菇多糖對蟾蜍收縮幅度下降到最大收縮幅度10%時的時間影響Tab.1 Time effect of Agrocybe aegerita polysaccharide on the reduction of contraction amplitude to the maximum contraction amplitude of 10%

由表1可知，不管是低濃度組、中濃度組還是高濃度組的茶薪菇多糖均對離體蟾蜍排腸肌收縮幅度下降到最大收縮幅度10%的時間有一定的延長作用，其中高濃度組延長效果非常顯著（P＜0.01），而另外2個濃度組延長效果較為顯著（P＜0.05）。茶薪菇多糖對收縮幅度下降到最大收縮幅度50%時時間的影響見表2。

由表2可知，不管是高濃度組、中濃度組的茶薪菇多糖，均對離體蟾蜍排腸肌收縮幅度下降到最大收縮幅度50%的時間有一定的延長作用，兩者相比差異顯著（P＜0.01）。茶薪菇多糖對蟾蜍收縮幅度下降到最大收縮幅度90%時的時間影響，見表3。

表2 茶薪菇多糖對蟾蜍收縮幅度下降到最大收縮幅度50%時的時間的影響Tab.2 Effect of Agrocybe aegerita polysaccharide on the time when the contraction amplitude decreases to 50% of the maximum

表3 茶薪菇多糖對蟾蜍收縮幅度下降到最大收縮幅度90%時的時間影響Tab.3 Time effect of Agrocybe aegerita polysaccharide on the reduction of contraction range to 90% of the maximum

由表3可以看出，不管是低濃度組、中濃度組還是高濃度組的茶薪菇多糖，均對離體蟾蜍排腸肌收縮幅度下降到最大收縮幅度90%的時間有一定的延長作用，其中高濃度、中濃度組和對照組相比差異顯著（P＜0.05）。

3 討論與結論

由于部分試驗過程不能進行人體試驗，只能通過動物去研究生命的起源及遺傳的奧秘，以攻克疾病的堡壘，探索其發(fā)生的原因以及衰老機理。因此，試驗動物學的最終目的是借助對動物生命的研究，進而發(fā)現(xiàn)人類的奧秘，戰(zhàn)勝疾病，延緩衰老，延長壽命。通過蟾蜍試驗開展了茶薪菇多糖對運動性肌肉疲勞功能恢復的研究，希望將此研究結果應用于人體抗運動疲勞作用中。

機體在運動過程中肌糖原無氧酵解生成乳酸，如果乳酸量過多且蓄積在血液以及肌肉中，會使pH降低，進而削弱肌鈣蛋白以及Ca2+之間的結合能力，降低肌動蛋白反應量，減弱肌肉收縮力[5]。與此同時，pH的降低還會抑制磷酸果糖激酶活性，進而阻止無氧供給能量途徑，減少肌內收縮能量來源，進而引起疲勞。據(jù)相關研究顯示，云芝多糖可以顯著減少電刺激離體排腸肌疲勞模型中的肌乳酸量，并由此實現(xiàn)肌細胞內環(huán)境的改善，進而達到抗疲勞作用[6]。

自由基損傷是導致肌肉疲勞的關鍵性原因，機體運動會增強骨骼肌組織脂質過氧化反應，進而生成大量自由基。自由基可損傷生物膜，如線粒體或肌纖維膜等，破壞其完整性，進而導致系列細胞代謝紊亂，損傷大量細胞，使其出現(xiàn)病理變化，削弱肌肉正常功能，最終引起疲勞[7]。本研究中對蟾蜍離體排腸肌進行持續(xù)電刺激后，會使其劇烈收縮，誘發(fā)活性氧產生，進而造成肌肉疲勞；但抗氧化劑能極大的改善肌肉疲勞，目前已發(fā)現(xiàn)不少食用真菌多糖可作為抗氧化劑使用，且效果顯著。試驗結果顯示，茶薪菇多糖在高濃度、中濃度及低濃度時，對電刺激環(huán)境下離體蟾蛛排腸肌標本出現(xiàn)的收縮疲勞均有顯著的改善作用，這意味著其可能是通過抗氧化損傷而改善肌肉疲勞。

內環(huán)境紊亂通常包括肌肉組織脫水和pH降低2個方面，這兩方面紊亂會引起滲透壓和電解質濃度發(fā)生變化，最終引起疲勞[8]。據(jù)相關文獻報道可知，枸杞多糖在濃度較高時（6.4 mg·mL-1～25.6 mg·mL-1）時，在改善蟾蜍離體排腸肌疲勞方面具有顯著的效果[9]。其原因可能是試驗過程中的多糖改變了培養(yǎng)液的滲透壓，進而造成骨骼肌組織脫水，使得細胞外液內各離子濃度變化，肌細胞內環(huán)境失去了平衡和穩(wěn)態(tài)；或是粗多糖內其他成分對肌細胞功能產生了影響，進而改善了肌肉疲勞[10]。試驗中3種不同濃度的茶薪菇多糖均比文獻報道的其他活性多糖的濃度低，因此從很大程度上降低了各種不良影響產生，充分體現(xiàn)了其抗疲勞效果[10]。由此可以看出，茶薪菇多糖在濃度分別為 0.01 mg·mL-1、0.05 mg·mL-1以及 0.10 mg·mL-1時具有顯著的改善運動性肌肉疲勞的效果。因此可知，茶薪菇多糖對運動性肌肉疲勞功能的恢復具有積極影響，值得在臨床上大力推廣研究。