雞油菌多糖對小鼠有氧性運動疲勞恢復作用*

李苗苗

（安陽學院，河南 安陽 455000）

雞油菌（Cantharellus cibarius）屬于雞油菌目（Cantharellales），也稱杏黃菌或者黃絲菌[1]，其肉質呈杏黃色或枇杷黃，味微甜，有杏仁香氣[2]。雞油菌中含有豐富的胡蘿卜素和VA、VC，以及鈣、鐵、磷等礦物質類元素。屬性較平和、味甘，有明目清肝的功效，還有助于腸胃吸收并且利肺，甚至還能美容養顏抗衰老[2]。雞油菌多糖屬于天然活性產物，受到很多科研人員的青睞。有研究表明該菌有抗氧化、抗衰老和增強免疫力的作用，還能抗病毒和防輻射并有降血糖的功效[3]。

采用熱水浸泡法提取雞油菌多糖，研究其對超氧自由基負離子和羥基自由基的清除作用，可為醫藥和食品領域中雞油菌的應用提供理論依據。

1 試驗材料和方法

1.1 雞油菌多糖提取

1.1.1 提取雞油菌多糖的流程工藝

1）試驗材料

新鮮野生雞油菌于8月采自云南楚雄南華縣（N24°58′28.88″，E100°48′15.27″）。

2）多糖制備

在雞油菌的粉末中加入一定比例的蒸餾水，混合攪拌均勻；按預設的溫度、時間、pH、液料比進行提取；在4 000 r·min-1，10 min的條件下離心得到上清液；測定樣品的多糖；濃縮處理；醇沉；測量粗多糖得率。

1.1.2 熱水浸提法

浸提時間、溫度、pH、液料比，是熱水浸提法提取多糖時的主要影響因素。對這四類因素試驗，設置浸提時間分別為0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h；浸提溫度分別為 40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃；液料比分別為 10 mL·g-1、15 mL·g-1、20 mL·g-1、25 mL·g-1、30 mL·g-1、35 mL·g-1；pH 分別為4、5、6、7、8、9。研究在這些條件下，雞油菌多糖得率，得到最適合的提取條件。

分別將200 g烘干的雞油菌子實體用粉碎機粉碎至細粉末狀。將粉碎的菌粉末放入2 000 mL的燒杯中，加入1 500 mL蒸餾水攪拌，浸泡過夜，在95℃的恒溫水浴鍋內恒溫水浴6 h。收集上清液，用10 000 r·min-1室溫離心20 min。將沉淀加蒸餾水再進行2次恒溫浸提。將3次離心后的上清液收集，得到雞油菌多糖的粗提液，低溫保存備用。

1.1.3 真空濃縮

將3次離心后的多糖的粗提液用旋轉蒸發儀進行濃縮。將上清液添加到旋轉蒸發瓶內，溫度調至65℃，轉數調至6 000 r·min-1后，打開冷凝裝置，開啟真空泵抽至真空后加熱進行濃縮。濃縮直至液體呈濃稠狀即可停止濃縮，用燒杯收集待用。

1.1.4 醇沉除蛋白質

采用醇沉法，將無水乙醇加入盛放濃縮液的燒杯中，邊加邊用玻璃棒攪拌，加至無水乙醇與粗糖濃縮液體積比為4∶1為宜。靜置24 h，收集沉淀，烘干，然后用蒸餾水溶解沉淀，蛋白質在經無水乙醇處理，再烘干后，己變性不溶于水，多糖成分會繼續在水中溶解，將混合沉淀充分溶解后，10 000 r·min-1離心20 min，棄不溶物，收集溶液再次烘干，獲得雞油菌粗多糖的粗多糖。

1.1.5 分離純化雞油菌多糖

將雞油菌多糖的提取液濃縮至料液比1∶4，再加入4倍體積的濃度為95%的乙醇，沉淀12 h后進行干燥處理得到粗多糖。Sevag法對粗多糖進行脫蛋白處理，用打孔來吸附樹脂使其脫色，然后通過DEAF-52離子交換柱做分離處理，得到CP1和CP2峰。把主峰CP2通過Sephadex G-100柱做純化，再經過收集、干燥，得到雞油菌多糖[4]。

1.2 有氧性運動疲勞恢復試驗

1.2.1 試驗動物

體重為130 g～150 g，SPF級別的Wistar雄性小白鼠，來自中國農業大學，合格證編號SCXK-(京)2016-0011。

1.2.2 試驗儀器設備和試驗試劑

普通、高脂2種飼料，美國ReserachDiets公司；載脂蛋白（ApoAl）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）、載脂蛋白-B（ApoB）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），甘油三酯（TG），總膽固醇（TC）試劑盒，上海鈺博生物科技有限公司；雞油菌多糖CCP，購自鹽城市芝慶堂生物科技有限公司；Anthos 2010型酶標儀，安圖斯（貝思）酶標儀公司；BW-TDM 709型動物跑臺，安徽正華生物儀器設備有限公司；UV-2350型紫外-可見分光光度計，尤尼柯（上海）儀器有限公司。

1.2.3 訓練運動的方法

根據Wistar雄性小白鼠在運動時候的狀態，選出與之運動方式符合的跑臺，使其斜度達5°，使小白鼠在運動時的速度達到18 m·min-1，每日1次，每次50 min，堅持運動30 d。

1.2.4 對動物做分組處理

隨機選出50只小白鼠，平均分成5組。分別是A組（空白對照組）、B組（高脂模型）、C組（耐力運動組）、D組（雞油菌多糖組）、E組（耐力運動+雞油菌多糖組），做為期30 d的試驗[5]。對5組小白鼠分別處理，A組用正常飼料喂養；B組用高脂飼料喂養；C組、E組每天做50 min的跑臺運動，維持30 d；D組、E組每一天都按照60 mg·kg-1的量注射雞油菌多糖；對B組、C組每一天都按照60 mg·kg-1的量對其注射以生理鹽水。最后1次注射完畢和結束運動之后，做12 h的禁食處理，再把小白鼠麻醉，從其腹部的主動脈里抽血，對血清分離，測定出其LDL-C和HDL-C，ApoB和ApoAl，SOD、MDA和GSH-Px以及TC和TG含量。

2 試驗結果

2.1 對TC、TG、HDL-C及LDL-C水平的影響

高脂模型小鼠在雞油菌多糖結合耐力運動對TC、TG、HDL-C及LDL-C水平的作用，見表1。

由表1可知，雞油菌多糖組結合耐力運動綜合影響下表現較好，明顯地降低TC、TG及LDL-C水平，明顯提高HDL-C水平，高脂血脂在注射雞油菌多糖組和耐力運動的影響下顯著降低。

2.2 對ApoAl和ApoB含量的影響

高脂模型小鼠在雞油菌多糖結合耐力運動下ApoAl和ApoB含量的作用，見表2。

表1 雞油菌多糖結合耐力運動對高血脂小鼠TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平影響Tab.1 Effects of Cantharellus cibarius polysaccharide combined with endurance exercise on the levels of TG,TC,HDL-C and LDL-C in hyperlipidemia mice

表2 雞油菌多糖結合耐力運動對高血脂小鼠ApoA1、ApoB含量的影響Tab.2 Effects of Cantharellus cibarius polysaccharide combined with endurance exercise on the content of ApoA1 and ApoB in hyperlipidemia mice

由表2可知，相較于高脂模型組，雞油菌多糖組ApoB含量，降低ApoAl含量；相較于空白對照組，顯然，高脂模型組的ApoAl含量減小，ApoB含量增加。由表1看，其效果在雞油菌多糖組結合耐力運動綜合影響下明顯提升，同時對ApoAl和ApoB含量影響很大，降低ApoAl含量，提升ApoB含量。

2.3 對SOD、MDA含量的影響

高脂模型小鼠在雞油菌多糖結合耐力運動下SOD及MDA含量的作用，見表3。

由表3可知，高脂模型組的MDA含量高于對照組，與正常對照組相比，B組、C組、D組、E組小鼠的肝臟SOD活性和GSH-Px活性均顯著低于正常組的值，而其肝勻漿的MDA含量卻顯著高于正常組的值（P＜0.05）。雞油菌多糖可顯著提高小鼠肝SOD活性和GSH-Px活性（P＜0.05），降低小鼠肝勻漿MDA含量，說明雞油菌多糖在小鼠體內發揮了顯著的抗氧化作用。相較于高脂模型組，雞油菌多糖組較高脂模型組SOD活力上升，耐力運動組較高脂模型組SOD活力上升，MDA含量顯著下降，說明高脂血癥小鼠抗氧化能力在注射雞油多糖和耐力運動組的作用下呈積極效果。

表3 雞油菌多糖結合耐力運動對高血脂小鼠SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影響Tab.3 Effects of Cantharellus cibarius polysaccharides combined with endurance exercise on SOD,GSH-PX activity and MDA content in hyperlipidemia mice

3 討論與結論

通過測量小鼠機體內的甘油三醇、總膽固醇來判斷其內部血脂的高低。由TG和TC的含量推斷小鼠血脂含量高，會對小鼠的機體運動造成不利，導致多種疾病發生。TG和TC的相對含量超標越多，高脂血癥就會越嚴重。研究分析發現，患高脂血癥的幾率和HDL-C成正相關的關系，研究結果與預期的試驗設計是相同的[5]。在動脈粥樣硬化逐漸形成和慢慢發展的過程中，LDL-C通過破壞收縮血管和舒張血管物質的平衡來促進血栓形成；而LDL-C的氧化修飾可以被HDL-C抑制，使得動脈粥樣硬化的進展被延緩[6]。因此通過分析HDL-C和LDL-C的濃度，找出其與耐力運動之間的相關性。

試驗結果說明，耐力運動結合雞油菌多糖組有相對比較明顯的正向效果，使HDL-C水平明顯提高，LDL-C、TC、TG的水平明顯地降低。所以，將耐力運動結合雞油菌多糖，可以明顯降低高脂血癥血脂。

HDL-C的載脂蛋白是ApoAl，脂質類成分在ApoAl的協助下被轉運，以及消除類脂、膽固醇等有關的一些物質[7]。LDL-C的載脂蛋白是ApoB，膽固醇類物質在ApoB的協助下發生醇化反應[8]。試驗結果表明，耐力運動結合雞油菌多糖，提高了ApoB含量，降低了ApoAl含量。SOD對機體有著重要的作用，SOD具有抗氧化活性和抗衰老作用，基體內的自由基可以被SOD清理。脂質過氧化的最終產物是MDA，是反映機體脂質過氧化水平的靈敏指標[9]。高脂血癥在機體作用的最終產物是MDA，高脂血癥的病情嚴重與否可以通過MDA含量的大小來檢測，MDA還能阻止細胞內外物質的流通和細胞膜的通透性[8-10]。GSH具有抗氧化和防衰老作用，是一種機體內自由基清除劑[10]。

綜上所述，耐力運動結合雞油菌多糖組的效果最顯著，能夠提高SOD活力和GSH活力，降低MDA。所以，通過耐力運動和注射雞油菌多糖，提高機體抗氧化水平的效果最好。