布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗的影響因素及注意事項

劉坤洋

摘要：本文對布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗中的影響因素及應注意的事項進行了較全面的分析和總結，以提高試驗的準確性，為本病的進一步確診和疫情分析提供科學依據。

關鍵詞：布魯氏菌病;虎紅平板凝集試驗;影響因素;注意事項

目前，布魯氏菌抗體檢測仍是我國布病診斷最常用、最主要的檢測方法。其中虎紅平板凝集試驗（RBPT）具有試驗試劑成本低廉、操作簡便、快速、檢出率高等優勢，被廣泛應用于布病的大規模篩查，同時由于本方法不需要特殊的試驗設備，更適于基層實驗室和現場試驗。現將RBPT中的影響檢測結果的因素及應注意的問題進行簡要分析。

1? ?RBPT的影響因素

1.1 RBPT抗原

RBPT抗原的質量是影響布病血清學試驗結果準確性的關鍵性因素之一，不同廠家的抗原對同一批血清樣本的檢測結果存在不同程度的差異，如果RBPT的假陽性率過高，不僅造成工作量加大，也會造成不必要的經濟損失。

1.2 血清

血清質量也是影響布病血清學試驗結果準確性的重要因素之一，而采集的時間與分離方式直接影響血清的質量。用于RBPT的血清最好是新鮮、清亮透明、無溶血、防止細菌污染，并且避免反復凍融。纖維蛋白原能與虎紅抗原產生非特異性凝集反應，而且纖維蛋白原含量越高凝集反應發生的越快、越強。因此，如果待檢血清中含有纖維蛋白原也會出現RBPT假陽性結果，嚴重影響檢測結果的準確性。

1.3 溫度

試驗時，RBPT抗原與被檢樣品的溫度、環境溫度對試驗結果的準確性也有很大影響。RBPT用的抗原需要恢復至室溫（22±4℃），并且使用前要充分混合均勻。血清與溫度和時間成反比關系，放置血清的時間越短，溫度越低，假陽性率越高。由此可見，在一定溫度范圍內，溫度越高，血清學反應進行的越快。本試驗要求在室溫下進行，因此，在試驗前要注意觀察環境溫度是否適合進行本試驗。

1.4 藥物

血清中的藥物濃度也會干擾檢測結果的準確性，在經過治療后或治療期間血清凝集不明顯。因此，在血液樣品采集前除了要查明動物的免疫背景，還要查清動物的患病及治療情況，以免出現誤診、漏診現象。

1.5? 試驗操作

RBPT雖然操作簡便，但在試驗過程中操作是否規范、抗原及血清加入的量是否準確并混勻、結果判定的時間是否準確等因素也會影響試驗結果的準確性。

2? 注意事項

2.1? 對照的設立

每次試驗時必須設立標準陰性、陽性血清對照，用以判斷試驗是否成立。同時在試驗前應使用弱陽性對照血清確定試驗條件的敏感性。

2.2? 試劑的保存及使用

RBPT抗原應用OIE標準血清校準過的血清進行最后標化，于4℃暗處保存，避免凍結和污染。試驗時使用的抗原應與用0.5%石碳酸生理鹽水1/45稀釋的OIE標準陽性血清出現清晰的陽性反應，而不與1/55稀釋的血清反應。為了避免RBPT抗原被污染，降低溫度變化對抗原靈敏度的影響，可以每次試驗前只取出足夠本次試驗用的抗原量。

2.3? 血清

采集的血液樣本在分離血清之前，避免長時間晃動以及與冰袋接觸，以免發生溶血。為了分離到合格的血清樣本，最好在早晨喂料前或停食后6小時進行采血，將裝有血液的注射器或采血管擺成斜面，以促進血清更好的析出。除特殊要求外，用于血清學試驗時采集血液樣本時不要加抗凝劑，以免影響對檢測結果做出正確的判定。血清樣品在使用前一定要上下顛倒混勻，對于冰凍保存的血清樣品應充分融化后再進行試驗。

2.4? 試驗操作

雖然RBPT操作易于掌握，結果判定直觀，但在試驗過程中所用抗原和血清量都很少，試驗時加入的量一定要準確。抗原與血清混合均勻后室溫輕微搖晃4分鐘后立即判定結果，若抗原抗體反應超過4分鐘后也會產生假陽性結果。

3? 討論

RBPT作為快速、準確篩查布魯氏菌病特異性抗體的簡便方法，不僅反應敏感穩定，同時由于抗原的pH為3.65±0.05，可抑制引起非特異性反應的IgM、增強特異性IgG的活性，也具有較好的特異性。但在試驗操作過程中要嚴格按照標準的操作規程進行，注意影響試驗的各種因素，降低各種因素對試驗結果準確性的影響。