湛江駁骨消在骨折模型鼠骨折愈合過程中的作用研究

吳東明 李木英 陳桂鵬 楊苗健 黃濛偲 董 遼

廣東省湛江市第二中醫醫院骨傷三科，廣東湛江 524013

骨折是臨床常見外傷，如何促進骨折愈合，是骨傷科的重要研究方向。骨折的愈合是重新獲得骨結構的強度，再現胚胎原始骨發育方式，最終恢復原有的骨結構和性能。骨折經歷血腫機化期，原始骨痂期，骨痂改造期，中醫將骨折愈合過程分為瘀袪、新生、骨合三個階段。中醫在不同時期辨證治療方案不同，早期以活血化瘀為主，中期以續筋接骨為主，后期以強壯筋骨為主[1-2]。湛江駁骨消是本土道地藥材，該藥在緩解骨折局部腫脹及疼痛，促進骨折愈合等方面具有較好的效果[3]，但目前缺少基礎及臨床研究。本研究探討其在骨折模型鼠骨折愈合過程中的作用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 動物

SPF級大鼠80只，3個月齡，重量（350±25）g。隨機分為4組，每組20只，分別為駁骨消內服組、駁骨消外敷組、接骨七厘片內服組、對照組。研究大鼠由廣東醫科大學實驗動物中心提供；大鼠品系：SD大鼠。

1.2 骨折造模及給藥方式

腹腔麻醉，大鼠仰臥，左下肢髕骨內緣1cm長縱切口，逐層切開，暴露股骨髁間凹，插入注射針沿髓腔擴髓值股骨粗隆間。逆行插入克氏針至股骨大粗隆外，逐層縫合切口。大鼠仰臥，左側脛骨外展內旋為固定于造模支架的鐵砧凹槽上，用砝碼自25～30cm處自由落體撞擊，建立大鼠骨折模型。

駁骨消內服組：正常飼養，駁骨消（湛江市寶滿姨草藥店提供新鮮草藥）水煎服，每次0.2g，每日2次。駁骨消外敷組：正常飼養，250g駁骨消粉劑溶于500mL 75%酒精，外敷患處，每只每次外敷2～3g，每日2次。接骨七厘片（湖南金沙藥業有限責任公司，國藥準字 Z20003140，規格：0.30×60s）。內服組：正常飼養，接骨七厘片1片，碾碎，溶于水，灌服，每日2次。對照組僅給予正常飼養。

1.3 檢測指標

分別于第1、2、4、6周每周每組各處死5只大鼠，處死前行血清學分析，處死后，觀察左側脛骨骨折愈合情況。血清學檢測指標包括鈣（偶氮胂Ⅲ法）、磷濃度（磷鉬酸紫外法），血清總堿性磷酸酶（sTAP）（速率法）、血清骨鈣素（OC）（ELISA測定法）。試劑盒均有中山標佳生物科技有限公司提供。

拍攝X線片，觀察骨痂組織形成和骨折愈合進程。參考柴本甫等[4]骨折愈合評分方法，根據骨折斷端邊緣變化、骨痂量、骨痂密度、骨痂邊緣情況評1～4分，計算總得分?？偡?～16分。

1.4 統計學方法

應用SPSS20.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，計量資料以（）表示，多組比較采用F檢驗，組內兩個時間點比較以及組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 治療后不同時間點血清骨鈣素水平比較

在治療后第1周、第2周、第4周及第6周，駁骨消內服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內服組血清骨鈣素水平均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 治療后不同時間點各組血清總堿性磷酸酶比較

在治療后第1周、第2周、第4周及第6周，駁骨消內服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內服組血清總堿性磷酸酶水平均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1 治療后不同時間點血清骨鈣素水平比較

表1 治療后不同時間點血清骨鈣素水平比較

注：（1）駁骨消內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05，與第4周比較，dP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05，與第4周比較，dP＜0.05；（3）接骨七厘片內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05,與第4周比較，dP＜0.05；（4）第1周、第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內服組 12.9±0.6c 15.1±1.1ac 18.8±1.2abc 13.1±1.0bdc 37.352 ＜0.05駁骨消外敷組 12.8±0.8c 15.0±1.0ac 18.6±1.3abc 13.0±1.1bdc 31.880 ＜0.05接骨七厘片內服組 12.6±0.7c 14.6±0.9ac 18.4±1.5abc 12.8±1.0bc 31.766 ＜0.05對照組 9.5±0.6 9.8±0.7 10.3±0.7 10.1±0.8 1.237 ＞0.05 F 29.009 37.317 58.771 10.753 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 治療后不同時間點血清鈣水平比較

在治療后第2周、第4周，駁骨消內服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內服組血清鈣水平均顯著低于對照組，第6周顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.4 治療后不同時間點血清磷水平比較

在治療后第2周、4周及6周，駁骨消內服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內服組血清磷水平均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

2.5 治療后不同時間點X線片檢查結果比較

術后第1周、第2周、第4周以及第6周駁骨消內服組、駁骨消外敷組以及接骨七厘片內服X線片檢查骨折愈合評分均顯著高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

3 討論

骨折愈合經過三個時期，骨折后血腫逐漸機化，骨內外模處開始形成骨樣組織，進入膜內化骨及軟骨化骨過程，形成原始骨痂，然后原始骨痂進行改造塑形。年齡、全身健康狀況、骨折局部情況是影響骨折后骨折愈合的主要因素。全身健康狀況差，如營養不良、糖尿病、鈣磷代謝紊亂、惡性腫瘤等患者，骨折愈合延遲[5-6]。另外，骨折部位的血運情況也是影響骨折愈合的重要因素。血液循環不佳，容易發生延遲連續、不連續或者骨壞死。

表2 治療后不同時間點各組血清總堿性磷酸酶比較（，U/L）

表2 治療后不同時間點各組血清總堿性磷酸酶比較（，U/L）

注：（1） 駁骨消內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；與第4周比較，dP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05，與第4周比較，dP＜0.05；（3）接骨七厘片內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05,與第4周比較，dP＜0.05；（4）對照組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（5）第1周、第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內服組 46.4±4.1c 71.6±8.8ac 64.2±7.5ac 56.8±6.8abdc 11.763 ＜0.05駁骨消外敷組 45.9±5.0c 72.1±8.9ac 65.1±7.2ac 55.3±6.0abdc 13.631 ＜0.05接骨七厘片內服組 46.0±4.8c 71.8±9.0ac 65.3±7.6ac 54.8±5.9abdc 13.199 ＜0.05對照組 39.4±2.5 53.6±5.7a 49.4±6.6a 44.1±6.0b 4.742 ＜0.05 F 3.170 6.156 5.734 4.440 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表3 治療后不同時間點血清鈣水平比較

表3 治療后不同時間點血清鈣水平比較

注：（1）駁骨消內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05；（3）接骨七厘片內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05；（4）第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內服組 2.8±0.4 2.2±0.2ac 2.0±0.2ac 2.7±0.3c 3.379 ＜0.05駁骨消外敷組 2.8±0.5 2.1±0.2ac 1.9±0.1ac 2.6±0.2c 3.140 ＜0.05接骨七厘片內服組 2.7±0.4 2.2±0.2ac 2.0±0.2ac 2.6±0.3c 4.561 ＜0.05對照組 2.7±0.3 2.5±0.2 2.3±0.2 2.2±0.2 2.778 ＞0.05 F 0.101 3.750 4.615 3.782 P＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表4 治療后不同時間點血清磷水平比較

表4 治療后不同時間點血清磷水平比較

注：（1）駁骨消內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，第4周與第2周比較，bP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（3）接骨七厘片內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（4）對照組組內比較，與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（5）第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內服組 0.8±0.2 1.5±0.2ac 1.9±0.3abc 1.6±0.2ac 16.667 ＜0.05駁骨消外敷組 0.9±0.2 1.4±0.3ac 1.8±0.3abc 1.5±0.3ac 7.368 ＜0.05接骨七厘片內服組 0.8±0.2 1.4±0.4ac 1.9±0.2abc 1.6±0.3ac 9.593 ＜0.05對照組 0.7±0.2 1.0±0.2 1.4±0.1ab 1.1±0.2a 8.817 ＜0.05 F 0.833 2.980 3.116 4.359 P＞0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

表5 治療后不同時間點X線片檢查結果比較（，分）

表5 治療后不同時間點X線片檢查結果比較（，分）

注：（1）駁骨消內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（2）駁骨消外敷組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（3）接骨七厘片內服組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05，與第2周比較，bP＜0.05；（4）對照組組內比較：與第1周比較，aP＜0.05；與第2周比較，bP＜0.05；與第4周比較，dP＜0.05；（5）第1周、第2周、第4周及第6周與對照組比較，cP＜0.05

組別 第1周 第2周 第4周 第6周 F P駁骨消內服組 5.4±0.5c 13.8±1.0ac 16.0±0.1abc 16.0±0.1abc 406.610 ＜0.05駁骨消外敷組 5.3±0.6c 13.6±1.1ac 15.9±0.1abc 16.0±0.1abc 321.590 ＜0.05接骨七厘片內服組 5.3±0.5c 13.7±1.1ac 15.8±0.2abc 16.0±0.1abc 336.690 ＜0.05對照組 4.3±0.4 10.4±1.0a 15.0±0.5ab 15.7±0.2abd 361.780 ＜0.05 F 5.278 12.349 13.495 6.429 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

中醫對骨折的治療有悠久的歷史[7-8]。明代薛己《正體類要·序》中指出“肢體傷于外，則氣血傷于內，營衛有所不貫，臟腑由之不和”，強調了氣滯血瘀是骨折后的主要病理變化。清代陳士鐸在《百病辨證錄》中指出：“血不活則瘀不去，瘀不去則骨不能接。”指出骨折早期中在去瘀生新，中期當以續筋接骨藥物促進骨折愈合，后期主要補益類藥物增強肝腎功能，加速骨折愈合。中醫根據辨證分型，在不同的愈合時期給予不同的治療方案。在早期，主要為氣血瘀阻，以活血化瘀、消腫止痛為主；中期主要為血瘀氣滯，以續筋接骨、行氣活血為主；后期主要為肝腎虧虛，以補益肝腎、強壯筋骨為主。中醫歷代醫家在不斷的總結和創新中，積累了豐富的經驗，認為不管以內服或者外用藥物均有活血化瘀、消腫止痛、續筋接骨的作用，補腎藥物還有壯骨長骨的功能[9]。

湛江駁骨消是一種本都道地藥材，性味苦、甘、平，有祛風止痛，袪瘀，續筋接骨，在當地民間骨傷科應用流傳已久，用法上包括外敷與內服。該藥在緩解骨折后局部腫脹及疼痛、促進骨折愈合等方面具有明顯的效果[10-11]。在本研究中，駁骨消無論外敷或者內服，均可通過改善血清鈣、磷水平，提高堿性磷酸酶、骨鈣素水平，促進骨折的愈合，其效果與傳統中藥接骨七厘片相似，骨折愈合時間情況顯著優于對照組。鈣磷代謝是復雜的過程，體液中鈣磷濃度直接和間接影響身體生理功能。正常情況下，骨鹽不斷被溶解，釋放鈣進入血液，而骨組織又不斷從血液中攝取鈣原色以供骨細胞鈣化，以維持骨的更新及血鈣、血磷的平衡。骨折后，斷端附近骨細胞繁殖、分化、增生活躍，形成骨樣組織，進而鈣化、骨化，這個過程中大量的骨鹽形成并沉積于此，在全身個組織器官調節下，骨細胞從血液中攝取的鈣增加，可見在骨折愈合期，鈣元素因大量沉積在骨折部位，因此血鈣水平會反而下降，給機體為了維持正常的鈣磷乘積，血磷水平升高[12-13]。本研究中可看出，在第1周四組血鈣水平沒有顯著差異，進入第2周至第4周，駁骨消內服組與外敷組以及接骨七厘片內服組血鈣水平均顯著下降，明顯低于對照組，X線片檢查結果顯示，在第4周，藥物治療的三組骨折基本愈合，因此在第6周，該三組的血鈣水平逐漸回升，而對照組的血鈣水平仍維持在較低水平，這也證實，對照組骨折愈合延遲，而藥物治療促進了骨折愈合。王愛明等[14]研究顯示，駁骨膏骨折后外敷，可顯著縮短骨折愈合時間，在骨折后第2、3、4周患者血管水平下降，血磷水平升高，這與本研究結果一致。張迪暉等[15]研究顯示，使用夾板內固定配合駁骨油紗外敷治療Colles骨折時，可促進骨折腫脹消失，提示其具有祛瘀消腫的作用。

綜上所述，湛江駁骨消可顯著促進骨折模型鼠骨折愈合，促進鈣元素向骨折部位沉積，內服與外敷具有相似的作用。