Ki-67對意外膽囊癌術后患者預后判斷的價值*

田霧， 丁海華， 于洋， 孫紅成**

(1.貴州省骨科醫院 普外科， 貴州 貴陽 550002； 2.鎮江市中西醫結合醫院 普外科， 江蘇 鎮江 212001； 3.上海交通大學附屬第一人民醫院 肝膽胰外科， 上海 361101)

膽囊癌的發病率雖然在整個消化道腫瘤中居第五位，但在膽道系統惡性腫瘤中的發病率最高。膽囊癌惡性程度高，根治機會少，預后很差，手術切除后的5年生存率僅3%[1]。意外膽囊癌(unsuspected gallbladder cancer，UGC)是指在術前檢查診斷為良性膽囊疾病(急慢性膽囊炎、萎縮性膽囊炎、膽囊息肉、膽囊結石等)、而在術中或術后病理證實為膽囊癌的疾病[2]，隨著腹腔鏡膽囊切除術的普及，UGC也有增多的趨勢。目前關于UGC手術治療后的預后生存時間主要與臨床病理分期、分型、是否(切除標本切緣顯微鏡下見癌細胞) R0切除有關，而另外一些因素仍存在許多爭論，本研究對41例UGC患者手術切除的膽囊標本中Ki-67進行檢測，探討其與患者手術治療后的生存時間的關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集上海交通大學附屬第一人民醫院2004年2月—2015年3月收治的41例UGC患者為研究對象，其中男性12名、女性29名，年齡32～84歲、平均(63±3)歲，單純合并膽囊結石20例、單純合并膽囊息肉15，同時合并膽囊結石和息肉6例。患者主要臨床表現為右上腹疼痛等不適，部分病例無明顯癥狀僅體檢發現，術前均行膽囊超聲等檢查；懷疑膽囊癌患者則加做上腹部CT增強或MRI等檢查后考慮膽囊癌的患者未納入統計。

1.2 手術方法

41例患者由不同的手術醫生先在全麻下常規行三孔法腹腔鏡下膽囊切除術(LC)，膽囊標本放入標本袋內、經劍突下穿刺孔取出后解剖膽囊，懷疑膽囊癌患者立即送冰凍切片檢查；確診為膽囊癌且家屬同意行再次根治手術的患者，術中立即中轉行根治性切除(切除范圍包括膽囊床2 cm以遠的肝臟楔形切除或肝臟Ⅳb/V段組織及肝十二指腸韌帶淋巴結清掃、包括胰頭后組淋巴結)；對于術中送標本未發現癌細胞的陰性冰凍切片而術后石蠟切片確診為膽囊癌，或術中未送冰凍切片監測、而術后常規病理檢查確診為膽囊癌的病人，根據患者以及家屬的意愿決定是否再次行膽囊癌根治手術治療。

1.3 觀察指標

收集41例UGC患者膽囊癌的病理分期(TNM分期)、手術方式、膽囊癌組織標本中Ki-67表達水平、術后隨訪UGC患者的生存時間，對不同TNM分期、不同手術方式、膽囊癌組織標本中不同Ki-67表達水平與UGC患者的生存時間進行單因素分析及Logistic回歸分析，觀察不同分期、不同手術方式以及免疫組化中不同Ki67表達水平的意外膽囊癌術后病人，其預后生存之間是否存在相關性。以癌組織Ki-67陽性染色的中位數百分比30%作為臨界值[3]，表達>30%是癌癥術后預后判斷的預測因子[4]。將Ki-67表達水平陰性和Ki-67≤30%的11例病人統稱為陰性組，ki67>30%的30例病人統稱為陽性組。見表1。

表1 UGC組織Ki-67表達結果與UGC患者術后平均生存期Tab.1 The Ki-67 expression of UGC tissue and the average survival time of UGC patients after surgery

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 手術情況

術中送冰凍切片17例 ，確診為膽囊癌11例(11/41，29.27%)，確診的11例中有6例患者家屬同意進一步行根治手術，5例放棄根治手術。術中6例冰凍切片提示“膽囊腺瘤(性息肉)伴上皮不典型性增生”，術后石蠟包埋切片病理檢查均明確為膽囊癌，其中2例分期較早(T1aN0M0)未再行膽囊癌根治術，另外4例(1例T1bN0M0、3例T2N0M0)再次行膽囊癌根治術。術中未送冰凍切片檢查、術后石蠟包埋切片病理確診膽囊癌24例，其中14例再次手術行膽囊癌根治，10例未再手術(2例為Tis期，5例因術中發現肝臟小結節予以同時切除一并送檢提示轉移癌，3例患者及家屬放棄再手術)。最終單純LC(低于Ⅰb期)4例，單純LC患者13例，LC中轉根治6例，二期根治18例。

2.2 術后恢復情況

41例UGC患者住院時間5～38 d，平均住院11.5 d ；36例術后恢復良好，無并發癥發生。5例再手術患者術后出現有并發癥：1例76歲女性于再手術后第4天突發意識障礙，神志不清，考慮急性肺栓塞，轉入ICU后 5 h死亡；3例患者術后腹腔引流有少量膽汁漏或(和)滲血，保持腹腔引流管通暢引流3～8 d后拔除；1例82歲高齡患者術后低蛋白血癥，腹腔積液并肺部感染，經治療后痊愈出院。

2.3 膽囊癌病理類型及TNM分期

高分化腺癌10例，高-中分化腺癌3例，中分化腺癌3例，中-低分化腺2例，低分化腺6例，黏液腺癌7例(其中1例伴印戒細胞癌)，乳頭狀腺癌3例，管狀腺癌4例，管狀腺瘤局部癌變2例，神經內分泌癌1例。根據美國癌癥聯合委員會(american joint committee cancer，AJCC)第7版TNM分期法， 0期2例(Tis 2例)、Ⅰa期2例(T1aN0M0 2例)、Ⅰb期9例(T1bN0M0 9例)、Ⅱ期9例 (T2N0M0 9例)、Ⅲ期12例(T2N1M0 2例，T3N0M0 9例，T3N1M0 1例)、Ⅳ期7例(T2N2M0 1例、T3N2M0 1例、 TxNxM1 5例)。

2.4 隨訪結果

所有患者術后以門診或電話的形式隨訪，時間截止至2018年3月，隨訪時間1～158月，平均隨訪時間32.7個月。TNM 0期2名患者平均生存期54.5月，截止本次統計時間未滿5年，但仍然存活；1年、3年生存率100%。TNM ⅠA期2名患者平均生存期118.1月，1年、3年、5年生存率均100%。TNM ⅠB期9名患者平均生存期 50.2月，1年、3年、5年生存率分別為88.89%、77.78%、44.44%。TNM Ⅱ期9名患者平均生存期22.7月，1年、3年、5年生存率分別為66.67%、2.22%、11.11%。TNM Ⅲ期12名患者平均生存期21.7 月，1年、3年、5年生存率分別為83.33%、33.33%、8.33%。TNM Ⅳ期7名患者平均生存期10.3月，1年、3年、5年生存率分別為28.57% 、14.28% 、0.00%(見表2)。單純LC(低于Ⅰb期)4名患者平均生存期86.25月，1年、3年、5年生存率分別為100%、100%、50%。單純LC(等于及高于Ⅰb期) 13名患者平均生存期14.92月，1年、3年、5年生存率分別為38.46%、15.38%、0。LC中轉根治6名患者平均生存期43.83月，1年、3年、5年生存率分別為100%、83.33%、16.67%。二期根治18名患者平均生存期29.55月，1年、3年、5年生存率分別為72.22%、33.33%、27.78%(見表3)。

表2 不同病理分期UGC患者術后生存期比較Tab.2 Comparison of the postoperative survival time of UGC patients with different pathological stages

表3 不同手術方式UGC患者術后平均生存期比較Tab.3 Comparison of the average survival time in UGC patients with different surgical methods

2.5 生存時間與腫瘤分期、手術方式

單因素分析結果顯示，UGC患者1年、3年生存與腫瘤分期和手術方式有關(P<0.05)，5年生存與腫瘤分期、手術方式和膽囊癌組織Ki-67有關(P<0.05)。見表4、表5。將1、3、5年生存的相關因素分別代入Logistic回歸分析，顯示手術方式(OR=6.851)和腫瘤分期(OR=0.459)均和1年生存顯著相關(P<0.05)，只有腫瘤分期和 3年生存呈顯著負相關(P<0.05)；腫瘤分期(OR=0.345)及 膽囊癌組織Ki-67(OR=0.927)均和5年生存呈顯著負相關(P<0.05)。見表6、表7。

表4 UGC患者術后生存時間與腫瘤分期的單因素分析Tab.4 The univariate analysis of the postoperative survival time of UGC patients with TNM staging

表5 UGC患者術后生存時間與手術方式、膽囊癌組織Ki-67的單因素分析Tab.5 The univariate analysis of the postoperative survival time of UGC patients with operation methods and the Ki-67 expression levels in gallbladder cancer tissue

表6 1年生存的UGC患者Logistic回歸分析Tab.6 Logistic regression analysis of the 1-year survival time of UGC patients

表7 5年生存的Logistic回歸分析Tab.7 Logistic regression analysis of the 5-year survival time of UGC patients

2.6 Kaplan-Meier生存曲線

如圖1所示，Kaplan-Meier生存曲線結果顯示不同TNM分期UGC患者的腫瘤分期的生存率組間比較差異有統計學意義(P=0.007)，不同手術方式UGC患者的生存率組間比較差異有顯著統計學意義(P=0.002)，不同Ki-67表達水平的生存率組間比較差異有統計學意義(P=0.047)。

圖1 不同TNM分期術、不同手術方式及不同Ki-67水平術后生存曲線Fig.1 The postoperative survival curves of UGC patients with different TNM staging, different operation methods and different Ki-67 expression levels

3 討論

膽囊癌是膽道系統中最常見的惡性腫瘤，其侵襲性強，惡性程度高，預后較差。目前約50%以上的膽囊癌是因膽囊結石或膽囊炎而被發現的[5]，據統計，50%～70%的膽囊癌病人是在膽囊切除術中或術后通過病理檢查意外發現的，這種術前不考慮膽囊癌，術中或術后通過病理診斷的膽囊癌統稱為UGC[6]。UGC發現時病理分期多較早，但因其惡性程度高，生長速度快的生物學特性，早期即可發生轉移可能，而早中期原發性膽囊癌沒有特異的臨床表現，也缺乏特異性敏感性的腫瘤標志物，術前診斷非常困難。所以，對于術前影像學檢查懷疑膽囊有惡變者，術中解剖膽囊標本發現膽囊壁有局灶樣非炎癥性增厚、硬結、魚肉樣改變等，應立即送快速冰凍切片檢查，術中快速冰凍切片檢查和術后常規病理檢查被常規推薦[7]。對于UGC，中國抗癌協會《膽囊癌規范化診治療專家共識 (2016版)》推薦美國癌癥聯合委員會(AJCC)和國際抗癌聯盟(UICC)的TNM分期為膽囊癌分期標準，TNM分期及病理組織學對腫瘤預后具有指導意義[8]。TNM分期是影響患者預后的主要獨立因素，與國內外文獻報道相符[9]，TNM分期也是UGC手術方案選擇的重要依據[10]。UGC是否需要二次手術主要取決于TNM分期的結果，Tis、T1a期 UGC僅單純行膽囊切除術，其5年生存率可達100%[11]。對于Tis、T1a期病人僅行LC術式即可，無需二次手術治療。T1b期以上UGC則需結合患者術后病理分型情況，推薦精準的膽囊癌根治術或擴大根治術[12]。

Ki-67抗原也稱為Ki-67或MKI67，編碼人類Ki -67蛋白的基因MKI67，定位于10號染色體[13]。Ki-67 是一種存在于增殖細胞核、與細胞增殖密切相關的核蛋白，表達于腫瘤細胞核內，在細胞周期的G1、S、G2和M期均有表達[14]，Ki-67作為一個細胞增殖的標志物，能夠很好地評估某一細胞群生長(增殖)比例，它確實是反映惡性腫瘤增殖速度的一項指標，Ki-67的陽性率越高，腫瘤生長越快[15]。Ki-67抗體的免疫組織化學檢測已作為腫瘤細胞增殖主要相關因素被廣泛應用，Ki67的表達上調促進腫瘤細胞增殖，對了解腫瘤的生物學行為和預后有重要價值[16-18]。有研究表明，Ki67在正常膽囊黏膜幾乎不表達，在膽囊黏膜組織腸上皮化生和膽囊腺癌組織中有陽性表達，膽囊腺癌組織中為高表達[19]，Ki-67與膽囊癌的淋巴結轉移、臨床分期等密切相關[20]。本組41例UGC病例， Ki-67值越低、其預后越好，表明Ki-67表達水平對5年生存率有重要的參考價值。

本次收集的UGC患者中有III期和IV期的患者，這可能與早些年主要以B超作為檢查手段診斷UGC有關，有些膽囊癌病例術前影像學檢查發現其膽囊壁增厚卻呈炎癥表現而容易被忽略。UGC中Ib期病人是否需要再次行根治性切除手術尚存在爭議，本研究隨訪結果發現，UGC中Ib期病人再次根治性切除手術比未再次手術的病人預后生存時間更好。UGC病人手術后的預后生存時間主要與臨床病理分期、分型、是否規范性R0切除有關，而Ki-67在UGC手術治療后的5年生存時間預判中有著重要的意義，對于那些UGC術后Ki-67高的患者，應該更加密切隨訪。