脂蛋白腎病腎臟組織油紅O染色方法改良

馬依依，屈 磊，張 帆，喻小娟，王素霞，楊 莉

脂蛋白腎病是一種罕見(jiàn)的由ApoE基因突變引起的常染色體隱性遺傳疾病。ApoE為低密度脂蛋白受體，其突變不僅可引起血清中β脂蛋白前體、β脂蛋白和ApoE升高，還可導(dǎo)致Ⅲ型高脂血癥，而Ⅲ型高脂血癥患者的腎小球損傷病理改變與脂蛋白腎病相同[1-2]。該病突出表現(xiàn)為腎小球毛細(xì)血管腔內(nèi)脂質(zhì)沉積，腎小球毛細(xì)血管腔內(nèi)的脂蛋白栓在經(jīng)10%中性福爾馬林固定、石蠟切片，僅在PAS染色下有淡染色，確診脂蛋白腎病需冷凍組織油紅O或蘇丹紅染色陽(yáng)性，該陽(yáng)性物質(zhì)為脂蛋白[3-4]。因此，針對(duì)脂蛋白栓的染色在診斷脂蛋白腎病中非常重要。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比三種不同油紅O染色方法(粉末油紅O、經(jīng)60%異丙醇處理的粉末油紅O、改良版油紅O)，探索脂蛋白腎病患者腎組織油紅O染色的較優(yōu)染色方法，為臨床病理診斷提供快速且準(zhǔn)確的病理技術(shù)服務(wù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本選取2018～2019年北京大學(xué)第一醫(yī)院腎內(nèi)科臨床病理確診的2例脂蛋白腎病。腎穿刺活檢冷凍組織5 μm厚切片。

1.2 配制試劑油紅O染液：0.05 g油紅O粉末(Sigma Aldrich)室溫溶于100 mL 50%乙醇，過(guò)濾。改良油紅O染液：按照試劑盒說(shuō)明書(shū)將Oil red O stain A與Oil red O stain B(Solarbio)以3 ∶2比例混合均勻，室溫靜置10 min。

1.3 方法

1.3.1油紅O染色法 (1)將冷凍切片取出室溫放置20 min。(2)將恢復(fù)至室溫的冷凍切片浸入配制的油紅O染液中浸染15 min。(3)去離子水終止反應(yīng)。(4)滴加蘇木精至完全覆蓋腎組織，滴染2 min。(5)去離子水洗。(6)浸入1%碳酸鋰5 s進(jìn)行返藍(lán)。(7)甘油封片，光鏡下觀察。

1.3.2經(jīng)60%異丙醇處理的油紅O染色法 (1)將冷凍切片取出室溫放置20 min。……