熒光定量PCR與抗酸特殊染色對疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核中結(jié)核分枝桿菌的檢測對比

孫林雍，嚴(yán)嘉琦，陳 昶，陳 昱，鄒 艷，陳 杰，唐 源

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis, MTB)感染引起的慢性傳染性疾病，病原菌為MTB復(fù)合群，包括：結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、田鼠分枝桿菌等[1]，可侵犯人體全身各種器官，以肺部最常見。骨關(guān)節(jié)結(jié)核是一種罕見的肺外結(jié)核病，早期癥狀不明顯，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，尤其在不發(fā)達(dá)國家。我國是全球22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國之一，患病人數(shù)位居世界第2[2]，因此結(jié)核病成為制約我國社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大公共問題之一[3]。骨關(guān)節(jié)結(jié)核病灶中結(jié)核分枝桿菌比肺結(jié)核病灶中少，增加了早期診斷的難度。且此類結(jié)核通常進(jìn)程緩慢，早期正確診斷和盡早適當(dāng)治療對骨關(guān)節(jié)結(jié)核的預(yù)后至關(guān)重要。本實(shí)驗(yàn)同時(shí)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real time PCR, RT-PCR)及抗酸染色檢測，并與臨床診斷結(jié)果進(jìn)行比較，分析兩種檢測方法的靈敏度、特異性差異，以及MTB檢出率與臨床診斷符合率的一致性。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取四川大學(xué)華西醫(yī)院2017年1月～2018年1月臨床送檢疑似骨關(guān)節(jié)結(jié)核樣本253例。所有樣本均經(jīng)石蠟包埋組織切片，鏡下形態(tài)學(xué)以肉芽腫性炎伴壞死部分區(qū)域可見鈣化為主要組織學(xué)改變(圖1)；對所有標(biāo)本同時(shí)行RT-PCR及抗酸染色檢測。

①②

1.2 儀器與試劑QIAamp DNA Tissue Kit(Cat.56404)、MTB核酸檢測試劑盒(凱杰生物公司)、組織切片抗酸染色試劑盒(Ventana AFB Ⅲ Staining Kit，Roche公司)、Qiacube全自動組織處理機(jī)(Qiagen公司)、CFX-96 real-time PCR儀(Bio-Rad公司)、BenchMark全自動特殊染色機(jī)(羅氏診斷產(chǎn)品上海公司)。

1.3 方法

1.3.1DNA提取 取石蠟包埋組織切成5 μm厚切片3～5張裝入EP管中用于DNA提取。操作步驟按照QIAamp(Cat.56404)DNA FFPE Tissue Kit(50 T)試劑盒說明書進(jìn)行。……