HPV多重檢測平臺特點及結(jié)果差異性比較

洪 楊，胡 沁，李曉靜，馬恩蘭，郭欣欣，侯英勇，宿杰·阿克蘇

子宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤，其病死率較高[1-2]，流行病學(xué)研究顯示人乳頭瘤病毒(human papilloma virus, HPV)存在于99%的子宮頸癌中[3]，子宮頸癌的發(fā)病時間較長，從癌前病變開始可達10～30年[4]。早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是預(yù)防子宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的重要手段。市場上HPV的檢測方法原理及特點均有所不同，其中獲得美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)的方法僅有4種：Digene HC2 HPV HR test、Cervista HPV HR test、Cobas 4800 HPV test、Aptima HPV[5]。由于其檢測HPV操作步驟多而繁瑣、檢測成本高、不能具體分型每一種感染HPV型別等缺點，限制了其在臨床常規(guī)檢測中的廣泛應(yīng)用。不同HPV高危亞型在各類人群中的致癌能力是否不同，使HPV分型檢測得到越來越多關(guān)注。本實驗比較的qRT-PCR法、反向斑點雜交法和流式熒光法均經(jīng)FDA批準(zhǔn)，是國內(nèi)現(xiàn)有較常見的HPV分型檢測平臺，通過比較不同HPV檢測平臺特點及結(jié)果的差異性，為臨床選擇HPV檢測方法提供參考依據(jù)。

1.1 材料收集2018年5月復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院行HPV檢測的800例子宮頸細胞標(biāo)本，年齡20～68歲，使用無菌細胞學(xué)采樣刷，順時針旋轉(zhuǎn)3～5周刷取子宮頸鱗柱交界處脫落細胞，將收集的細胞保存于ThinPrep細胞保存液(HOLOGIC，美國)中。

1.2 HPV檢測將所有送檢標(biāo)本先留取4 mL用于不同平臺HPV對比實驗，其余標(biāo)本進行液基細胞學(xué)檢測。

1.2.1qRT-PCR 留取的4 mL樣本中的1 mL均先用qRT-PCR試劑盒(上海之江生物公司)對15種高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82)進行分型檢測，操作方法嚴格按說明書進行，結(jié)果判斷：以循環(huán)閾值(Ct值)來標(biāo)記病毒負荷量，Ct值按如下公式計算，Ct=Ct標(biāo)本-Ct內(nèi)參照+28，其中內(nèi)參照為人單拷貝基因MNBH；……