敲除OIP5-AS1基因通過miR-7-5p/PARP1軸增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的化學(xué)敏感性

靳彩玲，趙樹鵬，姬穎華，王犖楠，楊 軍，張清琴，牛紅蕊

肺癌包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)，其中NSCLC是肺癌最常見的類型，占所有肺癌的80%～85%[1]。NSCLC治療主要通過手術(shù)、化療和放療，約75%的NSCLC患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已處于中晚期，5年生存率很低。OIP5-AS1屬于腫瘤相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long-chain non-coding RNA, lncRNA)，在惡性腫瘤的演變中參與復(fù)雜的細(xì)胞機(jī)制[2]。OIP5-AS1已被證實(shí)是多種惡性腫瘤發(fā)生的重要調(diào)控因子[3]。然而，OIP5-AS1與miR-7-5p在肺癌中的相互作用尚未被提及和研究。因此，本實(shí)驗(yàn)探討OIP5-AS1與miR-7-5p相互作用對(duì)NSCLC細(xì)胞化學(xué)敏感性的作用及分子機(jī)制，旨在為NSCLC的發(fā)病機(jī)制和治療策略提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料正常肺細(xì)胞系BEAS-2B、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和順鉑耐藥肺癌細(xì)胞A549/DDP購自美國ATCC公司；Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑購自賽默飛世兒科技公司；Dual-Luciferase Reporter Assay System購自美國普洛麥格公司；牛血清白蛋白、20×TBS、RT-qPCR/TaqMan One Step RT-qPCR Kit、PARP1抗體均購自北京索萊寶公司；RIPA裂解液購自上海源葉生物公司；Ki-67抗體購自武漢菲恩公司；PCNA鼠單抗、MDR1兔單抗、BCL-2鼠單抗、Bax兔單抗均購自美國CST公司；生物安全柜購自濟(jì)南鑫貝西生物公司；生物顯微鏡購自日本奧林巴斯株式會(huì)社；恒溫培養(yǎng)箱購自韓國DAIHAN公司；倒置熒光顯微鏡購自日本尼康株式會(huì)社；流式細(xì)胞儀購自常州必達(dá)科生物公司；凝膠成像系統(tǒng)購自美國Axygen公司。

1.2 方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 A549和A549/DDP細(xì)胞培養(yǎng)在(含10%FBS、1%青霉素鏈霉素和1 mmol/L丙酮酸鈉)RPMI 1640培養(yǎng)基中。BEAS-2B細(xì)胞培養(yǎng)在(含10%FBS、1%青霉素鏈霉素和1 mmol/L丙酮酸鈉)DMEM(高糖)培養(yǎng)基中。此外，將A549/DDP細(xì)胞培養(yǎng)在含2 mg/L順鉑的培養(yǎng)基中，以保留耐藥表型[4]。將BEAS-2B、A549和A549/DDP細(xì)胞置入37 ℃、5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。……