非小細胞肺癌驅動基因突變與臨床病理特征的關系

眭玉霞，鄧曉宇，伍 錚，林雅婷，張潤民，郝昌鵬，陳靈鋒，王麗萍，晉 龍

肺癌的發病率與病死率居惡性腫瘤之首，遺傳學上具有較高的異質性[1]。其中非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占所有肺癌的80%～85%[2]。雖然臨床治療在傳統手術和放、化療聯合治療上已有很大改進，但總體療效不佳，預后較差[3]。近十年來隨著腫瘤分子生物學的發展和驅動基因研究的逐步深入，NSCLC的診斷和治療發生了重大變革。多項研究表明，針對驅動基因的靶向治療在晚期NSCLC患者的治療和預后方面產生了革命性的影響，驅動基因是靶向治療療效的重要預測因子。本實驗擬通過分析NSCLC中驅動基因(EGFR、KRAS、PIK3CA、ALK、ROS1、RET、KRAS、BRAF、HER-2和MET)的突變及與臨床病理特征的相關性，旨在為推動多基因聯合檢測提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1標本 選取福建省立醫院2013年4月～2017年1月收治的病理資料完整的550例原發性NSCLC作為研究對象。標本均經10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋、切片及HE染色，由2名高年資病理醫師采用雙盲法進行重新審閱，依據WHO(2015)肺腫瘤組織學分類標準進行病理分型，并確定有足夠的腫瘤細胞再進行后續檢測。

1.1.2儀器與試劑 實驗儀器采用安捷倫科技公司的熒光定量PCR儀(Mx3000P美國)、Illumina NextSeq 500。福爾馬林固定石蠟包埋樣本DNA/RNA共分離試劑盒及人類EGRF、KRAS、PIK3CA、ALK、RET、ROS1、NRAS、BRAF、HER-2和MET突變基因檢測試劑、人類癌癥多基因突變聯合試劑盒(可逆末端終止測序法)均由廈門艾德生物公司提供。

1.2 方法

1.2.1組織DNA和RNA的提取 用二甲苯及75%乙醇擦拭刀片、切片機刀座、鑷子，保證無交叉污染，切取3張5 μm厚石蠟包埋組織樣品，置于1.5 mL EP管內，二甲苯脫蠟后用甲醇固定石蠟包埋樣本DNA/RNA共分離試劑盒提取基因組DNA和細胞總RNA。……