老年獲得性免疫缺陷綜合征患者Th17/Treg失衡對(duì)繼發(fā)真菌感染的影響

張亞武 (武漢市金銀潭醫(yī)院感染四科，湖北 武漢 430012)

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是一種傳染性較強(qiáng)的傳染病，可經(jīng)性接觸、血液、母嬰傳播等途徑感染，于感染科較為多見，對(duì)社會(huì)具有較大危害性〔1〕。該病既往多發(fā)于青壯年，但隨著獨(dú)居老人的增多，老年AIDS發(fā)病率呈逐年增長趨勢(shì)，而老年群體因自身免疫力低下，且多合并基礎(chǔ)疾病，若其長期應(yīng)用抗生素易發(fā)生繼發(fā)性真菌感染，進(jìn)而增加臨床治療難度，影響預(yù)后〔2,3〕。輔助性T細(xì)胞(Th)17、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是CD4T細(xì)胞中功能相反的2個(gè)亞群，其于真菌感染、腫瘤、自身免疫系疾病發(fā)展過程中均具有重要作用。有學(xué)者指出，Th17/Treg失衡與老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染存在一定相關(guān)性〔4〕。但該觀點(diǎn)尚未得到臨床證實(shí)，且相關(guān)研究報(bào)道較少，本研究旨在探討老年AIDS患者Th17/Treg失衡對(duì)繼發(fā)真菌感染的影響，為臨床診治提供有效指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集武漢市金銀潭醫(yī)院2018年4月至2019年10月就診的87例老年AIDS患者臨床資料，其中男47例，女40例；年齡64～82歲，平均(73.46±3.45)歲；納入條件：均符合《中國艾滋病診療指南(2018版)》〔5〕中AIDS診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)實(shí)驗(yàn)室蛋白印跡實(shí)驗(yàn)法檢查證實(shí)血清人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體為陽性；無心、肝、腎等重要臟器功能不全；近期未使用抗菌藥物；臨床資料完整。排除條件：合并其他感染性疾病；合并自身免疫系統(tǒng)疾病；合并中樞系統(tǒng)疾病；合并嚴(yán)重心腦血管疾病；精神異常，交流障礙。根據(jù)所有老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染情況，將其分為單純AIDS組(n=53)與繼發(fā)真菌感染AIDS組(n=34)，選取同期于我院正常體檢的32例老年群體作為對(duì)照組。3組年齡、性別、體重、不良嗜好、婚姻狀況、文化程度對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組基線資料對(duì)比

1.2方法 統(tǒng)計(jì)所有老年AIDS患者病原菌檢查結(jié)果，檢查方法：取患者血液、尿液、痰液、皮屑、糞便等同一標(biāo)本進(jìn)行真菌培養(yǎng)，若一個(gè)標(biāo)本內(nèi)連續(xù)2次及以上均檢出同1種真菌或經(jīng)涂片檢查可見大量真菌孢子或菌絲，結(jié)合繼發(fā)性真菌感染臨床癥狀，并依據(jù)《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則(第三次修訂)》〔6〕中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)分組。Th17、Treg檢測方法：取患者清晨空腹肘靜脈血10 ml，置于肝素抗凝管內(nèi)，以聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)密度梯度離心法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)備用；①Th17檢測：取1×106PBMC，加入5 μg/L佛波醇乙酯(PMA)與1 mg/L離子霉素，于37℃環(huán)境下孵育5 h后，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2遍；分別加入20 μg CD3-Percp、20 μg CD4-APC，于4℃避光環(huán)境下進(jìn)行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍；將洗好后標(biāo)本應(yīng)用Fix/Prem medium A 液固定，待固定15 min后，分別添加Fix/Prem medium B 液、FITC-IL-17A破膜進(jìn)行染色，于室溫避光環(huán)境下孵育20 min后，PBS洗2遍，應(yīng)用美國BD公司生產(chǎn)的FACS Calibur流式細(xì)胞儀，采用Flowjo軟件評(píng)估Th17含量；②Treg檢測：取1×106PBMC，分別加入20 μg CD3-Percp、20 μg CD4-APC、20 μg CD25-PE，于4℃環(huán)境下進(jìn)行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍；將洗好后標(biāo)本加入1 ml Foxp3固定/破膜工作液，于4℃環(huán)境下孵育30 min，待孵育結(jié)束后，離心去除上層清液，并應(yīng)用Foxp3破膜緩沖液洗1遍；最后添加20 μl FITC-Foxp3抗體，于4℃環(huán)境下進(jìn)行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍，并進(jìn)行重懸細(xì)胞，應(yīng)用美國BD公司生產(chǎn)的FACS Calibur流式細(xì)胞儀，以Flowjo軟件分析Treg含量，比較3組Th17/Treg差異，分析Th17/Treg對(duì)老年AIDS繼發(fā)真菌感染的影響。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)、一般線性回歸檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)，作線性回歸方程。

2 結(jié) 果

2.13組Th17/Treg對(duì)比 對(duì)照組Th17/Treg(1.16±0.34)最高，其次為單純AIDS組(0.58±0.13)，繼發(fā)真菌感染AIDS組最低(0.21±0.07)，3組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=189.636，P=0.000)。

2.2Th17/Treg比值與老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染的線性回歸結(jié)果 將Th17/Treg比值作為自變量，將老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染作為因變量，線性回歸檢驗(yàn)結(jié)果顯示，Th17/Treg失衡可能對(duì)老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染存在影響(P<0.05)，得到線性回歸方程：Y=2.919-1.429 X。見表2。

表2 Th17/Treg比值與老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染的線性回歸結(jié)果

3 討 論

老年AIDS屬于感染科常見疾病，主要因HIV病毒感染所致，具有較高致死率，對(duì)患者身心健康及生命安全具有嚴(yán)重影響〔6，7〕。因HIV入侵機(jī)體后易攻擊CD4T淋巴細(xì)胞，破壞免疫功能，故老年AIDS繼發(fā)性感染發(fā)生率較高，而繼發(fā)真菌感染易導(dǎo)致產(chǎn)生耐藥性，增加臨床治療難度，影響患者預(yù)后，而有研究顯示，早期予以合理抗生素可有效扼制疾病發(fā)展，延長患者生存時(shí)間，因此盡早明確繼發(fā)性真菌感染發(fā)生情況對(duì)臨床診治至關(guān)重要〔8，9〕。

Th17、Treg是CD4T淋巴細(xì)胞中主要的2個(gè)亞群，其中Th17是由Th0細(xì)胞于細(xì)胞白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-23刺激下分化而來，具有分泌IL-17、IL-22等促炎因子作用，而IL-17可激活T細(xì)胞，刺激多細(xì)胞分泌炎癥因子，加劇機(jī)體炎癥反應(yīng)，嚴(yán)重可誘發(fā)自身免疫性疾病〔10，11〕。Treg屬于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的一種，除來源于胸腺外，還可由外周細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生，于外源性抗原誘導(dǎo)下，可通過分泌相應(yīng)細(xì)胞抑制因子與細(xì)胞間接觸發(fā)揮免疫抑制功能，經(jīng)大量研究顯示，該細(xì)胞于腫瘤感染免疫、微生物感染免疫、免疫穩(wěn)態(tài)維持等方面均具有重要作用〔12，13〕。而老年AIDS患者若發(fā)生繼發(fā)性真菌感染，病原菌進(jìn)入機(jī)體后易對(duì)免疫信號(hào)通路中胱天蛋白酶募集域蛋白9產(chǎn)生依賴性，進(jìn)而促使Th17細(xì)胞分化，同時(shí)可通過特異性識(shí)別受體激發(fā)Th17細(xì)胞反應(yīng)，抑制Th17細(xì)胞功能，同時(shí)據(jù)相關(guān)研究顯示，Th17及其分泌的IL-7對(duì)真菌感染具有保護(hù)作用，故Th17于老年AIDS患者繼發(fā)性真菌感染發(fā)展中具有重要作用〔14，15〕。研究指出，Treg于真菌感染導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)早期可促進(jìn)細(xì)胞增殖、活化，大量分泌IL-10及調(diào)節(jié)細(xì)胞毒性T細(xì)胞參與免疫反應(yīng)過程，抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)程度，同時(shí)于炎癥反應(yīng)晚期可抑制Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答或變態(tài)反應(yīng)，以減輕炎癥作用，扼制疾病發(fā)展〔16〕。正常情況下，Th17與Treg細(xì)胞功能與分化過程呈相互對(duì)抗?fàn)顟B(tài)，且其比例相較平衡，但當(dāng)兩者比例失衡，易紊亂機(jī)體免疫穩(wěn)定狀態(tài)，增加真菌感染率，進(jìn)而易導(dǎo)致老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染，而臨床針對(duì)Th17/Treg失衡者，需對(duì)其進(jìn)行病原菌檢測，以了解病情發(fā)展，盡早予以臨床治療〔17，18〕。但本研究因納入樣本量較少，故研究結(jié)果存有一定局限性，臨床仍需加大樣本量探討，以證實(shí)本研究結(jié)果真實(shí)性。

綜上，Th17/Treg失衡可能對(duì)老年AIDS患者繼發(fā)真菌感染存在影響，臨床需密切監(jiān)測老年AIDS患者Th17、Treg水平變化，并予以相應(yīng)治療措施，預(yù)防繼發(fā)性真菌感染發(fā)生。