HPV E6/E7mRNA 在TCT 陰性、非16、18 型高危型HPV DNA 陽(yáng)性人群的應(yīng)用探討

薛巧梅 李林 王林平

(青島大學(xué)附屬威海市立第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東威海 264200)

宮頸癌是女性最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，位居第二[1]。世界衛(wèi)生組織2018 年發(fā)布，全球?qū)m頸癌發(fā)病率為13/10萬，死亡率為7/10萬，84%發(fā)生在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)，且新發(fā)宮頸癌病例有年輕化趨勢(shì)[2]。宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)病變與宮頸浸潤(rùn)癌的發(fā)生密切相關(guān)，而篩查是早期發(fā)現(xiàn)宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)病變的主要手段。目前推薦的主要篩查方法為細(xì)胞學(xué)檢查和HPV DNA 檢測(cè)。但即使兩者聯(lián)合仍不能對(duì)TCT 陰性、非16、18 型高危型HPV DNA陽(yáng)性患者的病情進(jìn)行有效的評(píng)估。該研究目的在于通過E6/E7mRNA 檢測(cè)，對(duì)液基薄層細(xì)胞學(xué)陰性、非16、18 型高危型HPV DNA 陽(yáng)性患者進(jìn)行分流，減少宮頸高級(jí)別上皮內(nèi)病變的漏診。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月至12 月于威海市婦幼保健院行TCT 及HPV DNA 檢測(cè)，結(jié)果TCT 陰性、非16、18 型高危型HPV DNA 陽(yáng)性的364 名患者為研究對(duì)象，患者年齡22～62 歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）取材前72h 無性生活、陰道沖洗及上藥；（2）既往無宮頸病變、宮頸癌及盆腔放療病史；（3）無生殖器炎癥；（4）非妊娠期及哺乳期。

1.2 方法

1.2.1 宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查

用宮頸取樣刷于宮頸鱗柱交界處向同一方向旋轉(zhuǎn)5 周，刷取脫落細(xì)胞，將宮頸刷在保存液中充分沖洗后送實(shí)驗(yàn)室制片檢查，采用TBS 報(bào)告系統(tǒng)診斷。

1.2.2 高危型HPV DNA 檢測(cè)

采用酶促化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)樣本中的HPV DNA。試劑盒采自杭州德同生物技術(shù)有限公司，具體流程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，可檢測(cè)14 種高危型HPV DNA，包括2種（HPV16、18型）和12種（HPV31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68 型），檢測(cè)結(jié)果＞1 為陽(yáng)性。

1.2.3 HPV E6/E7mRNA 的檢測(cè)

采用分支鏈DNA 信號(hào)擴(kuò)增法檢測(cè)樣本中的HPV E6/E7mRNA。試劑盒采自鄭州科迪亞生物技術(shù)有限公司，具體流程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，可檢測(cè)14 種高危型HPV E6/E7mRNA，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68 型，不區(qū)分具體型別，檢測(cè)結(jié)果值≥1.0 為陽(yáng)性。

1.2.4 組織病理學(xué)

陰道鏡下可疑病變處取活檢。病理結(jié)果分為炎癥、LSIL、HSIL 及宮頸癌，以CINII+為研究終點(diǎn)。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS21.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料以率n（%）表示，采用X2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

E6/E7mRNA 陽(yáng)性的病例中CINII+的檢出率為13.48%，遠(yuǎn)高于E6E7mRNA 陰性病例中的比例2.99%，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表1。

3 討論

宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查和高危型HPV 檢測(cè)是目前宮頸癌篩查的主要方法。細(xì)胞學(xué)檢查包括TCT 和巴氏涂片法，前者篩查的陽(yáng)性率明顯高于后者，故目前基本取代了后者，但仍有較高的漏診率。有研究顯示因?yàn)榧?xì)胞數(shù)量不足及細(xì)胞學(xué)醫(yī)生診斷水平的影響，單獨(dú)TCT 檢查漏診率達(dá)11.9%[3]。另有相關(guān)研究報(bào)道單獨(dú)TCT 檢測(cè)靈敏度為79.33%，特異性為71.59%[4]。而以L1 區(qū)為檢測(cè)靶點(diǎn)的HR-HPV DNA 檢測(cè)，靈敏度高、特異性低，但僅能反映患者目前是否感染HPV 病毒，無法反映病變的進(jìn)展情況。故無法對(duì)TCT 陰性、非16、18 型高危型HPV DNA 陽(yáng)性患者病情進(jìn)展情況進(jìn)行有效的評(píng)估。HPV E6/E7mRNA 檢測(cè)是一種新的以E6/E7 為檢測(cè)靶點(diǎn)的篩查方法。研究表明HPV E6/E7 基因與人類的DNA 結(jié)合后，轉(zhuǎn)錄生成E6E7mRNA，進(jìn)一步翻譯出E6、E7 癌蛋白，結(jié)合P53、Rb 抑癌蛋白后，細(xì)胞周期控制失常，發(fā)生癌變，故HPV E6/E7mRNA在一定程度上反應(yīng)了癌基因的活性[5]。相關(guān)研究表明，單獨(dú)行HPV E6/E7mRNA 檢測(cè)與單獨(dú)行高危型HPV DNA 相比，前者對(duì)于CINII 及以上病變的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值高于后者，且隨著宮頸病變級(jí)別的升高E6/E7mRNA 的表達(dá)呈升高趨勢(shì)[6]。張小松等[7]報(bào)道E6E7mRNA 陽(yáng)性病例中CINII+的比例（14.3%）遠(yuǎn)高于E6E7mRNA 陰性病例中的比例（4.0%），E6E7mRNA 可用于高危型HPV 陽(yáng)性病例的分流。

該研究通過對(duì)液基薄層細(xì)胞學(xué)陰性、非16、18 型高危型HPV DNA 陽(yáng)性患者進(jìn)行E6/E7mRNA檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)E6/E7mRNA 陽(yáng)性的病例中CINII+的檢出率為13.48%，遠(yuǎn)高于E6E7mRNA 陰性病例中的比例2.99%，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。E6/E7mRNA 陽(yáng)性的病例中＞40 歲的CINII+的占比為67.74%。所以對(duì)于TCT 陰性、非16、18 型高危型HPV DNA 陽(yáng)性、E6/E7mRNA 陽(yáng)性的患者，尤其是年齡＞40 歲的患者，要引起重視，可以考慮縮短復(fù)查時(shí)間，必要時(shí)盡早轉(zhuǎn)診陰道鏡，避免漏診高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變。

表1 E6/E7 mRNA 陽(yáng)性、陰性各組病例數(shù)及CINII+陽(yáng)性率