急性腦梗死患者外周血Treg和NSE水平及與腦損傷程度的相關性研究

鄒 芳，王金龍，杜 彪

各種原因致顱內血管不暢甚而導致血管發生閉塞，使血管供血區域發生梗死性病灶，即為急性腦梗死[1]。該病發病急，若患者在患病前就有動脈粥樣硬化、血管狹窄、斑塊形成等病變，將加速急性血栓的形成，進而引起腦梗死的急性發作，對患者腦部神經造成不可逆損傷[2]。隨著近年來人們生活水平的不斷提高，急性腦梗死患病率及病死率也逐漸升高[3]。外周血調節性T細胞(Treg)是一種可有效調節免疫活性并抑制炎性因子的細胞亞群，與腦梗死發生聯系密切。神經元特異烯醇化酶(NSE)位于神經細胞中，參與神經的能量代謝，在一定程度上可有效反映神經系統損傷情況[4-5]。本研究通過對急性腦梗死患者外周血Treg、NSE水平測定，分析上述兩種因子與患者腦部損傷程度的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年9月—2019年9月本院確診的61例急性腦梗死患者作為研究組。納入標準：①經臨床及影像學檢查且符合急性腦梗死診斷標準[6]；②臨床資料完整，無腦梗死病史。排除標準：①存在嚴重心、腎、肝功能障礙或合并惡性腫瘤、危重并發癥者；②伴代謝紊亂或免疫、血液系統疾病者；③近1個月內服用過干擾本研究指標結果的藥物者；④臨床資料欠缺者。另選擇29例同時間段來我院體檢的身體健康者作為對照組。研究組男38例，女23例；年齡48～74(67.92±10.23)歲；病程為2～30(23.21±10.15)h；合并高血壓病27例，糖尿病22例，高脂血癥19例。對照組男19例，女10例；年齡49～75(68.21±10.15)歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會審核通過。

1.2檢測方法 抽取所有入組者清晨空腹靜脈血3 ml，并加入乙二胺四乙酸抗凝處理，離心取血清。①將各受檢者血清分別置入2只流式細胞試管內，每支150 μl，于管內分別孵育CD4-PE、FITC-CD25、PE-CD4、FITC-IgG 20 min后，分別加入磷酸鹽緩沖液400 μl及紅細胞裂解液400 μl混合搖勻，再避光孵育20 min，孵育完成后離心并再次使用磷酸鹽緩沖液500 μl重懸，應用流式細胞儀(美國BD公司生產)檢測Treg細胞數。②運用酶聯免疫吸附法測定NSE水平，儀器為美國BioRad公司生產的BioRad450酶標儀，試劑盒購自德國羅氏公司，嚴格按說明書進行操作。

1.3觀察指標及判定標準 ①對比兩組外周血Treg數目、NSE水平；②對比不同梗死范圍患者外周血Treg數目、NSE水平；③對比不同程度腦損傷患者外周血Treg數目、NSE水平；④分析急性腦梗死患者外周血Treg數目、NSE水平與腦損傷程度的相關性。梗死灶范圍依據MRI或頭顱CT檢查結果，并據Pullicino公式=長×寬×MRI或掃描陽性層數/2，計算梗死灶體積。腦損傷程度根據美國國立衛生研究院卒中量表[7]判定，總分42分，輕型損傷<15分、中型損傷15～29分、重型損傷>29分。

2 結果

2.1兩組外周血Treg數目、NSE水平比較 研究組外周血Treg數目明顯少于對照組，而NSE水平明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。見表1。

表1 急性腦梗死及體檢健康者外周血Treg數目、NSE水平比較

2.2不同梗死范圍患者外周血Treg數目、NSE水平比較 61例急性腦梗死患者根據病灶大小進行亞組分析，其中病灶<4 cm3為小梗死亞組(27例)，4～10 cm3為中梗死亞組(20例)，≥10 cm3為大梗死亞組(14例)。外周血Treg數目大梗死亞組<中梗死亞組<小梗死亞組，NSE水平大梗死亞組>中梗死亞組>小梗死亞組，差異均有統計學意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

表2 不同梗死范圍的急性腦梗死患者外周血Treg數目、NSE水平比較

2.3不同程度腦損傷患者外周血Treg數目、NSE水平比較 外周血Treg數目輕型亞組>中型亞組>重型亞組，NSE水平輕型亞組<中型亞組<重型亞組，差異均有統計學意義(P<0.01)，見表3。

表3 不同程度腦損傷的急性腦梗死患者外周血Treg數目、NSE水平比較

2.4急性腦梗死患者外周血Treg數目、NSE水平與梗死范圍、腦損傷程度的相關性分析 經Spearman相關性分析，急性腦梗死患者外周血Treg數目與梗死范圍、腦損傷程度呈負相關，而NSE水平與梗死范圍、腦損傷程度呈正相關。見表4。

表4 急性腦梗死患者外周血Treg數目、NSE的表達與梗死范圍、腦損傷程度的相關性分析

3 討論

目前腦血管疾病已成為我國病死率、致殘率極高的疾病，近年來隨著人們生活壓力的逐漸加大，該病的患病群體呈年輕化傾向[8]。急性腦梗死是在短時間內血管發生閉塞，導致相應腦組織發生壞死的一種疾病，而腦神經細胞作為人體中最嬌嫩的細胞之一，一旦血供完全阻斷持續8～10 min將對其造成不可逆性傷害[9]。

目前，臨床對于急性腦梗死主要采用溶栓、抗栓、血管內治療等手段治療[10]。該病發病原因及發病機制較為復雜，有研究認為腦梗死的發生與動脈栓塞、動脈硬化、代謝性疾病及血液凝血機制等多種因素有關[11-12]。當腦血管發生病變，內膜損傷、破裂將釋放大量的促凝血因子，加速血小板等血液成分發生沉著、聚集和黏附，同時血液中纖維蛋白原、脂蛋白、膽固醇等因子水平上升，導致血液黏度、凝固性增高，血流減慢，致使局部腦組織發生急性缺血癥狀[13-14]。故分析急性腦梗死患者血管內相關因子水平對該病的治療及預防有重要意義。

外周血Treg是一種可調節免疫功能的T細胞亞群，有文獻顯示，該因子主要使Th1細胞分泌受到抑制從而減少炎性細胞產生，從而有效緩解血管內斑塊性質改變、延緩顱內血管粥樣硬化的發生，并減輕患者神經功能損傷[15-16]。有研究指出，外周血Treg數目減少與梗死發生存在緊密聯系，急性腦梗死患者外周血Treg數目顯著低于正常人[17]。而本研究結果驗證了該觀點，一定程度上說明當Treg數目減少，機體對免疫活性的調節減弱，血管內炎性因子大量釋放促進血栓形成、動脈硬化等，從而導致腦組織缺氧缺血。NSE則是廣泛存在于成熟神經內分泌細胞和神經細胞中的特異性蛋白，在腦組織中的含量及活性均遠高于周圍神經組織[18]。相關研究證明，正常腦組織NSE含量較低，一旦出現缺氧、缺血等病理改變使細胞膜受損后，腦脊液將釋放大量NSE，致血腦屏障破壞，血中NSE水平大量增加[19-20]。本研究結果與上述研究一致，進一步說明NSE持續高水平可提示急性腦梗死的發生。

同時本研究發現外周血Treg與NSE的異常表達與腦組織損傷程度有關，梗死范圍越大，外周血Treg數目就越低，NSE表達越高，提示上述因子的變化與腦組織損傷程度存在相關性。目前臨床對于急性腦梗死的病變范圍及腦組織損傷程度普遍是借助CT、MRI等影像學手段進行判斷，且具有局限性，存在患者早期診斷失誤的情況[21]。而本研究經患者血清學指標檢測可有效判斷病情，提示二者可作為急性腦梗死診斷、治療及預后評估的指向性指標。

綜上，急性腦梗死患者外周血Treg數目、NSE水平與其梗死范圍及腦組織受損程度具有相關性，臨床可將二者作為本病診斷、治療及預后評估的參考指標。