阿爾茨海默病與血漿Klotho蛋白水平相關(guān)性研究*

李寶善，唐渝平△，馬厚勛，蔣 宜，李婷婷，裴文楠

（1.重慶市急救醫(yī)療中心/重慶大學(xué)附屬中心醫(yī)院，重慶400014；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶400016）

老年期癡呆是老年人群癡呆的總稱，包括阿爾茨海默病（AD）、血管性癡呆、額顳性癡呆、路易體癡呆等，其中AD患者占比超過50%［1］。AD不僅嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，也給患者家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為嚴(yán)重的公共健康問題。研究發(fā)現(xiàn)，Klotho基因多態(tài)性及其表達(dá)與認(rèn)知功能損害有關(guān)［2-3］，而Klotho基因表達(dá)產(chǎn)物——Klotho蛋白水平的高低與AD的相關(guān)性尚未深入開展研究。本研究中應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測(cè)AD患者與非AD患者血漿Klotho蛋白水平，探索Klotho蛋白與AD相關(guān)性，為AD的綜合防治提供新思路。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組，年齡大于65歲；符合第5版《美國精神疾病診斷與評(píng)估手冊(cè)》（DSM-Ⅴ）中AD診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；符合美國國家衰老研究所（NIA）和阿爾茨海默病學(xué)會(huì)（AA）2011年發(fā)布的NIA-AA診斷標(biāo)準(zhǔn)中的“很可能”AD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；簡易智力狀況量表（MMSE）評(píng)分中文盲≤17分，小學(xué)程度≤20分，中學(xué)程度≤22分，大學(xué)程度≤23分；臨床癡呆評(píng)定量表（CDR）評(píng)分≥1分；Hachinski缺血量表評(píng)分≤4分。對(duì)照組，同期本科住院患者；年齡大于65歲；MMSE量表評(píng)分中文盲＞17分，小學(xué)程度＞20分，中學(xué)程度＞22分，大學(xué)程度＞23分；CDR評(píng)分為0分。本研究方案遵循《赫爾辛基宣言》，經(jīng)重慶市急救醫(yī)療中心醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者家屬簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：血管性癡呆、帕金森病、抑郁癥、硬膜下血腫、腦出血、腦積液、腦瘤、甲狀腺功能減退、譫妄等所致癡呆或記憶障礙；Hachinski缺血量表評(píng)分＞4分；腎臟疾病及其他嚴(yán)重精神、軀體疾病。對(duì)照組，近年來認(rèn)知功能有明顯下降；腎臟疾病及其他嚴(yán)重精神、軀體疾病。

病例選擇與分組：選取重慶市急救醫(yī)療中心老年病科2016年5月至2018年5月收治的69例AD患者作為觀察 組，男40例、女29例，年齡79～99歲、平均（83.10±5.05）歲；將70例非AD患者作為對(duì)照組，男34例、女36例，年齡77～96歲、平均（83.80±4.02）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo)

認(rèn)知功能：2位主治醫(yī)師以上職稱者分別采用MMSE量表、CDR量表、Hachinski缺血量表評(píng)估。

相關(guān)檢查：患者入院行系統(tǒng)體格檢查，測(cè)量身高、體質(zhì)量，并計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)（BMI）；完善頭顱CT或MRI影像檢查。抽取患者清晨空腹靜脈血3 mL，抗凝，離心、分離出血清，采用7060型全自動(dòng)生化分析儀（日本Hitachi公司）檢測(cè)總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。

Klotho蛋白濃度：取患者清晨空腹靜脈血3 mL，抗凝，離心，分離得血漿，采用680型酶標(biāo)儀（美國BioRad公司），以人Klotho蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒（美國R&D公司）檢測(cè)。按試劑盒說明書及儀器操作標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用PASW Statistics 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；相關(guān)因素行Logistic多因素回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素回歸分析時(shí)，血漿Klotho蛋白水平低于中位數(shù)視為降低，賦值1，否則賦值0；男性賦值1，女性0；年齡以所有研究對(duì)象年齡中位數(shù)為分界線，高于中位數(shù)賦值1，否則0；糖尿病、高血壓者賦值1，否則0；TC，TG，LDL-C均高于正常值，HDL-C低于正常值者賦值1，否則0。

2 結(jié)果

2.1 觀察指標(biāo)

結(jié)果見表1。

2.2 AD相關(guān)因素分析

以單因素Logistic回歸分析模型評(píng)價(jià)AD的相關(guān)因素。該模型包括性別、年齡、受教育程度、高體質(zhì)量指數(shù)、高血壓、2型 糖尿病、高TC、高LDL-C、高TG、低HDL-C及低血漿Klotho蛋白水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高齡和低血漿Klotho蛋白水平是AD的危險(xiǎn)因素；TG升高有助于減少AD。多因素連續(xù)Logistic回歸分析提示，低血漿Klotho蛋白水平和高齡均為AD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素；性別、受教育程度、高BMI、高血壓、2型糖尿病、高TC、高LDL-C、高TG、低HDL-C的P值均大于0.05。詳見表2、表3。

表1兩組患者觀察指標(biāo)比較

表2 AD危險(xiǎn)因素的單因素回歸分析

表3 AD危險(xiǎn)因素的多因素連續(xù)回歸分析

3 討論

癡呆現(xiàn)已確定的危險(xiǎn)因素包括年齡、家族史、遺傳因素，可能的危險(xiǎn)因素包括腦外傷、性別、教育程度、婚姻狀況、職業(yè)、地區(qū)和種族差異、輕度認(rèn)知功能損害、中風(fēng)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素、炎癥、職業(yè)暴露、雌激素水平、唐氏綜合征等［5-7］。根據(jù)2010年第六次人口普查的結(jié)果，我國總?cè)丝谶_(dá)13.3億，65歲以上人口接近2.4億，占比達(dá)18.05%，按AD 5%［2］的發(fā)病率保守估算，目前我國AD患者多于1 100萬。AD可使患者失智甚至失能，需要專人長期照護(hù)，給家庭、社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)。

增齡、腦血管病是老年期癡呆至關(guān)重要的危險(xiǎn)因素，本研究中證實(shí)，高齡是AD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，但對(duì)此尚無有效干預(yù)手段。因此在AD防治措施中，控制腦血管疾病相關(guān)危險(xiǎn)因素，防治腦血管疾病顯得極其重要。同時(shí)，本研究中發(fā)現(xiàn)，低血漿Klotho蛋白水平是AD的危險(xiǎn)因素。DUBAL等［8-9］發(fā)現(xiàn)，Klotho蛋白不僅可提高模型小鼠的認(rèn)知功能，還可抵抗AD淀粉樣前體蛋白過表達(dá)導(dǎo)致的神經(jīng)退化。Klotho蛋白存在于腎臟、腦室脈絡(luò)叢、大腦、海馬、胎盤、小腸、前列腺等組織器官中［10］。有學(xué)者認(rèn)為，腎臟表達(dá)的Klotho蛋白進(jìn)入血液循環(huán)，而脈絡(luò)叢產(chǎn)生的Klotho蛋白則進(jìn)入腦脊液［11］。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，腦脊液中Klotho蛋白水平也隨年齡增長而下降，AD患者腦脊液中Klotho蛋白水平也有下降［12］。這與外周血中Klotho蛋白水平具有一致性。

細(xì)胞表面存在一些尚未鑒定出的Klotho蛋白特定受體，Klotho蛋白通過與其高親和力相結(jié)合，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)。該信號(hào)傳導(dǎo)可抑制胰島素樣生長因子1（IGF-1）受體與胰島素受體底物中酪氨酸的磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致磷脂酰肌醇激酶3與胰島素結(jié)合減少，從而抑制胰島素/IGF-1信號(hào)傳導(dǎo)［13］。而胰島素/IGF-1信號(hào)傳導(dǎo)的下調(diào)與老年癡呆相關(guān)。LABAK等［14］研究證實(shí)，抑制了腦胰島素受體及其表達(dá)的動(dòng)物，表現(xiàn)出認(rèn)知障礙和AD常見的神經(jīng)降解特征。此外，還發(fā)現(xiàn)高胰島素血癥可增加腦組織β淀粉樣肽前體蛋白（Aβ）和炎癥指數(shù)，從而促進(jìn)晚期糖化終末產(chǎn)物的形成、脂質(zhì)活性氧（ROS）的增加，嚴(yán)重危害神經(jīng)元可塑性、記憶和認(rèn)知系統(tǒng)。綜上推測(cè)，血漿Klotho蛋白水平降低，胰島素/IGF-1信號(hào)活性減弱，神經(jīng)降解、腦組織Aβ增加，ROS增加，神經(jīng)元、記憶和認(rèn)知系統(tǒng)受到損害，從而有利于AD的發(fā)生、發(fā)展。

SEMBA等［15］研究發(fā)現(xiàn)，AD患者腦脊液中Klotho蛋白水平較對(duì)照組下降。KUANG等［16］對(duì)AD模型小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，可溶性Klotho蛋白水平升高可顯著改善記憶障礙和Aβ水平，其機(jī)制與抑制IGF-1/Akt/mTOR信號(hào)通路有關(guān)。由此推測(cè)，血漿Klotho蛋白的高表達(dá)可能有益于AD的防治，但具體機(jī)制尚待研究。

腦組織及腦脊液中均可檢測(cè)到Klotho蛋白，且該蛋白具有改善認(rèn)知功能、Aβ水平等作用，但其抗衰老、改善認(rèn)知功能的具體臨床機(jī)制尚不明確。LEON等［17］通過增加外源性Klotho蛋白片段誘導(dǎo)并增強(qiáng)NMDA依賴性突觸可塑性，從而達(dá)到改善小鼠認(rèn)知功能的目的，為AD的治療提供了新的思路和方法。

綜上所述，低血漿Klotho蛋白水平與AD發(fā)病相關(guān)，監(jiān)測(cè)血漿Klotho蛋白水平對(duì)AD的預(yù)防、診斷及預(yù)后判斷有重要臨床意義。