細胞塊切片免疫組化染色對惡性胸腔積液分型診斷符合率的影響

河南省榮軍醫(yī)院（453000）許波

胸腔積液中多存在惡性腫瘤細胞，40%左右大量胸腔積液由惡性腫瘤引起，常見有肺癌、淋巴瘤、乳腺癌等，惡性胸腔積液主要表現(xiàn)為貧血、干咳、胸痛、體重下降[1]。細胞病理學在胸腔積液診斷中具有重要作用，良、惡性胸腔積液診斷多采用細胞涂片檢查，診斷惡性胸腔積液敏感度達50%～78%[2]。漿膜腔間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌間細胞形態(tài)相似，細胞涂片診斷難度大。而區(qū)分間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌具有重要意義，關系治療方案的確定。本研究以我院胸腔積液患者為研究對象，行細胞涂片、細胞塊切片、免疫組化染色檢測，觀察對惡性胸腔積液分型診斷符合率的影響，報告如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料 選取2017年3月～2019年5月我院86例胸腔積液患者，男45例，女41例；年齡21～77歲，平均（49.12±12.57）歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 入選標準 ①納入標準：根據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學檢查診斷傾向惡性；標本為胸腔積液；患者簽署知情同意書。②排除標準：其他部位惡性腫瘤。

1.3 方法

1.3.1 標本制備 抽取胸腔積液10ml，分裝在3～5個管，離心（3000r/min）10min取部分沉渣，制備蘇木精-伊紅（HE）涂片。將剩余沉渣用試鏡紙包裹，用10%福爾馬林固定液固定，經(jīng)常規(guī)處理，制備成細胞蠟塊，連續(xù)細胞切片，厚3～4μm。對細胞涂片、細胞塊切片進行HE染色、免疫組化染色。

1.3.2 HE染色結(jié)果 由2位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)生觀察細胞形態(tài)學。根據(jù)細胞形態(tài)、黏附性、核不典型性分為惡性、良性、無法肯定，良性：存在反應性增生間皮細胞，細胞形態(tài)溫和、彌散良好、存在典型性；惡性：惡性間皮瘤細胞、轉(zhuǎn)移性腺癌，細胞成團，細胞形態(tài)嚴重不溫和，核存在重度不典型性；無法肯定：細胞彌散，核存在中度或重度不典型性，或細胞成團，核存在中度或輕度不典型性。

1.3.3 免疫組化染色結(jié)果 采用免疫組織化學（SP）法，二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑購自上海雅吉生物科技有限公司，Maxvision試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司?？贵w為CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1、WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin。染色過程嚴格按照說明書操作。用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）代替一抗設置空白對照，染色切片中選擇陽性組織染色設立陽性對照。支持間皮細胞的免疫組化指標：WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin；支持肺腺癌免疫組化指標：CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1。判定標準：陽性：BerEP4、CK7、MOC-31、CEA、Desmin、CK5/6染色呈棕黃色細胞質(zhì)，WT-1、TTF-1染色細胞核呈棕黃色，Calretinin染色細胞質(zhì)、細胞核均顯色，CD15細胞質(zhì)、細胞膜染色。

1.4 觀察指標 ①對比細胞涂片、細胞塊切片的HE染色、免疫組化染色結(jié)果。②惡性胸腔積液分型診斷符合率。

1.5 統(tǒng)計學分析 用SPSS22.0分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用n（%）表示，χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 細胞涂片、細胞塊切片的HE染色、免疫組化染色結(jié)果 細胞涂片、細胞塊切片的HE染色結(jié)果對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），細胞塊切片免疫組化染色診斷胸腔積液惡性率52.33%高于細胞涂片免疫組化染色的37.21%（P＜0.05），見附表1、2。

2.2 惡性胸腔積液分型診斷符合率 確診的45例惡性胸腔積液患者中，細胞塊切片免疫組化確診惡性44例，誤診1例，診斷符合率為97.78%（44/45），其中肺腺癌36例、肺鱗癌4例、惡性間皮瘤3例，均經(jīng)肺、胸膜穿刺活檢組織學證實，淋巴瘤1例經(jīng)活檢確診為彌漫大B細胞淋巴瘤，誤診1例，經(jīng)病理組織學檢查確診為足跟部惡性黑色素瘤伴胸腔轉(zhuǎn)移。肺腺癌細胞對CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗體陽性表達率高，惡性間皮瘤細胞對WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗體陽性表達率高；細胞塊切片免疫組化染色檢測惡性胸腔積液分型診斷符合率高于細胞涂片檢測，見附表3。

3 討論

正常人胸膜腔內(nèi)存在5～15ml液體，起潤滑作用。當胸部損傷、胸膜通透性增加、壁層胸膜淋巴回流障礙時，可引起胸腔積液。滲出性胸腔積液多與胸膜惡性腫瘤、淋巴細胞異常等有關[3]。因此，需鑒別胸腔積液的良惡性。

附表1 HE染色結(jié)果[n(%)，n=86]

附表2 免疫組化染色結(jié)果[n(%)，n=86]

附表3 惡性胸腔積液分型診斷符合率

胸腔積液細胞學檢查標本采集方便，制片快速，是病理診斷的常用方法。細胞涂片HE染色觀察對積液細胞性質(zhì)判斷具有重要價值，但胸腔積液中細胞成分復雜，各種細胞形態(tài)類似，僅憑細胞涂片可能無法做出準確診斷，特別是惡性間皮瘤與轉(zhuǎn)移性肺腺癌細胞形態(tài)非常相似[4][5]。部分病理醫(yī)生僅通過觀察細胞涂片HE染色，鑒別難度大，易出現(xiàn)誤診。而惡性間皮瘤與肺腺癌鑒別對指導臨床治療具有重要作用。此外，除肺腺癌外，肺鱗癌、淋巴瘤、其他腺癌、惡性黑色素瘤等也可引起胸腔積液，鑒別難度加大，需特殊染色才可能確定轉(zhuǎn)移性腫瘤來源[6]。

黃其文等[7]研究發(fā)現(xiàn)，細胞塊切片是診斷惡性胸腔積液的有效方法，聯(lián)合免疫組化染色可為鑒別診斷肺腺癌提供依據(jù)。本研究對86例胸腔積液患者進行細胞涂片與細胞塊切片檢查，均行HE染色、SP染色，結(jié)果顯示，細胞涂片、細胞塊切片的HE染色結(jié)果對比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），細胞塊切片免疫組化染色診斷胸腔積液惡性率52.33%高于細胞涂片免疫組化染色的37.21%（P＜0.05），說明細胞塊切片免疫組化染色診斷惡性胸腔積液準確率高。本研究中細胞塊分布均勻，細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)良好，而細胞涂片分布不均勻，可能出現(xiàn)重疊，導致細胞形態(tài)模糊，結(jié)構(gòu)不清晰。細胞涂片免疫組化染色有助于胸腔積液良惡性鑒別，但涂片細胞數(shù)量不等、厚薄不均，易出現(xiàn)高背景著色，造成誤診，且陽性表達細胞缺乏對應性，影響判讀。細胞涂片免疫組化染色結(jié)果中15例無法確定良惡性。而細胞塊切片免疫組化染色細胞分布均勻，可準確判讀，且包埋細胞塊能永久性保留標本，以待日后回顧研究。

本研究還顯示，細胞塊切片免疫組化染色檢測惡性胸腔積液分型診斷符合率高于細胞涂片檢測，肺腺癌細胞對CD15、CK7、BerEP4、MOC-31、CEA、TTF-1抗體陽性表達率高，惡性間皮瘤細胞對WT-1、Calretinin、CK5/6、Desmin抗體陽性表達率高，可見，細胞塊免疫組化染色有助于判定漿膜腔積液細胞類型及性質(zhì)，是理想的細胞病理檢測方法，可能與本研究綜合多種抗體染色結(jié)果分析，消除各抗體表達差異，避免交叉反應，從而提高敏感性有關。且細胞塊制作簡單，易保存，免疫組化SP檢測簡單方便，可在基層醫(yī)院廣泛開展應用。

綜上所述，細胞塊免疫組化染色診斷惡性胸腔積液準確率高，有助于判定漿膜腔積液細胞類型及性質(zhì)，是理想的細胞病理檢測方法。