牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化的病理學改變

海秀玲姜怡鄧（通訊作者） 張效敏白曉林

（1寧夏醫科大學總醫院 寧夏 銀川750004）（2寧夏醫科大學 寧夏 銀川750004）（3寧夏回族自治區人民醫院 寧夏 銀川750000）

高血脂是最早被公認、也是最重要的動脈粥樣硬化危險因素，而近年來高同型半胱氨酸血癥是新顯現的動脈粥樣硬化危險因素，同時血管拉傷后的新生內膜增生有助于動脈粥樣硬化的形成[1]。動脈粥樣硬化是心腦血管病的病理基礎，因此，開展高同型半胱氨酸血癥的發生機制及相關的防治研究是心腦血管疾病領域的重點關注問題。內源性抗氧化劑牛磺酸、谷胱甘肽、胱氨酸、金屬硫蛋白等已經成為目前拮抗高同型半胱氨酸血癥和動脈粥樣硬化相關研究的熱點。為了進一步探究血管拉傷與動脈粥樣硬化的關系，我們以隨機平行對照的方法，嘗試采用球囊拉傷兔子腹主動脈后在高脂合并高同型半胱氨酸血癥的情況下開展此項研究，相關內容具體報告如下。

1.資料與方法

表 三組兔子的血清生化指標檢測結果數據對比

1.1 一般資料

選取30只健康雄性新西蘭大耳白兔作為分析對象，體重在2.0～2.5kg之間，平均體重為（2.13±0.37）kg，由本市的實驗動物中心提供。試劑L-蛋氨酸、牛磺酸、膽固醇由美國Sigma公司提供；同型半胱氨酸試劑盒由北京利德曼生化股份有限公司提供；氧化型低密度脂蛋白試劑盒由美國CUSABIO公司提供；球囊導管由美國Coridis公司提供；球囊擴張壓力泵由美國Coridis公司提供。

1.2 方法

30只雄性新西蘭大耳白兔先給予標準飼料適應性飼養一周后隨即分為干預組、模型組和正常組三組，每組10只。正常組給予普通家兔飼養飼料；模型組給予2%的蛋氨酸、高脂飼料，再加上球囊拉傷腹主動脈；干預組給予2%的蛋氨酸、高脂飼料和1%的牛磺酸，再加上球囊拉傷腹主動脈。高脂飼料由0.5%膽固醇、8%豬油和5%的蛋黃混合普通飼料組成。各組兔分籠飼養，自由飲水，隔周稱重，根據具體情況調整給藥劑量，連續飼養12周[2]。

對三組的大耳白兔均進行球囊拉傷腹主動脈處理。首先經兔耳緣靜脈緩慢注射濃度為3%的戊巴比妥鈉溶液，溶液的注入量根據兔子的體重而定，標準為每千克30毫克。待藥物起作用、兔子完全麻醉后進行輸液器的連接。將250ml的生理鹽水和1.0氨芐西林配制成輸液，給予緩慢靜脈滴注。在兔一側下肢腹股溝一下區域備皮，采用碘伏消毒，鋪洞巾，注射利多卡因使其局部麻醉。依次切開表皮、皮下組織，將一側的股動脈充分暴露，在解剖時注意對近側動脈分支的保護。子安動脈遠端給予結扎，用利多卡因浸潤股動脈，使其達到擴張的效果。在腹股溝韌帶下2cm處用穿刺針穿刺股動脈，將Runfhrog導入，進入長度以20cm左右為宜[3]。向球囊內推注生理鹽水，使球囊充盈，直到其壓力達到8～10大氣壓，將球囊向回拉伸至髂骨動脈，反復回拉三次以造成腹主動脈內皮損傷。將球囊吸成負壓后退出球囊，將股動脈夾閉后結扎。自兔耳緣靜脈注射肝素鈉200U抗凝。向切口內放入8萬U慶大霉素防止切口感染。最后將手術切口進行縫合。

1.3 觀察指標和相關處理方法

1.3.1 血清學檢查 在研究開始后的第0周、第2周、第12周從兔的心臟采血3ml，3000r/min離心10min，取上層清液移動到EP管，放置入冰箱保存，溫度為-80℃。甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、高同型半胱氨酸采取成批化驗的方式，在常溫融化一小時內進行檢測。

1.3.2 腹主動脈標本處理 在對30只兔子進行為期12周的喂養后，自兔耳緣靜脈注射空氣處死兔子，對其的腹主動脈進行分離，分離后截取0.5cm的新鮮組織做冰凍切片油紅O染色；截取0.5cm做透射電鏡檢查；截取1cm用濃度為10%的中性甲醛溶液固定，在24h后脫水，進行石蠟包埋，切片后做HE染色處理。剩余的組織用來做大體油紅O染色[4]。

1.4 統計學分析

本次研究所得數據均采用SPSS13.0統計學軟件進行統計學分析，計數資料用χ2檢驗，計量資料用t檢驗，以P＜0.05為有統計學意義。

2.結果

2.1 血清指標檢測結果

模型組與正常組相比，血漿TC、TG、LDL-C、HDL-C、ox-LDL、Hcy的數值均有顯著的升高（P＜0.05）；干預組與模型組相比，Hcy、HDL-C無顯著差異（P＞0.05），但TG、TC、LDL-C、ox-LDL明顯減低，差異有統計學意義（P＜0.05），具體數據見表。

2.2 各組兔子腹主動脈粥樣斑塊形成及病理切片改變結果

對照組兔子腹主動脈內膜表面光滑，平滑肌排列整齊，未著色；模型組兔子內膜明顯增厚，可見脂肪沉積形成的氣泡，可見彌漫性鮮紅色斑塊；干預組兔子內膜不平，中層細胞增生，可見隆起條紋狀紅色斑塊。

2.3 各組兔子腹主動脈脂肪浸潤結果

正常組兔子腹主動脈內皮平整，全層沒有紅油著色；模型組兔子腹主動脈內中層增厚，全層都有鮮紅色米粥樣脂滴，結構較為疏松。干預組兔子腹主動脈內中層增厚，在內膜層的細胞內可以見到細小密集的紅色脂肪顆粒。

2.4 各組兔子腹主動脈彈力纖維改變結果

正常組兔子的彈力纖維呈現整齊的排列狀；模型組兔子的內膜層彈力纖維出現增生情況，生成纖維帽，呈現紊亂的排序特點，且纖維帽以下的彈力纖維和內彈力板出現變形壞死的情況，甚至斷裂或溶解。干預組兔子的腹主動脈內中層厚度介于正常組和模型組之間，其中層彈力纖維增生，呈現紊亂的排列方式，內彈力板為完整。

3.討論

牛磺酸是一種含有磺酸基的自由氨基酸。近年來的研究發現，牛磺酸具有維持滲透壓、清除自由基、抑制脂質過氧化等生物學效應。從本文的研究來看，干預組Hcy、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）與模型組無顯著差異（P＞0.05），而甘油三酯（TG）等、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）有明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）；干預組的粥樣斑塊面積、內皮厚度和血管細胞間粘附分子1陽性細胞百分比、彈力纖維密度與模型組相比明顯減少，差異有統計學意（P＜0.05）。牛磺酸可以降低血脂和ox-LDL水平，但是并沒有降低Hcy水平，可能是高Hcy激活了血管內皮氧化應激反應、促進了ox-LDL的生成[5]。牛磺酸拮抗Hcy誘導的氧化應激反應，減少ox-LDL的生成，最終減輕AS。另一方面，牛磺酸還有顯著的降血脂作用，降低膽固醇，將膽固醇轉化為膽汁酸。牛磺酸的藥理機制之一為抗氧化應激反應。

綜上所述，牛磺酸作為一種內源性的細胞防護物質，對血清Hcy的水平沒有明顯的降低作用，但是對抑制內皮增生和平滑肌增殖遷移、降低血脂水平、促進抗氧化應激反應等方面有著良好的作用，通過這些方面起到拮抗As的目的。根據相關研究結果，采用傳統維生素等降低Hcy水平的藥物聯合牛磺酸來防治高同型半胱氨酸血癥及相關的As病變會有較好的應用前景，值得進行深入研究。

【參考文獻】

[1]王勇,袁吉祥,王磊.牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化的病理學改變[J].中國老年學,2013,33(24):6227-6229.

[2]袁吉祥,姚成立,馬云海,等.牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化[J].中國動脈硬化雜志,2012,20(5):435-439.

[3]伊桐凝,張靜生,于世家.冠心康顆粒對高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化作用及對血管炎性因子表達影響[J].遼寧中醫藥大學學報,2013(11):38-42.

[4]王晨晨.醋柳黃酮干預高同型半胱氨酸致兔動脈硬化的實驗研究[D].山東大學,2014.

[5]王曉萍,周明旺,杜改煥,等.大劑量岷當歸對高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化的影響[J].西部中醫藥,2017(7).