龍血生肌溫敏凝膠應用于失神經支配創面20例療效分析*

張曉平 羅統富 安忠誠 董黎強# 劉啟明 魏 浩 黃余亮 金圣煊

1 浙江中醫藥大學附屬第二醫院 浙江 杭州 310005

2 桐鄉市第二人民醫院 浙江 桐鄉 314500

3 杭州市富陽中醫骨傷醫院 浙江 杭州 311400

4 杭州創新中藥標準化研究所有限公司 浙江 杭州 310051

失神經支配創面屬于難愈性創面的一種類型，具有易復發、遷延不愈等特點。龍血生肌膏是我院中藥驗方外用膏劑，多年臨床使用證實其對失神經支配創面促愈合作用療效確切。然而中藥膏劑存在顆粒粗大、涂抹欠均勻等不足，影響藥物最佳療效發揮，為進一步提高龍血生肌膏原方藥物的療效，通過借助現代制藥技藝，研發其溫敏凝膠新劑型，觀察龍血生肌溫敏凝膠對失神經支配創面中神經生長因子（NGF）表達的影響及創面促愈合的作用，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：以2015年1月至2018年12月浙江中醫藥大學附屬第二醫院收治的40例截癱后肢體壓迫性潰瘍[1]患者為研究對象，采用隨機數字表法將患者分為治療組和對照組各20例。所有病例符合納入標準：因截癱后導致肢體出現壓迫性潰瘍；年齡30～65歲；潰瘍面積大小2～30cm2者；知情同意并簽署知情同意書且自愿受試。并排除：合并糖尿病且血糖控制不佳者；合并嚴重內科原發性疾病、惡病質者；長期使用類固醇激素及免疫抑制劑者；合并嚴重感染，病情危重者；癌性潰瘍或結核性潰瘍、麻風性潰瘍、梅毒性潰瘍者。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 治療方法：維持患者電解質平衡，營養支持，護理及心理干預，研究開始當天行創面徹底清創，之后按如下方法定時換藥。治療組：首先使用酒精棉球擦洗創面周緣皮膚3遍，再用0.9%生理鹽水棉球擦拭創面，擦干創面周緣皮膚，計算所需龍血生肌溫敏凝膠（由杭州創新中藥標準化研究所有限公司制備），約0.5ml/cm2用量，用2.5ml注射器抽取，均勻涂抹于創面，再用薄膜完全覆蓋創面并與引流管連接，遠端封管，密閉創面。隔2天更換1次，從引流管抽吸滲液并記錄。對照組：創緣及創面消毒方法同治療組，改用龍血生肌膏（本院藥劑科制備）涂抹創面，用量計算方法同上，之后用無菌薄膜及引流管覆蓋、密閉創面，換藥間隔同治療組。

1.3 觀察指標：分述如下。

1.3.1 創面大體觀察及滲出液評分：觀察患者創面的紅腫、肉芽生長情況，觀察滲液的性質、色澤、氣味、滲出液量，根據下肢潰瘍評分表(LUMT)滲液部分改良后進行評分，算出量化數值后進行統計學分析。

1.3.2 創面愈合率測算：在開始治療當天及治療后1周、2周、3周四個時間點的創面予以等距離拍照，將圖片掃描后通過Image Pro Plus（IPP）軟件處理[2]算出創面面積，測算創面愈合率。

1.3.3 HE染色成纖維細胞數觀察：在治療當天及治療后3周對創面組織進行取材。常規消毒后，切取大小約0.5cm×0.2cm×0.2cm創面組織標本，局部壓迫止血并再次消毒。取出組織，包埋切片后用二甲苯脫蠟，再經各級乙醇至蒸餾水洗，蘇木素染色5min，自來水沖洗5min，鹽酸乙醇分化30s，自來水浸泡15min，置伊紅液2min，自來水沖洗，常規脫水，透明，封片，最后予中性樹脂封固。

1.3.4 NGF免疫組化檢測：取材后用石蠟包埋，切片脫蠟后，放入濃度為0.1mol/L的枸櫞酸液修復液（PH=6.0）中修復，按照試劑盒操作步驟如下：用PBS漂洗5min，3次，3%H2O2消除創面組織標本內源性過氧化物酶活性，沖洗放置后擦去封閉液，分別滴加NGF一抗(均1∶50)和生物素化二抗后孵育，DAB顯色劑進行切片顯色，最后蘇木素復染，中性樹膠封片。10×40倍顯微鏡下觀察3個視野，參考免疫組織化學半定量分級將NGF陽性結果分級為：NGF≤20%（-）；20%＜NGF≤40%（+）；40%＜NGF≤60%（2+）；NGF＞60%（3+）。

1.4 統計學方法：采用SPSS 21.0軟件進行統計學處理，計量資料用±s表示，3個時間點數據采用單因素重復測量方差分析，組間采用LSD法進行兩兩比較；等級資料用秩和檢驗；P＜0.05表示有顯著性差異。

2 結果

2.1 創面大體觀察：所有病例用藥后創周皮膚均未見過敏、壞死現象。治療組肉芽從邊緣向中央生長，呈顆粒狀，大小中等，色鮮紅，輕觸易出血。對照組肉芽顆粒較治療組稍小，色淡紅，易出血。

2.2 滲出情況：治療組用藥后第2d開始有大量滲出，持續約2周后逐步減少，滲液呈淺棕黃色，性質由清稀到稠厚，無異味。對照組第3d開始有中量滲出，2周后滲出量減少，呈較稠厚的乳白色液體，無明顯異味。3個時間點兩組滲液LUMT評分情況見表2。

表2 創面滲出液評分比較（±s，分）

表2 創面滲出液評分比較（±s，分）

注：與對照組比較，*P＜0.05。

組別治療組對照組3周5.05±0.76*2.80±0.69例數20 20 1周8.40±1.05*5.35±0.93 2周6.90±0.79*3.90±0.72

2.3 創面愈合率：見表3。

表3 創面愈合率比較（±s，%）

表3 創面愈合率比較（±s，%）

注：與對照組比較，*P＜0.05。

組別治療組對照組57.77±2.26*53.39±2.05例數20 20 1周 2周 3周28.37±1.56 27.90±2.27 39.69±2.42*36.97±2.23

2.4 成纖維細胞HE染色細胞數觀察：在200倍電鏡下隨機選擇10個視野，對視野中成纖維細胞進行計數并取平均數，結果見表4。

表4 兩組成纖維細胞數量變化比較（±s，個/10HP）

表4 兩組成纖維細胞數量變化比較（±s，個/10HP）

注：與用藥前比較，#P＜0.05；與對照組比較，*P＜0.05。

組別治療組對照組175.62±14.02#*162.16±22.79#例數20 20用藥前 用藥3周55.24±6.58 53.94±5.41

2.5 NGF免疫組化檢測：見表5。

表5 NGF陽性表達信號量

3 討論

失神經支配創面屬于中醫學“瘡瘍”的范疇，因其纏綿難愈又稱為“頑瘡”。病機主要為氣血兩虛、濕毒內蘊、脈絡痹阻等。“頑瘡”病位在體表，外用藥物直接作用病變部位，故首選外用藥。“龍血生肌膏”由金槍鐵扇散化裁而來，方中主要成分地龍具有通經活絡、生肌止痛和抗血栓作用。血竭為“活血圣藥”，能活血化瘀止痛、斂瘡生肌；乳香活血，沒藥散血，皆能止痛消腫生肌，外用為粉以敷瘡瘍，能解毒消腫，生肌止痛，二藥并用，為流通經絡之要藥；黃柏主治口舌生瘡，瘡瘍腫毒。故龍血生肌膏具有較好的清熱、祛腐、通絡、生肌之效。

截癱后肢體壓迫性潰瘍因創面神經支配缺失，其愈合速度較正常創面顯著減緩。結合前期研究結果及相關文獻報道，我們知道NGF在創面愈合中扮演非常重要的角色，而在創面愈合過程中，成纖維細胞是形成肉芽組織及血管重建的基礎[3]，故將NGF的表達及成纖維細胞的計數作為創面愈合的重要指標。本臨床研究結果表明，在用藥3周過程中兩種劑型外用生肌中藥均能夠促進NGF的表達和成纖維細胞的增殖，進而加速失神經支配創面的愈合，但龍血生肌溫敏凝膠療效更優。本研究為臨床使用龍血生肌溫敏凝膠治療失神經支配創面提供了理論依據，同時體現出溫敏凝膠劑型較傳統中藥膏劑更具優勢。但失神經支配創面愈合過程是一個多因素參加的復雜過程，參與的分子及相關機制復雜，中醫藥治療失神經支配創面的療效和機理仍值得進一步深入研究。