阿爾茨海默病患者腦脊液p-Tau及α-突觸核蛋白的表達及意義

燕 燕 李艾帆

鄭州市第一人民醫(yī)院，河南 鄭州 450000

阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)多發(fā)于老年人，是一種中樞神經系統(tǒng)退行性病變，在所有癡呆類型疾病中發(fā)病率居首位，臨床上表現為進行性記憶和認知功能障礙，語言及行為能力逐漸喪失，嚴重影響患者正常生活，給家庭帶來極大負擔[1]。AD發(fā)病隱匿，病因復雜，且影響因素眾多，病情隨著時間延長而加重，尋找有意義的分子生物學標記物對于延緩AD病情發(fā)展具有重要意義。神經元結構及功能正常是維持認知功能的基礎，牛磺酸(taurine，Tau)參與合成和穩(wěn)定神經元，過度磷酸化可造成神經元纖維纏結，導致神經元和軸突變性[2]。α-突觸核蛋白是路易體的重要組成成分，參與維持各種突觸正常功能，與多種神經退行性疾病關系密切[3]。既往研究報道AD患者腦脊液中p-Tau與α-突觸核蛋白表達異常，但兩者與AD病情嚴重程度相關性的報道尚少[4]。本研究通過檢測不同病情程度AD患者腦脊液中p-Tau、α-突觸核蛋白水平，旨在分析其與AD病情程度的相關性，進一步研究AD病理生理過程，為臨床早期干預AD病情發(fā)展提供理論參考。

1 資料與方法

1．1一般資料選取2015-01—2019-08鄭州市第一人民醫(yī)院收治的AD患者149例，男79例，女70例，年齡60～87(74.59±7.61)歲。本研究所有患者檢查前均簽署知情同意書，經醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1．2納入標準AD患者納入標準：符合2011年美國國家衰老研究所和阿爾茨海默病學會發(fā)布的AD型癡呆核心臨床診斷標準[5-6]，經專業(yè)醫(yī)生診斷為AD患者，并符合：①簡易精神狀態(tài)(mini mental state examination，MMSE)量表[7]評分≤26分；②病程半年及以上；③頭顱CT或MRI檢查支持AD診斷。

1．3排除標準(1)主要表現非記憶力下降的不典型AD患者；(2)合并嚴重心、肺、腎病及烈性傳染病患者；(3)血管性癡呆、酒精性癡呆、頭部外傷引起的癡呆等其他癡呆患者；(4)精神分裂癥、情感障礙等神經系統(tǒng)疾病患者；(5)接受放化療治療的惡性腫瘤患者；(6)頭顱CT或MRI檢查發(fā)現顱內占位病變、腦血管病等影像改變患者；(7)半年內接受過抗精神病藥物治療者；(8)癲癇或帕金森病患者。

1．4方法

1．4．1 認知功能評價：采用MMSE量表對患者認知功能進行評價。根據MMSE評分將AD患者分為輕中度組(MMSE評分16～26分)93例，重度組(MMSE≤15分)56例[8]。MMSE量表包括定向力、記憶力、注意力、計算力、回憶力、語言能力和視覺空間等項目，共30分，評分越高，表明其認知功能越好。MMSE量表Cronbach's α系數為0.81，評價認知功能信效度良好。

1．4．2 腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白水平檢測：患者入院后2 d內行腰椎穿刺術，抽取腦脊液2 mL，4 ℃ 2 000 r/min(離心半徑10 cm)離心15 min取上清，按照ELISA試劑盒(上海江萊生物科技有限公司)說明書檢測腦脊液中p-Tau、α-突觸核蛋白水平。加樣后37 ℃孵育30 min，洗板；加酶標試劑，37 ℃孵育30 min，洗板；加入顯色液A、B，37 ℃孵育顯色10 min；加入終止液終止反應，用酶標儀在450 nm出讀取吸光度值，繪制標準曲線，計算樣本相應指標最終濃度。

1．4．3 臨床資料收集：收集2組AD患者臨床資料，包括性別、年齡、病程、職業(yè)、文化程度、婚姻狀況、高血壓、高脂血癥、冠心病、糖尿病、關節(jié)炎/風濕、抑郁癥、顱腦損傷史、吸煙、飲酒、體重指數(body mass index，BMI)、每周走路時間、癡呆家族史。

1．4．4 Logistic回歸分析法賦值：對可能引起AD的相關因素進行賦值：性別(女=0，男=1)，職業(yè)(腦力勞動者=0，體力勞動者=1)，文化程度(初中及以上=0，初中以下=1)，婚姻狀況(已婚=0，未婚、離異或喪偶=1)，高血壓、高脂血癥、冠心病、糖尿病、關節(jié)炎/風濕、抑郁癥、顱腦損傷史、癡呆家族史(無=0，有=1)，吸煙、飲酒(否=0，是=1)，年齡、病程、BMI、每周走路時間為連續(xù)變量，以上述因素作為自變量，以是否發(fā)生重度AD(否=0，是=1)為因變量進行Logistic回歸分析。

2 結果

2．1AD患者MMSE評分輕中度組MMSE評分(20.46±2.21)分，重度組MMSE評分(12.25±1.34)分。

2．2AD患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白水平比較重度組患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白濃度顯著高于輕中度組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2．3輕中度與重度組可能影響因素比較輕中度組與重度組男性、體力勞動者、初中以下文化程度、未婚、高脂血癥、冠心病、關節(jié)炎/風濕、抑郁癥、顱腦損傷史、吸煙、飲酒構成比及年齡、病程、BMI、每周走路時間等可能影響因素比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；重度組高血壓、糖尿病、癡呆家族史患者構成比高于輕中度組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 AD患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白水平比較

表2 輕中度組與重度組可能影響因素比較

2．4AD病情加重危險因素Logistic回歸分析經Logistic回歸分析，高血壓、糖尿病、癡呆家族史、腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白均是導致重度AD的危險因素(OR=2.077，P<0.001；OR=3.323，P<0.001；OR=2.499，P=0.002；OR=2.389，P=0.002；OR=2.492，P=0.001)。見表3。

2．5腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白與病情程度相關性經Pearson相關性分析，AD患者腦脊液中p-Tau蛋白濃度與MMSE評分呈負相關(r=-0.816，P<0.001)，α-突觸核蛋白濃度與MMSE評分呈負相關(r=-0.735，P<0.001)。

3 討論

AD是老年人認知功能衰退的主要病因，隨著人口老齡化發(fā)展，AD發(fā)病率有升高趨勢，目前尚無有效手段中斷或扭轉AD發(fā)生。引起AD危險因素較多，多數研究認為蛋白及基因改變、腦部缺血缺氧性損傷以及生活方式均與AD形成有密切關系[9-10]。正確診斷AD可有效減緩疾病發(fā)展并改善患者生存質量，對患者早期治療和預后具有重要臨床價值[11]。目前，臨床上診斷AD主要有影像學檢查、蛋白及基因檢測、行為心理評估等多種手段，對表達異常和有毒性的蛋白及基因進行分子學診斷，尤其是篩選和應用與病情嚴重程度有關的生物標記物，對輕中度AD患者盡早采取相應措施進行干預，有利于延緩病情進一步發(fā)展，提高患者身心健康及生活質量[12]。

表3 重度AD危險因素Logistic回歸分析

Tau蛋白參與AD患者神經細胞變性及記憶功能減退的發(fā)生發(fā)展過程，神經細胞內出現大量神經纖維纏結是AD的主要病理特征之一，Tau異常過度磷酸化造成堆積和沉降，引起神經纖維纏結，導致神經元變性和死亡，是引起AD的重要原因之一[13]。α-突觸核蛋白基因定位于第4號染色體，是一種中樞神經系統(tǒng)突觸前表達的可溶性蛋白質，與多種神經退行性疾病關系密切。臨床研究顯示α-突觸核蛋白低聚物有誘導有毒Tau蛋白低聚物形成的作用，兩者相互協(xié)同，最終形成纖維淀粉樣結構，AD患者淀粉樣斑塊中存在α-突觸核蛋白，可與細胞外β淀粉樣蛋白共同促進沉淀[14-15]。本研究重度組患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白濃度較輕中度組顯著升高，提示p-Tau、α-突觸核蛋白與AD進展密切相關。SHI等[16]研究發(fā)現輕度認知障礙患者血小板中p-Tau水平顯著高于正常人。RADANOVIC等[17]認為癡呆癥患者腦脊液p-Tau水平與其認知水平具有相關性，與本研究AD患者腦脊液p-Tau異常升高結果一致。α-突觸核蛋白參與認知功能受損過程，動物實驗研究表明海馬α-突觸核蛋白增多引起慢性腦低灌注大鼠學習記憶能力等認識功能受損[18]。AD患者腦脊液α-突觸核蛋白水平與p-Tau呈正相關，兩者組合對于早期診斷AD準確性較高[19]。p-Tau及α-突觸核蛋白在腦脊液中的表達水平與AD患者認知功能障礙具有相關性，與本研究結果一致，進一步提示p-Tau及α-突觸核蛋白參與AD進展過程。

本研究經Logistic回歸分析顯示高血壓、糖尿病、癡呆家族史、腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白均為重度AD的危險因素，提示多種危險因素與重度AD有關，研究AD的危險因素可以為針對性預防和盡早干預工作提供科學依據。AD病因復雜，多種危險因素均可造成認知功能減退，其中蛋白異常是引起認知障礙的主要原因之一。研究顯示AD患者腦脊液p-Tau水平顯著升高，可以作為AD進展速度的標記物[20]。KRANCE等[21]研究顯示AD患者腦脊液p-Tau濃度與認知水平相關，p-Tau可預測患者認知水平下降程度，與本研究中重度組腦脊液p-Tau蛋白濃度高于輕中度組結果一致，檢測腦脊液p-Tau水平對于早期識別AD，盡早干預延緩病情發(fā)展至關重要。α-突觸核蛋白可誘導和促進Tau磷酸化，與p-Tau相互促進聚集，加劇患者認知障礙，進一步表明患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白濃度異常升高與AD病情嚴重程度密切相關，濃度越高，病情越嚴重[22-23]。本研究還顯示高血壓、糖尿病及癡呆家族史是AD重癥的危險因素，與既往研究結果一致，表明高血壓、糖尿病史及家庭遺傳因素均可加重AD病情[23-28]。此外，本研究Pearson相關性分析發(fā)現患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白水平與MMSE評分呈負相關，進一步提示p-Tau、α-突觸核蛋白與AD病情嚴重程度具有相關性，對早期診斷AD具有積極作用。

腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白是導致重度AD的危險因素，與AD發(fā)展過程密切相關[29-30]，隨AD病情加劇，患者腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白水平隨之升高[31-33]，臨床應早期加強監(jiān)測腦脊液p-Tau、α-突觸核蛋白水平，盡早干預患者認知狀況，延緩疾病進展。