MMP-11蛋白在不同類型乳腺癌腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及預(yù)后相關(guān)性研究

楊小蓉 彭彬

【摘要】 目的：探討MMP-11蛋白在不同病理類型乳腺癌中的表達(dá)差異及MMP-11蛋白對(duì)患者預(yù)后的影響。方法：回顧性分析筆者所在醫(yī)院2012年1月-2013年1月乳腺外科接受治療的乳腺癌患者150例，對(duì)患者癌組織和癌旁組織進(jìn)行病理切片，免疫組化檢測(cè)MMP-11蛋白的表達(dá)情況，收集患者的臨床資料和5年隨訪情況，分析MMP-11與臨床資料的相關(guān)性，MMP-11在不同類型乳腺癌中的表達(dá)，考察MMP-11對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響。結(jié)果：MMP-11蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì);乳腺癌組織MMP-11蛋白陽(yáng)性率高于乳腺癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.99，P<0.05）;臨床分期Ⅲ期患者M(jìn)MP-11陽(yáng)性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.702，P<0.01），Person相關(guān)性分析顯示，臨床分期與MMP-11陽(yáng)性率呈正相關(guān)（r=0.919，P<0.05）;不同乳腺癌病理分型MMP-11陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=59.04，P<0.01）;MMP-11陽(yáng)性患者5年無(wú)病生存率顯著高于MMP-11陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.64，P<0.05）。結(jié)論：MMP-11蛋白可作為乳腺癌浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的潛在檢測(cè)指標(biāo)，MMP-11對(duì)于預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后具有一定意義。

【關(guān)鍵詞】 MMP-11蛋白 乳腺癌 預(yù)后 相關(guān)性

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.13.027 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2020）13-00-04

Study on Expression of MMP-11 Protein in Different Types of Breast Cancer Cells and Its Prognostic Correlation/YANG Xiaorong， PENG Bin. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（13）： -69

[Abstract] Objective： To investigate the difference of MMP-11 protein in different pathological types of breast cancer and the effect of MMP-11 protein on the prognosis of patients. Method： A retrospective analysis was made on 150 breast cancer patients treated in our hospital from January 2012 to January 2013. Paraffin sections were made on the cancer tissues and adjacent tissues. The expression of MMP-11 protein was detected by immunohistochemistry. The clinical data and 5-year follow-up were collected and analyzed. The correlation between MMP-11 and clinical data， the expression of MMP-11 in different types of breast cancer were analyzed， the effect of MMP-11 on the prognosis of breast cancer patients was investigated. Result： MMP-11 protein was mainly expressed in cytoplasm. The positive rate of MMP-11 protein in breast cancer tissues was higher than that in adjacent tissues， the difference was statistically significant （字2=4.99， P<0.05）. The positive rate of MMP-11 in stage Ⅲ patients was higher than that in stage Ⅰ-Ⅱ patients， the difference was statistically significant

（字2=6.702， P<0.01）. The Person correlation analysis showed that the clinical stage was positively correlated with the positive rate of MMP-11 （r=0.919， P<0.05）. There was significant difference in positive rate of MMP-11 among different pathological types of breast cancer （字2=59.04， P=0.01）. The 5-year disease-free survival rate of MMP-11 positive patients was higher than that of MMP-11 negative patients， the difference was statistically significant （字2=4.64， P<0.05）. Conclusion： MMP-11 protein can be viewed as a potential indicator for invasive ductal cancer. MMP-11 protein has a certain significance in predicting the prognosis of breast cancer patients.

[Key words] MMP-11 protein Breast cancer Prognosis Correlation

First-authors address： Chongqing Yunyang Peoples Hospital， Chongqing 404500， China

乳腺癌是女性最為常見的癌癥之一，而且目前正逐年增加。2018年全球新增乳腺癌患者約210萬(wàn)例[1]，而我國(guó)可達(dá)到約37萬(wàn)左右，其中死亡10萬(wàn)。乳腺癌晚期發(fā)生轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，對(duì)乳腺癌的早期診斷可顯著改善患者的治療效果[2]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，乳腺癌的診斷評(píng)價(jià)不只參考腫瘤大小、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等，通過(guò)結(jié)合生物標(biāo)志物的檢測(cè)，可更準(zhǔn)確反映患者的臨床狀況，有助于對(duì)患者的個(gè)體化治療[3]，目前有CA125、CA153、CA199、CEA等標(biāo)志物均可用于乳腺癌的診斷和評(píng)價(jià)[4]。MMP-11是一種基質(zhì)金屬蛋白酶，與癌癥的發(fā)生、發(fā)展高度關(guān)聯(lián)，如在胃癌、乳腺癌、胰腺癌均可見高表達(dá)[5]。本研究考察MMP-11在不同類型乳腺癌腫瘤中的表達(dá)情況，分析MMP-11表達(dá)對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響，探討MMP-11在乳腺癌檢測(cè)、診斷中的臨床價(jià)值，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2012年1月-2013年1月在筆者所在醫(yī)院乳腺外科接受治療的150例乳腺癌患者，對(duì)患者癌組織和癌旁組織進(jìn)行病理切片。納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)病理診斷確定為乳腺癌;接受乳腺癌根治術(shù)治療;病理組織樣品保存良好;患者臨床資料完整;接受5年隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：失訪;患有乳腺癌以外乳腺組織疾病;患有其他惡性腫瘤。患者年齡30～78歲，平均（48.2±23.5）歲;TNM分期Ⅰ期患者30例，Ⅱ期患者84例，Ⅲ期患者36例;病理分化程度Ⅰ級(jí)54例，Ⅱ級(jí)52例，Ⅲ級(jí)44級(jí);ER陽(yáng)性患者104例，ER陰性患者46例;PR陽(yáng)性患者86例，PR陰性患者64例;HER2陽(yáng)性患者58例，HER2陰性患者92例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者65例，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者85例。腫瘤Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞占比≤14%患者48例，腫瘤Ki-67陽(yáng)性細(xì)胞占比>14%患者102例。

1.2 主要試劑和儀器

DAB顯色試劑盒（南京建成生物工程研究所）;兔MMP-11多克隆抗體（生工生物工程股份有限公司）;蘇木素（碧云天生物技術(shù)有限公司）;組織切片機(jī)（德國(guó)萊卡）;CX23光學(xué)顯微鏡（日本奧林巴斯）;組織脫水機(jī)（德國(guó)萊卡）。

1.3 方法

組織樣本免疫組化染色：將組織樣本石蠟塊4 μm切片，貼片于多聚賴氨酸預(yù)處理的載玻片，60 ℃烤片30 min，脫蠟復(fù)水（二甲苯15 min-二甲苯5 min-無(wú)水乙醇5 min-95%乙醇5 min-85%乙醇5 min-75%乙醇5 min-蒸餾水5 min）。抗原修復(fù)，10 mmol/L pH 6.0檸檬酸緩沖液煮沸30 min。3% H2O2處理10 min去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。兔MMP-11多克隆抗體（1：1 000）4 ℃過(guò)夜孵育。HRP二抗孵育30 min，PBS潤(rùn)洗

3次。DAB顯色3 min，PBS清洗3次。蘇木精伊紅復(fù)染1 min，PBS清洗3次。1%酒精分化，PBS返藍(lán)。梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，觀察。

每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行拍片，MMP-11表達(dá)評(píng)分=細(xì)胞占比評(píng)分×染色強(qiáng)度評(píng)分。染色強(qiáng)度評(píng)分：0分，無(wú)著色;1分，淺黃色;2分，黃色;3分，黃褐色。細(xì)胞占比評(píng)分：0分，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞;1分，陽(yáng)性細(xì)胞占比1%～24%;2分，陽(yáng)性細(xì)胞占比25%～49%;3分，陽(yáng)性細(xì)胞占比50%～74%;4分，陽(yáng)性細(xì)胞占比75%～100%。MMP-11表達(dá)評(píng)分<8分為陰性，MMP-11表達(dá)評(píng)分≥8分為陽(yáng)性[6]。

采集患者臨床資料。通過(guò)電話或者門診對(duì)患者進(jìn)行隨訪。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗(yàn)，相關(guān)分析分析采用Person相關(guān)性分析，生存率比較采用Log-Rank分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌旁組織和乳腺癌組織中MMP-11蛋白陽(yáng)性率比較

MMP-11蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核未見染色，見圖1。乳腺癌組織中MMP-11蛋白陽(yáng)性率為72.0%，乳腺癌旁組織中MMP-11蛋白陽(yáng)性率為23.0%，乳腺癌組織中MMP-11蛋白陽(yáng)性率高于乳腺癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.99，P<0.05），見表1。

2.2 乳腺癌組織MMP-11與臨床資料的相關(guān)性

不同年齡和病理分化程度、ER、PR、HER2、Ki-67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者M(jìn)MP-11表達(dá)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者M(jìn)MP-11陽(yáng)性率為66.7%，臨床分期Ⅲ期患者M(jìn)MP-11陽(yáng)性率為88.9%，臨床分期Ⅲ期患者M(jìn)MP-11陽(yáng)性率高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=6.702，P<0.01），Person相關(guān)性分析顯示，臨床分期與MMP-11陽(yáng)性率呈正相關(guān)（r=0.919，P<0.05），見表2。

2.3 MMP-11在不同類型乳腺癌中的表達(dá)

浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌97例，MMP-11陽(yáng)性率為92.8%，單純癌39例，MMP-11陽(yáng)性率為41.0%，髓樣癌10例，MMP-11陽(yáng)性率為20.0%，其他類型癌4例，MMP-11陽(yáng)性率為0，不同乳腺癌病理分型MMP-1蛋白陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=59.04，P<0.01），見表3。

2.4 MMP-11對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響

150例患者5年無(wú)病生存率為88.0%（132/150），MMP-11陽(yáng)性5年無(wú)病生存率為85.1%（92/108），MMP-11陰性5年無(wú)病生存率為95.2%（40/42）。Log-Rank分析顯示，MMP-11陽(yáng)性患者5年無(wú)病生存率顯著高于MMP-11陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.64，P<0.05），見圖2。

3 討論

乳腺癌作為女性常見惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增加。隨著近年來(lái)醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，治療理念從循證醫(yī)學(xué)向精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)發(fā)展，乳腺癌的治療從外科根治術(shù)向內(nèi)分泌治療、放射治療、生物治療等綜合治療方式發(fā)展[7]。乳腺癌的精準(zhǔn)治療使乳腺癌的治療更加個(gè)體化，如針對(duì)HER2過(guò)表達(dá)的乳腺癌患者采用曲妥珠單抗可產(chǎn)生更為顯著的治療效果[8]。因此，尋找新的乳腺癌標(biāo)志物或者治療靶點(diǎn)具有顯著的臨床意義。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）是一類鋅依賴的蛋白水解酶，具有降解細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的活性。在惡性腫瘤中，MMP蛋白的活性可影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[9]。MMP-11又稱基質(zhì)裂解素3，MMP-11在腫瘤中可發(fā)揮雙重作用，既可通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡增強(qiáng)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移活性，另一方面在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中又可抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移[10]。目前研究顯示胃癌、乳腺癌、胰腺癌中均可見MMP-11的高表達(dá)，與腫瘤的分期、預(yù)后和復(fù)發(fā)均有一定關(guān)聯(lián)性[11]。本研究中比較了癌癥組織和癌旁組織的MMP-11表達(dá)差異，結(jié)果顯示癌癥組織高表達(dá)MMP-11，這也和目前大部分研究一致[12]。在對(duì)MMP-11與臨床資料的相關(guān)性研究中各文獻(xiàn)報(bào)道不一，有研究報(bào)道MMP-11與絕經(jīng)狀態(tài)、ER有關(guān)[13]，另有研究報(bào)道MMP-11與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)[14]，而本研究發(fā)現(xiàn)MMP-11與臨床分期具有一定的相關(guān)性，臨床分期反映了惡性腫瘤的嚴(yán)重程度和受累范圍，該結(jié)果表明MMP-11可在一定程度反應(yīng)乳腺癌的惡性程度。

乳腺癌按WHO組織病理學(xué)分類可分為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、單純癌、髓樣癌、黏液癌和乳頭狀癌，其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌為最為常見類型，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌惡化程度較高[15]。本研究中發(fā)現(xiàn)各類乳腺癌中MMP-11的表達(dá)具有差異性，其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌MMP-11陽(yáng)性率最高，可達(dá)到92.8%，表明MMP-11可能是乳腺癌浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的一種特異性指標(biāo)。在不同的癌癥中均有MMPs的表達(dá)和預(yù)后的相關(guān)性研究，MMP-11高表達(dá)與食管癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌的不良預(yù)后有關(guān)[16-17]，在本研究中取得了類似的結(jié)果MMP-11陽(yáng)性患者的5年無(wú)病生存率顯著低于MMP-11陰性患者。

綜上所述，MMP-11可作為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的潛在檢測(cè)指標(biāo)，MMP-11對(duì)于預(yù)測(cè)乳腺癌患者的預(yù)后具有一定的意義。但MMP-11如何在乳腺癌中作用機(jī)制和機(jī)制尚不明確，有待進(jìn)一步明確。

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（收稿日期：2020-01-07） （本文編輯：馬竹君）