新疆鐵門關地區犢牛腹瀉流行病學調查

張 偉，孫 力，覃 杰

(1.新疆生產建設兵團第二師27團，新疆 鐵門關 841005;2.新疆生產建設兵團第二師31團畜牧獸醫站,新疆 尉犁 841500;3.新疆生產建設兵團第二師畜牧獸醫工作站，新疆 鐵門關 841005)

犢牛腹瀉是犢牛飼養過程中的一種常見病，一年四季均可發生，尤其以冬季和早春多發。犢牛腹瀉時引起機體大量體液喪失，導致脫水、酸中毒、電解質失衡，嚴重時可導致死亡。引起犢牛腹瀉的病因很多，可由病原體、飼養管理、應急等因素引起，常見的病原體為細菌、病毒和寄生蟲[1]。本試驗取腹瀉病(死)犢牛的臟器、血樣和糞便進行細菌、病毒、寄生蟲的檢測，以期為犢牛腹瀉的防治提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 被檢樣品 2017-2018年間，分別在鐵門關地區12家規模牛場和21家散養戶采集腹瀉犢牛臟器(肝、肺、心、脾和腎)、深部直腸糞便以及相應的血清樣品(采集前不對腹瀉犢牛進行任何針對性治療和免疫)，各114份。其中肉牛品種為本地雜交黃牛、奶牛為黑白花奶牛。

1.2 主要試劑 主要培養基:普通營養肉湯培養基、普通瓊脂培養基、麥康凱瓊脂培養基、血瓊脂培養基、脫纖維羊血。輪狀病毒ELISA抗原檢測試劑盒，購自武漢純度生物技術有限公司。冠狀病毒抗原、病毒性腹瀉-黏膜病抗原和副結核抗體ELISA檢測試劑盒，均購自北京愛德士元享生物科技有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 細菌分離鑒定 將采集的臟器樣品按照常規劃線分離細菌的方法接種于普通營養瓊脂、血平板培養基上，于37 ℃細菌恒溫培養箱中培養18～24 h，挑取單個菌落純化培養后進行生化鑒定[2]。

1.3.2 血清抗體和糞便抗原檢測 副結核、冠狀病毒、輪狀病毒、病毒腹瀉-黏膜病ELISA檢測試劑盒分別檢測副結核抗體、冠狀病毒抗原、輪狀病毒抗原、病毒腹瀉-黏膜病抗原，具體操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.3.3 寄生蟲檢測 隱孢子蟲的檢測[3]：糞樣置于燒杯中，加水，攪勻。經糞篩過濾于錐形量杯中，加水稀釋近滿。自然沉淀60 min后棄上清液，留糞渣(內含少量水份)加入離心管中，1 000 g離心10 min。棄去上清，留下管底糞渣。加飽和白糖液于離心管中，攪動管底沉渣，1 000 g再離心10 min，糞渣下沉，卵囊即漂浮于表面用自制的鐵絲環(r=0.7 cm)醮取液膜，置400倍光學顯微鏡下觀察，并測量卵囊大小。球蟲檢測[4]：取4 ℃保存的糞樣2 g,放入50 mL燒杯中,加入30 mL飽和食鹽水,充分攪拌,用糞篩和漏斗將溶液篩入青霉素瓶中,漂浮約20 min。將清潔的載玻片在凸起后的液面上輕輕觸一下,迅速翻轉,蓋上蓋玻片,置顯微鏡下觀察。

1.3.4 數據處理：運用統計軟件SPSS 19.0軟件對數據進行分析。

2 結果

2.1 主要病原的檢出率 沙門菌檢出率最高達到42.1%，其次為大腸桿菌檢出率達到38.6%，再次為病毒性腹瀉-黏膜病檢出率為24.6%。其中沙門菌和大腸桿菌的檢出率顯著高于病毒性腹瀉-黏膜病病毒、輪狀病毒、冠狀病毒、隱孢子蟲和球蟲的檢出率。輪狀病毒、冠狀病毒、隱孢子蟲、球蟲檢出率差異不顯著。肉牛和牦牛的大腸桿菌、沙門菌檢出率顯著高于輪狀病毒、冠狀病毒、病毒性腹瀉-黏膜病病毒、隱孢子蟲和球蟲檢出率。奶牛病毒性腹瀉-黏膜病病毒和輪狀病毒檢出率顯著高于冠狀病毒、隱孢子蟲和球蟲檢出率。結果見表1。

表1 主要病原的檢出率 (%)

2.2 細菌的分離鑒定 引起犢牛腹瀉的細菌主要為沙門菌和大腸桿菌，檢出率分別為42.1%和38.6%，彎曲桿菌和副結核檢出率較低，分別為2.6%和4.4%。其中肉牛、牦牛的沙門菌、大腸桿菌檢出率顯著高于奶牛的檢出率。結果見表2。

表2 細菌檢測結果

2.3 病毒的檢測 輪狀病毒檢出率21.9%，冠狀病毒檢出率14.0%，病毒性腹瀉-黏膜病檢出率24.6%。奶牛病毒性腹瀉-黏膜病、冠狀病毒和輪狀病毒檢出率均顯著高于肉牛和牦牛的檢出率。結果見表3。

表3 病毒檢測結果

2.4 寄生蟲的檢測 隱孢子蟲檢出率14.0%，球蟲檢出率13.2%。肉牛和牦牛隱孢子蟲檢出率顯著高于奶牛的檢出率，牦牛球蟲檢出率顯著高于肉牛和奶牛的檢出率。結果見表4。

表4 寄生蟲檢測結果

3 討論

3.1 牛腹瀉病因復雜，但主要有兩個方面:一是病原性腹瀉，由病毒、細菌或寄生蟲引起；二是非傳染性腹瀉，由營養因素及飼養管理引起。本試驗中，有3頭牛樣品未檢測到任何病原，可能為非傳染性腹瀉。奶牛病毒性腹瀉-黏膜病檢出率與郭芙莉等[5]檢測結果基本一致。牛球蟲檢測結果與庫爾班·吾甫爾檢測結果[6]差異較大，可能因為本試驗抽檢的牛場近期驅過蟲有關。本文對鐵門關地區11個縣市腹瀉的奶牛、肉牛和牦牛進行采樣檢測，均發現病毒、細菌和寄生蟲感染。說明犢牛腹瀉病情復雜，給臨床診斷與防治帶來了一定的困難。

3.2 奶牛主要以病毒感染為主，肉牛和牦牛主要以細菌感染為主。這可能與奶牛場大量使用抗生素，導致細菌減少，而牦牛、肉牛主要以放牧為主，抗生素使用較少有關。

3.3 犢牛腹瀉發生在6月齡以內,某些腹瀉甚至發生在7日齡以內。新生畜會有一定的母源抗體殘留，采用檢測抗體的方法不能排除母源抗體的干擾，故本試驗通過檢測糞便中的病毒抗原方法(副結核除外)檢測病毒。因廠家原因只購買到副結核抗體檢測試劑盒，所以對檢測出副結核抗體的犢牛的母牛進行副結核抗體的檢測發現都為陰性，排除了母源抗體干擾。