使用泰萬菌素治療雞胚中雞滑液支原體的效果試驗

韓相敏，文 麗，高俊鋒，馬晶晶，吳碧清，賴 志，張 江，胡思順

(1.上海創宏生物科技有限公司，上海 松江 201619；2.浙江伊科拜克動物保健品有限公司，上海 長寧 201101；3.上海農林職業技術學院農業生物與生態技術系，上海 松江 201699；4.華中農業大學動物醫學院，湖北 武漢 430070)

雞滑液支原體(Mycoplasmasynoviae,MS)是危害世界養禽業的一種重要支原體，其特征為關節、腱鞘和腳掌腫脹，并使產蛋雞產蛋量下降，蛋品質以及孵化率降低[1]。MS可感染雞和火雞以及其他多種禽類，呈急性或慢性經過，多數表現為亞臨床癥狀的呼吸道感染以及關節炎和傳染性滑膜炎的發生，導致生長發育遲緩及胴體降級，甚至引起免疫抑制[2]。MS不僅可以通過接觸被污染的設備和空氣進行水平傳播，同時也可以通過種蛋進行垂直傳播[3]。Feberwee A等在對荷蘭蛋雞和肉雞進行血清監測時發現，該場的MS感染陽性率表現為商品代雞群高于父母代，父母代高于祖代[4]，說明垂直傳播是MS危害養禽業的主要方式，因此切斷MS垂直傳播對于控制MS感染，建立無MS禽群具有重要意義。

本試驗嘗試使用藥物控制種蛋中MS的數量，探索MS凈化措施。前期研究表明，泰萬菌素對雞滑液支原體有效，最小抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC)為0.008 μg/mL；5～7日齡SPF雞胚感染MS后，使用50 MIC的泰萬菌素作用5 d對MS的抑制率為70%[5]。本試驗將MS感染15～16日齡雞胚，并對感染后雞胚注射泰萬菌素，根據試驗組和用藥組雞胚的健雛率及出殼雛雞肺臟MS的感染情況，確定泰萬菌素治療雞胚中MS的效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 SPF雞胚 孵化至15日齡，購自梅里亞維通實驗動物技術有限公司。

1.1.2 毒株 MS標準株WVU1853，試驗前復蘇培養，并測定其變色單位(Color changing units,CCU)。

1.1.3 藥物制備 泰萬菌素和泰妙菌素，均購自浙江伊科拜克動物保健品有限公司。使用前進行溶解，并過濾除菌。

1.2 方法

1.2.1 MS感染 用無菌生理鹽水將制備好的支原體培養物稀釋至106.0CCU/0.1 mL，經胚體接種15日齡SPF雞胚，0.1 mL/枚。同時取SPF雞胚58枚不接種MS。

1.2.2 藥物接種 接種后24 h，在接種MS的雞胚中各取32枚，分別從同一部位注射接種4 μg泰萬菌素、0.4 μg泰萬菌素、4 μg泰妙菌素和0.4 μg泰妙菌素作為用藥組，同時取32枚不接種藥物作為MS對照組；在不接種MS的SPF雞胚中各取12枚分別接種4 μg泰萬菌素、0.4 μg泰萬菌素、4 μg泰妙菌素和0.4 μg泰妙菌素作為藥物對照組，另取10枚接種生理鹽水作為空白對照組，接種后將SPF雞胚置于孵化器中繼續孵化至出殼。

1.2.3 入孵蛋健雛率統計 統計出殼雛的發病情況。出殼雛發病指：雛雞站立不穩、關節腫脹、偏癱、劈叉或死亡。出殼后觀察5 d，統計各組雛雞健活數，比較入孵蛋健雛率(入孵蛋健雛率=健雛數/入孵數×100%)。

1.2.4 接種低劑量MS試驗 用無菌生理鹽水將制備好的支原體培養物稀釋至105.0CCU/0.1 mL，并按照1.2.1～1.2.3進行試驗和統計入孵蛋健雛率。

1.2.5 雛雞肺臟支原體檢測 于出殼后第5天，在接種低劑量MS的用藥組和對照組中隨機取5只雛雞，處死后取一側肺臟，分別加入1 mL培養基進行勻漿，取勻漿液2 000 r/min離心2 min，取100 μL上清液加入到預先加有支原體培養物的96孔細胞培養板，再2倍倍比稀釋至第8孔。根據培養物顏色變化判定結果。

2 結果

2.1 接種高劑量MS試驗結果 將支原體以106.0CCU感染雞胚，雛雞出殼后5 d，根據健活數統計入孵蛋健雛率，見表1。結果顯示，MS+泰萬菌素4 μg組與MS對照組相比差異顯著(P<0.05)，且MS+泰萬菌素組效果優于MS+泰妙菌素組。

表1 MS以106.0 CCU接種雞胚各組健雛率統計結果Table 1 Statistical results of the rate of healthy chicks in each group with inject of 106.0 CCU of MS

2.2 接種低劑量MS試驗結果 將支原體以105.0CCU感染雞胚，小雞出殼后5 d，見表2。結果顯示，用藥組入孵蛋健雛率高于MS組，且MS+泰萬菌素組效果優于MS+泰妙菌素組。弱雛表現為劈叉、關節腫脹、無法站立。

表2 MS以105.0 CCU接種雞胚健雛率統計結果Table 2 The incubation rate of healthy chicks in each group with inject of 105.0 CCU of MS

2.3 肺臟支原體檢測結果 將各組孵出的雛雞肺臟進行支原體檢驗，見表3，MS對照組雛雞肺臟支原體含量為24.8±0.84CCU/0.1 mL，MS+藥物組雛雞肺臟支原體含量為21.6～22.0CCU/0.1 mL，低于MS組，且差異顯著(P<0.05)。

表3 雛雞肺臟支原體檢測結果Table 3 Statistical results of the content of MS in lungs

3 討論

MS在國內流行呈逐年上升的趨勢。近幾年，山東、河南、江蘇等地包括商品蛋雞、商品肉雞、種公雞、蛋種雞等各品種、各日齡的雞均有發病[6]。流行病學調查顯示，MS的流行與種蛋污染關系密切相關。有學者認為，MS對養殖造成的經濟損失可能是繼2007-2008年雞淋巴細胞白血病之后，又一垂直傳播、嚴重影響養雞生產的傳染病，其造成的經濟損失不亞于雞淋巴細胞白血病，應引起業界的重視[7]。為了嘗試使用藥物控制MS垂直傳播，本試驗將MS分別以106.0CCU和105.0CCU接種15日齡SPF雞胚，結果證實，用藥組入孵蛋健雛率均高于對照組，且MS+泰萬菌素組效果優于MS+泰妙菌素組，這表明泰萬菌素對雞胚中的支原體有抑制作用，可以提高入孵蛋健雛率。但是由于雞胚在15～16日齡這個時期胚盤的呼吸方式由絨毛尿囊膜吸收轉為肺呼吸，處于特殊的生理時期，故此時胚胎容易死亡[8]。本試驗結果顯示，藥物對照組和生理鹽水對照組雞胚出殼率較低，這可能與選擇15～16日齡開孔并注射藥物，導致雞胚生理變化較大，最終影響雞胚孵化率。

MS污染種蛋孵化出的雛雞，一般發病較快，1周左右可通過接觸傳染。為了評價MS感染雛雞傳播MS的風險，試驗中測定雛雞肺臟中MS的含量。用藥組雛雞肺臟支原體含量遠低于MS對照組，表明使用泰萬菌素對被感染的種蛋進行治療可減少雛雞肺臟支原體含量，對種雞場的凈化MS具有一定的指導作用，盡管2種藥物均未能完全清除胚內的MS。這可能與MS可在雞胚中快速增殖的特性和藥物的作用劑量以及藥物在胚體中的藥物動力學有關。