野生中華獼猴桃種子萌發的最佳條件

龍云樹，楊榮萍， 張應華，劉自貴，張國平，吳興恩*

(1.云南農業大學， 云南 昆明 650201； 2.昭通市魯甸縣農業技術推廣中心， 云南 昭通 657100)

獼猴桃是獼猴桃科(Actindiaceae)獼猴桃屬(Actinidia)雌雄異株多年生漿果類木質落葉藤本果樹，又稱陽桃、狐貍桃、藤梨、木子、毛木果、奇異果和麻藤果等，富含高量維生素C、優質膳食纖維和多種微量元素，并具有重要的藥用價值，享有水果之王的美稱，是當下競相發展的重要新興果品之一[1-2]。據統計，全世界獼猴桃屬植物共有54個種，21個變種，75個分類單元，52個種分布在中國，其中云南有45種，10種為云南特有[3]，充分展現了云南最為豐富的獼猴桃屬物種資源。但云南獼猴桃產業也存在特色品種缺乏、地區優勢不突出、栽培品種較單一和品種結構優化緩慢等產業發展現狀，未發揮云南作為國內野生獼猴桃資源最豐富地區所具備的栽培、育種、品種改良等優勢[4]。李坤明等[5-8]研究表明，野生獼猴桃具有一些優異的資源如紅肉、紫果、光滑無毛、矮化、抗病等是選育新品種、新類型的原始材料，并且野生獼猴桃在其自然環境下生長，有其特定的優良基因可利用，但多省已出現野生獼猴桃瀕危且我國對野生獼猴桃的基礎性研究工作不夠。野生獼猴桃的花期和果期不同，且生長于深山，加上人為的破壞等因素使野生獼猴桃變得難以取材研究，所以野生獼猴桃的繁殖保存尤為重要，而野生中華獼猴桃(WildActinidiachinensis)在云南多地均有分布、結實率高、種子多、品質良好且為優良的砧木。種子萌發有利于野生獼猴桃的繁殖保存、實生選種，為后續的利用與研究提供材料。獼猴桃種子的自然萌發率較低，且萌發受多因素影響，如光照、溫度、水分、種皮限制、休眠性等。提供適宜的萌發條件促進種子萌發是研究種子萌發的重點。屈德洪等研究[9-16]表明，赤霉素浸泡、變溫培養、低溫層積、低溫冷藏處理等可有效促進獼猴桃種子的萌發，而沙擦處理和激動素(KT)對狗棗獼猴桃種子萌發影響不顯著，萌發條件的探究多以單因素進行，且溫水浸種的時間不同。結合前人的研究，以野生中華獼猴桃種子為試材，在變溫培養條件下探究溫水浸種時間、赤霉素濃度、基質和珍珠巖不同配比的萌發床、低溫層積時間與赤霉素濃度組合對野生中華獼猴桃種子萌發的影響，以獲得野生中華獼猴桃種子萌發的最佳條件，為野生中華獼猴桃的種苗保存、利用提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

野生中華獼猴桃種子：2018年10月在云南省昭通市魯甸縣文屏鎮安國村采集，待完成后熟將其剝皮取種后置于細篩中搓洗直到種子干凈，常溫晾干后置于實驗室備用。

藥品：赤霉素(上海源葉生物科技有限公司)、育苗基質為ZH-品氏基質。

1.2 方法

試驗于2018年11月至2019年4月在云南省滇臺特色農業產業化工程研究中心進行。

1.2.1 赤霉素濃度和溫水浸泡時間 野生獼猴桃種子在45℃水溫下，設置4個浸種時間：0 min、20 min、40 min、60 min，7個赤霉素濃度：0 mg/L、150 mg/L、300 mg/L、450 mg/L、600 mg/L、750 mg/L、900 mg/L，共28個處理。每個處理4次重復，每個重復50粒種子。溫水浸種后赤霉素處理24 h，再用蒸餾水沖洗4～5次，置于含雙層濕潤濾紙的培養皿中。在25℃下光照16 h，18℃下黑暗8 h的培養箱中培養。試驗期間保持濾紙濕潤，萌發計數以胚根2 ～3 mm開始，以7 d內不再發芽為最終數據。

發芽率=發芽種子數÷供試種子數×100%

發芽勢=到達峰值時發芽種子數÷供試種子數×100%。

1.2.2 濾紙與珍珠巖+育苗基質 稱取8 g的種子于45℃溫水中浸泡60 min，取下層種子于600 mg/L的赤霉素溶液中浸泡24 h，再用蒸餾水沖洗4～5次。將種子置于7個不同類型的培養皿中培養，每個處理3個重復，每個重復50粒種子。類型1為雙層濕潤濾紙，類型2為育苗基質，類型3為濾紙+珍珠巖，類型4為1份珍珠巖+4份育苗基質，類型5為2份珍珠巖+3份育苗基質，類型6為1份珍珠巖+2份育苗基質，類型7為1份珍珠巖+1份育苗基質。

1.2.3 層積時間和赤霉素濃度 稱量8 g凈晾干的種子于含有雙層濕潤濾紙的培養皿中，置于6℃冰箱，設置4個層積時間：0 d、14 d、28 d、42 d，依照層積時間取用。將層積后的種子置于45℃水浴鍋中浸種60 min，取下層種子使用。同一層積時間浸泡的種子于不同濃度赤霉素(0 mg/L、150 mg/L、300 mg/L、450 mg/L、600 mg/L、750 mg/L、900 mg/L)中浸泡24 h，再用蒸餾水沖洗4～5次。4個層積時間和7個赤霉素濃度組合共28個處理，每個處理3次重復，每個重復100粒種子。將處理好的種子置于含濕潤濾紙的培養皿中培養。

2 結果分析

2.1 赤霉素濃度溫水浸種時間對野生中華獼猴桃種子萌發的影響

由表1可知，當赤霉素濃度為0時，隨浸種時間的增加發芽率逐漸升高，40 min時最高，為4.77%；當浸種時間為0 min時，隨赤霉素濃度的增加，種子的發芽率先增后降，赤霉素濃度為600 mg/mL的發芽率最高，為26.57%；在不同赤霉素濃度下，隨浸種時間的增加，發芽率均逐漸增高，浸種60 min為最佳浸泡時間。在不同浸種時間下，隨著赤霉素濃度的增加發芽率均先增后降，赤霉素的最佳濃度為600 mg/L。浸種60 min，赤霉素濃度為600 mg/L時，野生中華獼猴桃種子發芽率最高，為45.1%。

表1 赤霉素濃度浸種時間處理野生中華獼猴桃種子的發芽率Table 1 Germination rate of wild A. chinensis seeds treated with various gibberellin concentration and soaking time

2.2 不同類型萌發床對野生中華獼猴桃種子萌發的影響

由表2可知，隨珍珠巖的增加種子萌發芽率降低。使用純基質和濾紙的種子發芽率、發芽勢極顯著高于其他處理，而使用基質的種子發芽率顯著高于濾紙40%，但兩者發芽勢差異不明顯，只相差7百分點。因此使用純基質做萌發床相比濾紙可提高野生中華獼猴桃的種子發芽率、發芽勢。

表2 不同類型萌發床野生中華獼猴桃種子的萌發情況Table 2 Germination of wild A. chinensis seeds using seven types of germination beds

2.3 層積時間+赤霉素濃度對野生中華獼猴桃種子萌發的影響

由表3可知，在各個赤霉素濃度下，隨層積時間的增加，發芽率、發芽勢先增后降，隨赤霉素濃度的增加，變化速度放緩。層積14 d與各赤霉素濃度組合的發芽率、發芽勢高于其他組合，赤霉素濃度為0時發芽率最大，為74%；層積時間為0 d時，隨赤霉素濃度的增加，發芽率先增后降，赤霉素濃度為600 mg/L時的發芽率最大，為41%。說明，層積時間對野生中華獼猴桃種子萌發有較大影響。隨層積時間的變化，與之組合的最佳赤霉素濃度有變化。層積時間為0 d時，隨赤霉素濃度的增高，發芽率先升后降，發芽勢呈“N”形變化，赤霉素濃度600 mg/L時的發芽勢為16.67%；層積時間14 d時，隨著赤霉素濃度的升高發芽率一直下降，發芽勢呈“W”形變化，赤霉素濃度為0 mg/L時發芽率最高，為74%，發芽勢為53.67%；層積28 d時，隨著赤霉素濃度升高發芽率基本呈上升趨勢，發芽勢呈“M”形變化，赤霉素濃度為900 mg/L時，發芽率最高，為37.56%，發芽勢為22%；層積時間為42 d時，發芽率隨著赤霉素濃度的增高均呈上升趨勢，發芽勢先升后降再升最后下降，赤霉素濃度為900 mg/L發芽率最高，為33.69 %，發芽勢為8.67 %；發霉情況隨層積時間的增加而增多，層積14 d少，42 d較多。說明，層積14 d與赤霉素濃度0 mg/L組合處理的種子發芽率、發芽勢最高，且發霉率低，此組合最佳。

表3 層積時間+赤霉素濃度處理野生中華獼猴桃種子的萌發情況Table 3 Germination of wild A. chinensis seeds treated with stratification time and gibberellin concentration

3 結論與討論

3.1 赤霉素濃度和溫水浸種時間對種子萌發的影響

種子萌發需要充足的水分，溫水浸種能促進種子吸水，適合的浸泡時間有利于種子萌發。赤霉素有打破休眠促進萌發的作用，適合的濃度能增大種子發芽率且提高效率節約資源，因此找到最佳條件非常重要。研究結果表明，隨溫水浸種時間的增加，種子發芽率增加，隨赤霉素濃度的增加，種子發芽率先升后降，浸種時間和赤霉素共同促進種子萌發但赤霉素處理的種子萌發率遠高于浸種時間的處理。浸種時間為60 min，赤霉素為600 mg/L時發芽率較高。在不使用赤霉素的情況下，溫水浸種20 min后對其萌發影響不大，最高發芽率為4.77%，而種子不浸泡溫水，赤霉素濃度為600 mg/L時發芽率達26.57%。浸泡時間為60 min，赤霉素濃度為600 mg/L時發芽率達45.1 %，因此最佳浸種時間為60 min。與李紅莉等[14]的軟棗獼猴桃溫水浸種時間相同，而安成立等[15]的秦美獼猴桃浸泡時間為20～30 min。可能是因為溫水浸種時間與赤霉素相比對獼猴桃種子萌發的影響較小而選擇的時間。

3.2 濾紙和基質配比對種子萌發的影響

種子萌發大多數情況下采用雙層濕潤濾紙做萌發床，但在培養箱中使用濾紙水分易流失需要不斷噴水增加濕度，此方法增加工作量的同時還影響種子萌發。為解決這個問題，試驗采用基質+珍珠巖混合做萌發床。彭思華等[17]在探究河沙、鋸末、森林土∶炭渣(6/4)對滇清岡種子萌發的影響表明：森林土+炭渣可以極顯著的提高種子的發芽率和發芽勢。周曉慧等[18]探究基質對珍稀瀕危植物四川牡丹種子萌發的影響表明，不同基質的種子生根率有極大差異，草炭土生根效果顯著高于沙土，這與基質理化性質有關。趙娜等[19]研究表明，草炭與珍珠巖混合基質配比30%的表土利于種子萌發，采用純基質能顯著提高種子發芽率且增大發芽勢，萌發效果優于濾紙。

3.3 層積時間+赤霉素濃度對種子萌發的影響

屈德洪等[9-16]研究表明，低溫層積、赤霉素處理對獼猴桃種子的萌發有較好作用。研究結果表明，隨低溫層積時間的增加，種子發芽率呈先上升后下降的變化，層積14 d時層積的效果優于赤霉素處理，同時赤霉素有減弱層積對萌發的作用。赤霉素濃度為0 mg/L、層積14 d時，發芽率、發芽勢最高。層積0 d隨赤霉素濃度增加發芽率增加，層積14 d隨赤霉素濃度增加發芽率降低，而14 d之后層積28 d、42 d都表現為隨赤霉素濃度增加發芽率增加。荊泉凱[20]研究指出，不同層積時間過程中，內源赤霉素的變化趨勢是前期升高至一定數值后小幅降低。恰好解釋研究中種子萌發率的變化情況。大部分采用赤霉素來打破種子休眠的研究表明，赤霉素對種子萌發有促進作用，且隨其他條件的改變，所對應的最佳赤霉素濃度有差異[12，20-21]。試驗結果也顯示，層積0 d時，與之組合的最佳赤霉素濃度為600 mg/L，而層積14 d時，與之組合的最佳赤霉素濃度為0 mg/L。有研究指出，隨層積時間的變化除內源赤霉素發生改變影響種子萌發之外，其抗氧化酶類的活性先上升后下降，種子內生長素含量不斷上升至穩定，同時與赤霉素有拮抗作用的脫落酸含量持續降至一定數值，都有利于種子的萌發，而赤霉素浸泡處理時間短，通常只會快速引起種子內部赤霉素的變化，其他變化不大，所以層積14 d與各個赤霉素濃度組合的發芽率、發芽勢都高于其他組合[20]。當赤霉素濃度為0 mg/L時，試驗的萌發條件就變成了變溫培養條件下層積處理14 d時的發芽率、發芽勢最大，與魯松等[16]的研究結果一致。變溫、低溫層積、赤霉素浸泡都能夠使種子內的赤霉素含量發生變化，所以三者組合對種子萌發的作用不能簡單的歸為促進或抑制，其促進或抑制作用與各條件作用下種子內部相關物質的產生及含量有關，當種子內部狀態最佳時種子萌發情況最好。至于每種獼猴桃種子最佳萌發時期的赤霉素含量、相關有利于種子萌發的物質及含量、各處理條件下種子內部物質的變化及對種子萌發的影響等均需進一步深入探究。